Visualizzazione e mappatura di placche amiloidi marcate con metossi-X04 in una sezione cerebrale di topo con malattia di Alzheimer

Inizia con una sezione di tessuto cerebrale di topo contenente la regione di interesse in un tampone per mantenere l'idratazione durante l'imaging.

Il tessuto è ottenuto da un modello murino di Alzheimer iniettato con metossi X04, un colorante fluorescente.

Methoxy X04 si lega specificamente alle strutture a fogli pieghettati di β nelle placche amiloidi e mantiene la sua fluorescenza per l'imaging e l'analisi.

Utilizzando un microscopio a fluorescenza con filtro UV, eccitare il metossi-X04 e catturare la fluorescenza emessa per visualizzare le placche amiloidi marcate in fluorescenza contro il tessuto circostante.

Senza regolare il tavolino del microscopio, è possibile acquisire immagini della stessa regione in modalità campo chiaro per dettagliare la struttura dei tessuti e in modalità fluorescenza per visualizzare le placche.

Allinea le immagini in campo chiaro e fluorescenti utilizzando il software di elaborazione delle immagini per mappare con precisione le placche sulle strutture anatomiche.

Queste immagini forniscono una visualizzazione dettagliata delle placche amiloidi nel loro contesto strutturale per studiare la patologia della malattia di Alzheimer.

Con l'aiuto di un atlante cerebrale stereotassico di topo, selezionare le sezioni cerebrali contenenti la regione di interesse e posizionare ciascuna sezione in crioprotettore in un pozzetto di una piastra di coltura a 24 pozzetti. Quindi, utilizzare una pipetta monouso per aggiungere una goccia di PBS su un vetrino da microscopio, quindi posizionare la sezione sulla gocciolina.

Esaminare la sezione al microscopio a fluorescenza per identificare le regioni contenenti placche A-beta marcate con metossi-X04. Senza spostare il tavolino del microscopio, è possibile acquisire immagini delle regioni di interesse in campo chiaro e in modalità fluorescenza. Ogni immagine deve mostrare la stessa regione in entrambi i campi per correlare la placca alla regione strutturale della sezione di tessuto.

Salva e assegna un nome alle immagini scattate in base al numero dell'animale. Inoltre, registrare il numero del pozzo nella targa e il campo delle foto scattate. Riposizionare la sezione nel pozzetto designato una volta completata l'imaging. Esamina la sezione successiva della sequenza utilizzando la stessa procedura per evitare di asciugare le sezioni.

Per allineare le immagini, aprire le immagini del campo chiaro e del campo UV per la stessa ROI nell'immagine J. Quindi, usa il mosaico J Plugin per allineare i bordi delle due immagini. Salva l'immagine allineata e combinata in base al numero del pozzetto in una cartella, con il numero dell'animale in questione. Combina le immagini di diverse sezioni dello stesso animale per identificare e localizzare le placche nella regione di interesse.