JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:07 min • May 29th, 2025
Inizia con una piastra a più pozzetti contenente sferoidi tumorali, un aggregato di cellule tumorali tridimensionale.
Posizionalo su una tomografia a coerenza ottica, o stadio di imaging OCT, assicurandoti che sia stabilizzato per un imaging accurato.
Regolare l'obiettivo per una messa a fuoco ottimale della luce, impostare i parametri di scansione e avviare l'acquisizione delle immagini nel tempo.
Quando la luce interagisce con le cellule, si riflette a intensità variabili a seconda delle strutture cellulari e delle profondità.
L'OCT cattura queste intensità di luce riflessa e costruisce immagini in sezione trasversale bidimensionale ad alta risoluzione su piani diversi.
Spostare la piastra per acquisire le immagini degli sferoidi tumorali da tutti i pozzetti.
Utilizzando il software, allinea queste immagini ed elaborale per creare un modello sferoidale tridimensionale, rivelandone le caratteristiche morfologiche, tra cui dimensioni, forma e struttura.
Nel corso del tempo, le cellule dello sferoide muoiono e le loro strutture danneggiate aumentano la diffusione della luce, riducendo l'intensità della luce riflessa.
Ciò differenzia le cellule vitali da quelle non vitali, consentendo il monitoraggio delle condizioni fisiologiche.
Il giorno dell'imaging degli sferoidi tumorali, rimuovere la piastra multipozzetto dall'incubatrice. Trasferirlo sotto il sistema di imaging OCT e posizionarlo sull'adattatore per lastre. Per regolare l'altezza della lastra, spostarla lungo la direzione z del tavolino di traslazione. Nel software di imaging personalizzato, impostare un intervallo di scansione OCT desiderato per coprire l'intero sferoide tumorale, a seconda delle sue fasi di sviluppo, e fare clic su Salva parametri per salvare l'impostazione.
Quindi, mostra le anteprime ottimizzate degli sferoidi tumorali xz e yz OCT. Acquisisci immagini OCT 3D degli sferoidi tumorali uno per uno per tutti i pozzetti della piastra contenente sferoidi. Per visualizzare l'immagine di anteprima, fare clic sul pulsante Anteprima. Per acquisire l'immagine dello Strumento di personalizzazione di Office, fare clic sul pulsante di acquisizione. Registrare l'intero processo di spostamento della fase di acquisizione dei dati OCT.
- Per garantire la qualità ottimale dell'immagine per tutti gli sferoidi tumorali, l'adattatore della piastra deve essere regolato con precisione e il volume medio deve essere lo stesso.
- Utilizzare un codice di elaborazione C++ personalizzato per elaborare set di dati OCT 3D di sferoidi tumorali per generare immagini strutturali OCT. Utilizzare le immagini OCT 2D in 3 piani xy, xz e yz in sezione trasversale lungo il baricentro dello sferoide per generare il collage di immagini sferoidi.