Imaging a doppia fluorescenza per identificare gli oligodendrociti differenziati

Prendiamo una coltura di cellule precursori degli oligodendrociti (OPC), isolate dal cervello di un cucciolo di ratto, che sono state indotte a differenziarsi in oligodendrociti. Le cellule sono fissate per preservare l'architettura cellulare.

Gli oligodendrociti differenziati esprimono la proteina basica della mielina, o MBP, un marcatore degli oligodendrociti maturi, mentre sia le OPC che le cellule differenziate esprimono il fattore di trascrizione degli oligodendrociti 2, o Olig2.

Applicare una soluzione che blocca la permeabilizzazione e incubare con agitazione, permeabilizzando le membrane cellulari e bloccando i siti di legame non specifici.

Aggiungere gli anticorpi primari mirati ai marcatori e incubare con agitazione per consentire il legame.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati, quindi aggiungere diversi anticorpi secondari coniugati con fluorofori specifici per gli anticorpi primari e incubare con agitazione.

Lavare le cellule, quindi inserirle in un sistema di imaging a doppia fluorescenza.

Utilizzare la luce di lunghezze d'onda specifiche per eccitare i fluorofori distinti e rilevare i segnali emessi per visualizzare i marcatori.

Identificare oligodendrociti differe