Visualizzazione dei mitocondri all'interno delle fibre nervose intraepidermiche
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:37 min. • May 29th, 2025
Inizia con una sezione di tessuto cutaneo epidermico contenente fibre nervose intraepidermiche o IENF, sottili terminazioni neuronali sensoriali.
Le IENF sono ricche di mitocondri, che forniscono energia per la trasmissione del segnale neuronale.
Il tessuto ha IENF, mitocondri e nuclei epidermici marcati in modo fluorescente.
Utilizzando un microscopio confocale invertito, acquisisci in sequenza segnali fluorescenti discreti a lunghezze d'onda appropriate per nuclei, IENF e mitocondri.
Attiva una scansione in tempo reale per catturare il segnale IENF, che comprende lo strato epidermico.
Quindi, eseguire la scansione sequenziale per ciascun segnale per eliminare la diafonia del segnale di fluorescenza.
Dall'immagine combinata, utilizzando il software, ritagliare e isolare le cellule epidermiche a fluorescenza blu.
Quindi, elaborare l'area ritagliata per migliorare la risoluzione dei segnali IENF verdi e dei segnali mitocondriali rossi.
Quindi, genera un'immagine di superficie 3D per creare una maschera per gli IENF, quindi sovrapponila all'immagine della superficie mitocondriale per isolare i mitocondri specifici del nervo.
Nell'output finale, gli IENF appaiono in ciano, mentre i mitocond
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