JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:25 min. • May 29th, 2025
Prendi una sezione di tessuto cerebrale di topo rifilata e incorporata in resina contenente l'ippocampo.
La sezione viene colorata con metalli pesanti per migliorare il contrasto al microscopio elettronico.
Montare la sezione su un perno di alluminio utilizzando colla cianoacrilica.
Rivestire i lati del blocco con pasta d'argento colloidale per creare un percorso conduttivo verso il perno di alluminio.
Esaminare il blocco di tessuto utilizzando un microscopio elettronico a scansione seriale (SBFSEM).
All'interno dell'SBFSEM, l'ultramicrotomo taglia in sequenza il blocco in strati ultrasottili mentre un fascio di elettroni a bassa tensione scansiona la superficie esposta.
Un rivelatore di elettroni retrodiffuso cattura immagini 2D ad alta risoluzione, rivelando i mitocondri e le strutture cellulari circostanti.
Utilizzando un software appropriato, regolare la luminosità e il contrasto per migliorare la nitidezza dell'immagine.
Allinea le immagini sequenziali per ricostruire un volume 3D del tessuto cerebrale. Questa ricostruzione 3D consente una mappatura precisa della morfologia mitocondriale, della distribuzione spaziale e delle loro relazioni all'interno dei compartimenti neuronali.
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