$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Prendi una sezione di tessuto cerebrale di topo rifilata e incorporata in resina contenente l'ippocampo.
La sezione viene colorata con metalli pesanti per migliorare il contrasto al microscopio elettronico.
Montare la sezione su un perno di alluminio utilizzando colla cianoacrilica.
Rivestire i lati del blocco con pasta d'argento colloidale per creare un percorso conduttivo verso il perno di alluminio.
Esaminare il blocco di tessuto utilizzando un microscopio elettronico a scansione seriale (SBFSEM).
All'interno dell'SBFSEM, l'ultramicrotomo taglia in sequenza il blocco in strati ultrasottili mentre un fascio di elettroni a bassa tensione scansiona la superficie esposta.
Un rivelatore di elettroni retrodiffuso cattura immagini 2D ad alta risoluzione, rivelando i mitocondri e le strutture cellulari circostanti.
Utilizzando un software appropriato, regolare la luminosità e il contrasto per migliorare la nitidezza dell'immagine.
Allinea le immagini sequenziali per ricostruire un volume 3D del tessuto cerebrale. Questa ricostruzione 3D consente una mappatura precisa della morfologia mitocondriale, della distribuzione spaziale e delle loro relazioni all'interno dei compartimenti neuronali.
Taglia i campioni nell'area di interesse e montali su un perno di alluminio utilizzando la supercolla cianoacrilato gelificante. Quindi rivestire il campione con pasta d'argento colloidale attorno ai lati del blocco per fornire un percorso conduttivo al perno di alluminio. Esaminare i campioni di tessuto utilizzando un sistema di microscopio elettronico a scansione dotato di un tavolino ultramicrotomo in camera e di un rivelatore di elettroni retrodiffusi a basso kilovolt.
Immagine dei campioni con queste impostazioni. Inizia l'analisi selezionando il tipo di immagine, quindi 8 bit per convertire le immagini in formato TIFF a 8 bit dal 16 bit proprietario originale. Se la conversione automatica del contrasto e/o della luminosità durante questo passaggio non è ideale per le immagini, riaprire le immagini a 16 bit e premere image. Regola il contrasto della luminosità.
Selezionare un intervallo che funzioni per tutte le immagini e premere Applica. Quindi eseguire la conversione. Se si verifica un movimento inaccettabile dell'immagine tra le sezioni, allineare le pile di immagini selezionando Plug-in, Registrazione e allineamento pila lineare con SIFT e impostare l'allineamento per la modalità solo traslazione anziché per il corpo rigido.
Ingrandisci le dimensioni della tela prima della registrazione selezionando l'immagine per regolare le dimensioni della tela. In alternativa, riducete l'immagine a un'area di interesse selezionando l'area desiderata e ritagliandola. Se necessario, ridimensionare le immagini a una dimensione più piccola e gestibile utilizzando l'immagine j, quindi selezionando l'immagine e la scala.