Identificazione dei sottotipi di cellule gangliari retiniche di topo mediante tracciatura fluorescente

Posizionare un tessuto retinico isolato da un topo transgenico con cellule gangliari retiniche marcate in fluorescenza, o RGC, in una camera di registrazione.

Le informazioni visive vengono trasmesse alle RGC, i cui assoni le trasmettono al cervello attraverso il nervo ottico.

I

sottotipi RGC si distinguono per i modelli ramificati dei loro dendriti, che si stratificano in sottostrati all'interno dello strato retinico interno.

Appiattire il tessuto retinico e fissarlo con un ancoraggio tissutale.

Trasferire la camera su un tavolino da microscopio e perfondere una soluzione ossigenata per mantenere la vitalità dell'RGC.

Utilizzando l'illuminazione a infrarossi, identificare gli RGC fluorescenti.

Posizionare una pipetta contenente un tracciante fluorescente su un RGC.

Applicare una pressione positiva per evitare l'intasamento.

Passare alla pressione negativa, aspirando la membrana nella pipetta per formare una guarnizione.

Applicare l'aspirazione per rompere la membrana, stabilendo una configurazione a cellula intera che facilita la diffusione del tracciante nei dendriti.

Osservare la morfologia e la stratificazione dendritica per identificare i sottotipi RGC.

Lavare la retina nella soluzio