JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:33 min. • May 29th, 2025
Iniziare con un gruppo di perfusione posizionato sul tavolino di un microscopio invertito.
L'assemblaggio di perfusione contiene un nervo periferico sezionato fissato tra un vetrino coprioggetti e un vetrino per microacquedotto con perfusione salina continua.
Gli assoni mielinizzati del nervo esprimono i neurofilamenti verdi marcati con fluorofori.
Utilizzando l'illuminazione a campo chiaro, concentrarsi sugli assoni mielinizzati.
Passa alla modalità confocale, fotosbianca con un'elevata potenza laser, quindi acquisisci un'immagine di riferimento a bassa autofluorescenza utilizzando una bassa potenza laser.
Disegna linee parallele lungo l'assone per definire la lunghezza della finestra di fotoattivazione. Usalo come guida per creare una regione di attivazione rettangolare.
Illumina questa regione con una lunghezza d'onda specifica per attivare i neurofilamenti verdi marcati con fluoroforo, provocandone la fluorescenza. Acquisisci l'immagine.
Dopo l'attivazione, acquisire immagini time-lapse.
Nel tempo, i neurofilamenti fluorescenti si muovono in entrambe le direzioni e si diffondono nelle regioni adiacenti ai fianchi.
La comparsa di fluorescenza nelle regioni fiancheggianti adiacenti alla r
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