JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:52 min. • May 29th, 2025
Inizia impostando la luce di eccitazione per il microscopio a due fotoni.
Prendete un cucciolo di topo transgenico anestetizzato con una finestra circolare di imaging in vetro e una piastra per la testa impiantata nel cranio.
I neuroni esprimono proteine fluorescenti rosse per facilitare l'imaging.
Pulire la finestra di imaging in vetro e fissare il cucciolo sullo stadio di imaging a due fotoni.
Allineare la finestra di imaging con l'obiettivo del microscopio regolando la testa del cucciolo.
Usa un termoforo per mantenere la temperatura corporea del cucciolo.
Regolare la portata dell'anestetico.
Applicare una goccia d'acqua sul vetrino coprioggetti, quindi abbassare la lente dell'obiettivo del microscopio.
La microscopia a due fotoni utilizza due fotoni di luce per attivare le proteine fluorescenti, consentendo un imaging neuronale dettagliato con rumore di fondo e fotosbiancamento minimi.
Cattura immagini dei neuroni a varie profondità per visualizzare la loro struttura
Infine, impila le immagini per generare una rappresentazione tridimensionale del neurone, comprese le loro proiezioni neuronali, per studiare i cambiamenti morfologici legati alla crescita.
Per iniziare l'imaging, impostare
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