Imaging a bioluminescenza per lo studio dei transitori di calcio nelle strutture cerebrali di Drosophila

Fissare una Drosophila transgenica immobilizzata con la testa esposta in una camera di registrazione su un tavolino per microscopio a fluorescenza.

Il corpo del fungo della mosca comprende neuroni che esprimono la proteina di fusione bioluminescente sensibile al calcio, che viene attivata da un cofattore precaricato.

Collegare un tubo di perfusione alla camera. Individua i corpi dei funghi fluorescenti, concentrandoti sul calice e sui lobi mediali. Confermare il drenaggio con il tampone. Impostare

i parametri di imaging e concentrarsi sul calice e sui lobi mediali. Al buio, acquisire immagini a fluorescenza di base dei corpi dei funghi prima dell'esposizione agli stimolanti.

Perfondere la nicotina nel tampone contenente calcio per attivare i recettori nicotinici dell'acetilcolina, innescando l'afflusso di calcio e l'emissione di luce bioluminescente.

Perfondere il

cloruro di potassio per depolarizzare i neuroni, innescando il rilascio intracellulare di calcio e l'emissione di segnali bioluminescenti.

Lavare con tampone per ripristinare le condizioni basali.

Analizzare le immagini per valutare l'attività spaziale e temporale del calcio nel calice e nei lobi mediali.

- Quindi, posizionar