Ablazione neuronale mirata mediante microscopia a due fotoni in una larava di pesce zebra

Iniziare con una larva di pesce zebra transgenica anestetizzata immobilizzata nell'agarosio e posta in una capsula di Petri contenente una soluzione anestetica.

Posizionalo sotto un microscopio laser a due fotoni, che utilizza due fotoni per l'imaging dettagliato.

Concentrati sugli strati superiore e inferiore del cervello per stabilire i limiti dell'imaging.

Cattura immagini a varie profondità per osservare i neuroni prima del trattamento laser.

Regola la messa a fuoco sulla regione di interesse e regola le dimensioni del fotogramma per perfezionare la messa a fuoco sui neuroni.

Seleziona e irradia i neuroni utilizzando il laser a due fotoni.

Il laser induce calore localizzato, con conseguente morte neuronale con danni minimi ai tessuti circostanti. Cattura l'immagine.

Confronta le immagini pre e post-trattamento per valutare le variazioni della fluorescenza.

Rifocalizzare i neuroni su piani più profondi e ripetere l'irradiazione per trattare tutti i neuroni nella regione di interesse.

Acquisire nuovamente l'immagine e confrontarla con l'immagine di pre-trattamento. La perdita di fluorescenza dopo il trattamento laser conferma il successo dell'ablazione neuronale.

Posizionare la larva incl