Imaging a fluorescenza dell'aggregazione della proteina PolyQ nei neuroni di Caenorhabditis elegans

Iniziare con i vermi Caenorhabditis elegans anestetizzati, di pari età e con deficit di chaperone.

Entrambi i gruppi esprimono proteine polyQ marcate con fluorofori nei loro neuroni che sono inclini a ripiegarsi erroneamente.

Nei vermi di controllo, le proteine chaperone limitano l'aggregazione di polyQ mal ripiegata, mentre, nei vermi carenti di chaperone, il polyQ mal ripiegato forma facilmente aggregati.

Posizionare il vetrino di controllo su un tavolino confocale per microscopia per la microscopia FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).

Illuminare i vermi utilizzando un laser pulsato.

Il laser eccita il fluoroforo, che emette un fotone quando ritorna allo stato fondamentale.

FLIM misura la durata della fluorescenza, ovvero la durata in cui il fluoroforo rimane nel suo stato eccitato.

Nei vermi carenti di chaperone, l'aggregazione polyQ raggruppa i fluorofori, promuovendo il trasferimento di energia tra fluorofori adiacenti invece dell'emissione di fotoni, riducendo così la durata della fluorescenza.

Il software FLIM elabora queste durate per generare mappe codificate a colori, consentendo la visualizzazione dell'aggregazione.

Una ridotta durata della fluorescenza nei ver