JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:57 min. • June 17th, 2025
Posizionare un ratto anestetizzato sulla stazione di imaging con una maschera nasale per mantenere l'anestesia.
Rimuovere il pelo intorno alle orecchie e al collo per evitare interferenze con l'ecografia.
Disponi l'animale in modo che estenda gli arti. Applicare la crema per elettrodi ai sensori e fissare le zampe per monitorare i parametri vitali.
Applicare il gel per ultrasuoni sulla testa e sul trasduttore del ratto per un'efficace trasmissione degli ultrasuoni.
Quindi, inclinare il piano di lavoro per esporre il lato temporale della testa.
Allineare il trasduttore verticalmente per visualizzare le strutture cerebrali più profonde.
Impostare i parametri di acquisizione B-Mode degli ultrasuoni. Durante l'imaging, il trasduttore emette onde ultrasoniche che si riflettono sulle interfacce tissutali, generando una mappa in scala di grigi dell'anatomia del cervello.
Regolare il trasduttore in modo che si allinei con la regione cerebrale target.
Passa alla modalità Color Doppler per visualizzare i vasi sanguigni del cervello.
Regola i parametri per consentire il rilevamento in tempo reale della velocità e della direzione del flusso sanguigno.
Sdraiare il ratto su un piano di lavoro della stazione di ecografia e imaging fotoacustico e posizionare rapidamente il naso all'interno dell'apposita maschera, fornendo un flusso di anestesia costante. Per radere l'animale, stendere uno strato consistente di crema depilatoria sulla superficie della testa, coprendo le aree circostanti le orecchie e il collo. Dopo aver lasciato agire la crema per alcuni minuti, estrarla delicatamente con una spatola. Rimuovere delicatamente tutti i resti di crema con una spugna bagnata per pulire accuratamente la pelle.
Per posizionare il topo, sistemare l'animale in una posizione di aquila divaricata. Appoggiare le zampe sui sensori dei parametri vitali sul piano di lavoro dopo aver applicato alcune gocce di crema per elettrodi per monitorare i parametri vitali. Infine, fissare gli arti con un cerotto di seta artificiale ipoallergenico.
Quindi smaltire uno strato consistente di gel ipoallergenico e idrosolubile per la trasmissione degli ultrasuoni sulla testa dell'animale. Coprire la testa del trasduttore con uno strato sottile dello stesso gel e metterla a contatto con lo strato sul ratto. Solleva la testa dell'animale e ruotala leggermente su un lato.
Utilizzare un rotolo di cotone come supporto, mantenendo il muso ben inserito nella maschera per anestesia. Inclinare il piano di lavoro con un angolo di circa 30 gradi rispetto al piano orizzontale. Ruotare il trasduttore di imaging di un angolo di circa 30 gradi rispetto al piano verticale.
Per l'acquisizione di immagini anaatomiche e vascolari a ultrasuoni e fotoacustiche, attivare la scansione di imaging. Inserire l'acquisizione dell'immagine in modalità B e impostare correttamente tutti i parametri di acquisizione dell'immagine per rispettare i possibili requisiti dell'esperimento. Impostare la frequenza del centro di trasmissione al livello più basso possibile per avere la massima profondità di penetrazione del trasduttore.
Avvia l'acquisizione dell'immagine in modalità B e regola il posizionamento del trasduttore in tempo reale identificando i riferimenti anatomici e centrando la regione di interesse sul punto centrale del monitor. Posizionare il trasduttore per allinearlo all'asse virtuale, collegando l'orecchio all'occhio per ottenere una focalizzazione ottimale del fascio. Acquisisci diverse viste del volume interno del cervello mediante rotazione in senso orario o antiorario. Assicurarsi che la regione cerebrale di interesse si localizzi a 10 millimetri di profondità rispetto alla sorgente del trasduttore laser a ultrasuoni per ricevere un segnale di risposta fotoacustica ottimale.
Successivamente, entra in modalità color Doppler per visualizzare i vasi sanguigni interni del cervello in modo altamente sensibile. Quindi, scegliere il parametro di acquisizione desiderato impostato in modalità Color Doppler. Acquisisci immagini in questa modalità per distinguere le velocità e le direzioni del flusso sanguigno fino a diversi millimetri di profondità di penetrazione.