Imaging di cellule vive della migrazione nucleare gliale di Muller durante la rigenerazione retinica del pesce zebra

Iniziare con un espiante di retina dorsale incorporato in agarosio da un pesce zebra transgenico, montato in un fluoropiatto con terreno.

La retina mostra un danno ai fotorecettori indotto dalla luce e contiene cellule gliali di Muller o MGC con nuclei che esprimono GFP.

Posizionare il piatto in una camera per microscopio multifotone.

Utilizzando l'illuminazione a campo chiaro, concentrarsi sulla retina.

Passa alla modalità di fluorescenza per localizzare gli MGC.

Configura uno z-stack dallo strato di celle gangliari o GCL allo strato nucleare esterno o ONL.

Avvia l'imaging dal vivo.

I fotorecettori danneggiati rilasciano TNF-α, attivando le MGC.

I nuclei di MGC migrano basalmente all'interno dello strato nucleare interno o INL per replicare il loro DNA.

Quindi, i nuclei migrano apicalmente verso l'ONL per andare incontro a mitosi, producendo progenitori neuronali.

Dopo la mitosi, i nuclei e i progenitori MGC migrano basalmente verso l'INL.

I progenitori proliferano, migrano verso il sito della lesione e si differenziano in fotorecettori, consentendo la rigenerazione retinica.

Analizza le immagini acquisite per visualizzare la migrazione nucleare.

Nel software di acquisizione delle immagini, a