JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:56 min • June 17th, 2025
Prendi una piastra multipozzetto rivestita di polimero contenente cellule della corteccia cerebrale primaria embrionale di topo, come le cellule progenitrici e neuronali. Le cellule progenitrici vengono trasfettate per esprimere proteine fluorescenti per l'etichettatura e il tracciamento.
Trasferire la piastra nella camera di incubazione preriscaldata di un microscopio a fluorescenza invertita per ottenere un ambiente di imaging stabile.
Individuare la posizione di riferimento sulla lastra per ottenere posizioni di imaging coerenti.
Selezionare più campi di imaging per pozzetto a un ingrandimento maggiore per massimizzare la probabilità di osservare le cellule trasfettate.
A intervalli regolari, acquisisci simultaneamente immagini a contrasto di fase per rivelare la morfologia e la dinamica cellulare e immagini fluorescenti per monitorare l'espressione proteica fluorescente.
Confronta le immagini time-lapse, a contrasto di fase e fluorescenti per monitorare la divisione e la differenziazione delle cellule progenitrici in linee neurali.
Per visualizzare le cellule trasdotte da retrovirus, posizionare la piastra di coltura tissutale in una camera di imaging collegata a controller di temperatura e anidride carbonica per mantenere le cellule a condizioni costanti di 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica.
Selezionare una posizione sull'asse XY che funga da punto zero e calibrare il punto zero. Selezionare da 10 a 15 posizioni per pozzetto da visualizzare con un ingrandimento di 10 volte. Impostare il software per acquisire immagini a contrasto di fase ogni cinque minuti e immagini a fluorescenza ogni tre ore per ridurre la fototossicità. Controllare e regolare la messa a fuoco nelle prime tre ore dell'esperimento, poiché potrebbe cambiare mentre la temperatura si equilibra.