Imaging time-lapse di cellule primarie della corteccia cerebrale di topo trasfettate

Prendi una piastra multipozzetto rivestita di polimero contenente cellule della corteccia cerebrale primaria embrionale di topo, come le cellule progenitrici e neuronali. Le cellule progenitrici vengono trasfettate per esprimere proteine fluorescenti per l'etichettatura e il tracciamento.

Trasferire la piastra nella camera di incubazione preriscaldata di un microscopio a fluorescenza invertita per ottenere un ambiente di imaging stabile.

Individuare la posizione di riferimento sulla lastra per ottenere posizioni di imaging coerenti.

Selezionare più campi di imaging per pozzetto a un ingrandimento maggiore per massimizzare la probabilità di osservare le cellule trasfettate.

A intervalli regolari, acquisisci simultaneamente immagini a contrasto di fase per rivelare la morfologia e la dinamica cellulare e immagini fluorescenti per monitorare l'espressione proteica fluorescente.

Confronta le immagini time-lapse, a contrasto di fase e fluorescenti per monitorare la divisione e la differenziazione delle cellule progenitrici in linee neurali.

Per visualizzare le cellule trasdotte da retrovirus, posizionare la piastra di coltura tissutale in una camera di imaging collegata a controller di tempe