Imaging ex vivo della migrazione postnatale delle cellule dei granuli cerebellari mediante macroscopia confocale

Inizia con una fetta cerebellare ottenuta dal cervello di un cucciolo di ratto postnatale in una piastra a più pozzetti contenente terreno.

Rimuovere il terreno e incubare la fetta in una soluzione di colorante fluorescente citoplasmatico per marcare le cellule granulari (GC).

Trasferire la fetta su una membrana di inserimento transwell e rimuovere il colorante in eccesso.

Rimuovere l'inserto e riempire il pozzetto con il fluido. Quindi, sostituire l'inserto e aggiungere il terreno per coprire il tessuto.

Incubare per consentire al tessuto di attaccarsi alla membrana dell'inserto.

Trasferire la piastra in un'incubatrice collegata a un macroscopio confocale e posizionare un coperchio di vetro sulla piastra.

Impostare le condizioni di coltura, incubare ulteriormente il tessuto, quindi iniziare l'imaging.

Dopo l'illuminazione laser, i GC marcati diventano fluorescenti.

Acquisisci immagini time-lapse per visualizzare la migrazione radiale dei GC attraverso lo strato molecolare del cervelletto.

Utilizzando il software di imaging, analizzare la distanza migratoria dei GC.

Dopo aver affettato il campione, utilizzare una pipetta a bulbo bianco troncato per trasferirlo con un po' di HBSS in una pias