Imaging time-lapse della divisione delle cellule staminali neurali di topo mediante microscopia confocale

Prendi una piastra a più pozzetti contenente cellule staminali neurali aderenti o NSC isolate da un cervello di topo transgenico. Queste NSC contengono una proteina marcata in fluorescenza che è specifica per la prima fase di crescita, o G1.

Quando l'NSC si divide, diventa fluorescente nella fase G1 del ciclo cellulare mentre non emette fluorescenza nelle altre fasi.

Posizionare la piastra in una camera di imaging per microscopio a scansione laser confocale, mantenuta a temperatura controllata.

Selezionare l'obiettivo desiderato e regolare l'intensità della fluorescenza.

Configurare i parametri per l'imaging time-lapse.

Scegli l'opzione dell'immagine grande e programma l'acquisizione delle immagini a intervalli regolari per la durata desiderata.

Utilizzare uno scanner risonante ad alta velocità per evitare il fotosbiancamento e mantenere un'alta risoluzione.

Utilizzare l'impostazione del campo chiaro per visualizzare la forma della cellula e utilizzare un filtro fluorescente appropriato per catturare la fluorescenza.

Avviare l'imaging time-lapse dell'NSC per visualizzare le diverse fasi del ciclo cellulare.

Preparare un microscopio a scansione laser confocale per l'imaging preriscaldando l