Visualizzazione di un plesso coroideo cerebrale di topo mediante microscopia elettronica a scansione
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:23 min. • June 17th, 2025
Prelevare il plesso coroideo dal cervello di un topo in un cestello per campioni.
Il tessuto, situato all'interno dei ventricoli cerebrali, contiene uno strato di cellule epiteliali con microvilli sulla loro superficie apicale.
Incubare il tessuto in una soluzione fissativa per preservarne l'architettura cellulare.
Lavare con un tampone per rimuovere il fissativo in eccesso e stabilizzare il pH.
Incubare il tessuto con tetrossido di osmio che si lega ai lipidi della membrana cellulare, preservando la stabilità della membrana, quindi risciacquare il reagente in eccesso.
Disidratare il tessuto utilizzando concentrazioni crescenti di alcol per prevenire la distorsione dei tessuti durante l'imaging.
Asciugare il tessuto, fissarlo su un supporto per campioni rivestito di carbonio, quindi rivestirlo con uno strato di platino conduttivo.
Utilizzando la microscopia elettronica a scansione, focalizzare un fascio di elettroni sulla superficie. Lo strato di platino dissipa gli elettroni, prevenendo l'accumulo di carica e riducendo al minimo gli artefatti di imaging.
Un rivelatore cattura gli elettroni retrodiffusi dalla superficie, producendo un'immagine del tessuto che mostra cellule epiteliali con
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