Cos'è il plesso coroideo?

Il plesso coroideo è una rete di cellule nei ventricoli cerebrali responsabile della produzione di liquido cerebrospinale.

Perché la fissazione è importante nella preparazione del campione?

La fissazione preserva la struttura cellulare e previene la degradazione durante i successivi passaggi di lavorazione.

Quale ruolo svolge l'ossido di osmio nel protocollo?

L'ossido di osmio si lega ai lipidi della membrana cellulare, stabilizzando le membrane per un migliore imaging.

Come influisce la disidratazione sui campioni di tessuto?

La disidratazione previene la distorsione della struttura del tessuto durante l'imaging rimuovendo il contenuto d'acqua.

Qual è lo scopo del rivestimento del campione con platino?

Lo strato di platino dissipa gli elettroni durante la SEM, prevenendo l'accumulo di carica e minimizzando gli artefatti di imaging.

Visualizzazione di un plesso coroideo cerebrale di topo mediante microscopia elettronica a scansione

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

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Prelevare il plesso coroideo dal cervello di un topo in un cestello per campioni.

Il tessuto, situato all'interno dei ventricoli cerebrali, contiene uno strato di cellule epiteliali con microvilli sulla loro superficie apicale.

Incubare il tessuto in una soluzione fissativa per preservarne l'architettura cellulare.

Lavare con un tampone per rimuovere il fissativo in eccesso e stabilizzare il pH.

Incubare il tessuto con tetrossido di osmio che si lega ai lipidi della membrana cellulare, preservando la stabilità della membrana, quindi risciacquare il reagente in eccesso.

Disidratare il tessuto utilizzando concentrazioni crescenti di alcol per prevenire la distorsione dei tessuti durante l'imaging.

Asciugare il tessuto, fissarlo su un supporto per campioni rivestito di carbonio, quindi rivestirlo con uno strato di platino conduttivo.

Utilizzando la microscopia elettronica a scansione, focalizzare un fascio di elettroni sulla superficie. Lo strato di platino dissipa gli elettroni, prevenendo l'accumulo di carica e riducendo al minimo gli artefatti di imaging.

Un rivelatore cattura gli elettroni retrodiffusi dalla superficie, producendo un'immagine del tessuto che mostra cellule epiteliali con microvilli.

Per eseguire la preparazione del campione per il SEM, trasferire il plesso coroideo appena isolato in una soluzione di fissazione appena preparata e incubare per una notte a 4 gradi Celsius. Una volta terminato, lavare il campione tre volte utilizzando da 3 a 5 millilitri di tampone cacodilato di sodio molare 0,1 molare per cinque minuti ciascuno.

Post-fissare i campioni in 3-5 millilitri di tetrossido di osmio al 2% in tampone di cacodilato di sodio molare 0,1 molare per 30 minuti. Quindi lavare i campioni tre volte per cinque minuti ciascuno utilizzando da 3 a 5 millilitri di acqua ultrapura. Successivamente, disidratare i campioni in una serie crescente di concentrazioni di alcol etilico ghiacciato con 15 minuti per soluzione di alcol etilico. Utilizzare un essiccatore a punto critico per asciugare correttamente il campione. Posizionare con cura il campione su un supporto per campioni con un adesivo in carbonio e visualizzare i campioni del plesso coroideo utilizzando il SEM.