Microscopia olografica a due fotoni per studiare l'attività neurale e la connettività in un modello murino

Inizia con un topo sveglio posizionato sotto un microscopio olografico a due fotoni integrato con modulatori di luce spaziale o SLM.

Il topo tiene una piastra per la testa pre-impiantata.

Nel cervello del topo, i neuroni esprimono canali sensibili alla luce rossa e indicatori di calcio fluorescenti verdi che si legano agli ioni calcio.

Per studiare l'attività neurale e la connettività, impostare i parametri di imaging.

Usa un laser a 920 nanometri per eccitare gli indicatori legati al calcio all'interno dei neuroni. Cattura l'immagine a fluorescenza del neurone con un fotodanno minimo.

Reimpostare i parametri di imaging e focalizzare un raggio laser nel vicino infrarosso.

Gli SLM modellano il raggio laser in precisi modelli olografici che consentono la messa a fuoco selettiva sui neuroni bersaglio in più punti.

Questo stimola i canali sensibili alla luce, provoca l'afflusso di ioni calcio e migliora la fluorescenza dei neuroni bersaglio.

I neuroni bersaglio attivati trasmettono segnali ai neuroni collegati e aumentano la fluorescenza del neurone collegato.

Ancora una volta, cattura un'immagine a due fotoni. Un aumento della fluorescenza nei neuroni bersaglio e nei neuroni collegati conferma