Registrazione e colorazione juxtacellulare per una mappatura precisa dell'attività neurale in un ratto sveglio

0 views • 2:54 min • June 18th, 2025

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Inizia con un ratto trattenuto e sveglio in una maschera sperimentale, con la testa saldamente fissata in posizione.

Aprire la camera di registrazione precedentemente impiantata e rimuovere il rivestimento in gel di silicone.

Elimina il tessuto ricresciuto per accedere al cervello.

Aggiungere una goccia di soluzione salina per mantenere l'idratazione.

Quindi, collegare una pipetta di registrazione preriempita contenente colorante blu di Chicago a un micromanipolatore.

Abbassare la pipetta nella camera di registrazione fino a raggiungere la regione cerebrale target.

La pipetta entra in contatto con il neurone e registra i segnali provenienti dal neurone senza penetrarlo.

Ascolta questi segnali neuronali come clic udibili, quindi eroga impulsi elettrici attraverso la pipetta.

Questi impulsi iniettano il colorante adiacente al neurone, consentendo una colorazione precisa della regione cerebrale bersaglio.

Queste tecniche di registrazione e colorazione iuxtacellulare visualizzano con precisione il sito di registrazione e consentono una mappatura accurata dell'attività neurale nell'anatomia del cervello.

Metti il ratto nella calza di stoffa e trasferisci la calza di stoffa in un tubo rigido su un'appropriata dima sperimentale. Fissare la piastra di contenimento della testa sul ratto al pezzo corrispondente sulla maschera. Quindi, posiziona un dado 832 sul bullone di contenimento della testa che viene impiantato sul ratto.

Successivamente, avvitare un'asta filettata in acciaio inossidabile al bullone della testa. Successivamente, apri la camera di registrazione e rimuovi il gel di silicone. Pulire la craniotomia utilizzando una pinza fine se il tessuto è ricresciuto nella craniotomia. Utilizzare l'anestesia con isoflurano durante questo processo, se necessario.

Quindi, collegare la pipetta al micromanipolatore motorizzato. Spostare la pipetta nella posizione di registrazione desiderata negli assi anteriore, posteriore e laterale mediale. Quindi far avanzare la pipetta ventralmente attraverso la dura madre fino a quando non si trova a circa 500 micrometri dorsali rispetto alla posizione di registrazione prevista. Far avanzare lentamente la pipetta mentre si ascoltano gli eventi di picco su un monitor audio della tensione amplificata registrata. Una volta identificati gli eventi di picking, continuare a spostare la pipetta di circa 0-100 micrometri fino a quando le deflessioni di tensione positive sono superiori a circa 500 microvolt.

Per etichettare il sito di registrazione, impostare la sorgente di corrente su 4 microampere negativi con due secondi impulsi al 50% del ciclo di lavoro. E passare la corrente per quattro minuti per iniettare ionoforetico Chicago Sky Blue attraverso la pipetta.

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Last updated: 18 July 2026