JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:06 min. • June 17th, 2025
Iniziare con larve di pesce zebra transgenico anestetizzate in una camera di montaggio contenente un tampone fisiologico ossigenato sotto uno stereomicroscopio.
Il cervelletto nel cervello contiene neuroni di Purkinje geneticamente modificati che esprimono proteine citoplasmatiche fluorescenti.
Rimuovere il terreno in eccesso, quindi aggiungere l'agarosio fuso per immobilizzare le larve per un imaging stabile.
Orienta il lato dorsale delle larve verso l'alto per visualizzare il cervelletto.
Una volta solidificato, tagliare l'agarosio in eccesso. Usando un ago di vetro, asportare la pelle pigmentata sovrastante il cervello per esporla.
Capovolgere il blocco di agarosio su una camera di imaging contenente agarosio fuso per l'imaging al microscopio invertito.
Aggiungere il tampone fisiologico per preservare la funzione neuronale.
Posizionare la camera sotto un microscopio confocale invertito. Applicare la luce di eccitazione per eccitare le proteine fluorescenti, consentendo la visualizzazione dei neuroni marcati.
Le cellule pigmentate della pelle, se non rimosse, si disperdono e assorbono la luce di eccitazione, riducendo l'intensità della fluorescenza.
La rimozione della pelle migliora la pe
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