Una tecnica per l'aspirazione e il trattamento percutaneo degli spermatozoi dell'epididimo

Inizia con un paziente di sesso maschile con azoospermia, una condizione in cui lo sperma manca di gameti maschili o spermatozoi.

La zona genitale viene disinfettata e coperta con un telo per esporre solo lo scroto, l'organo che ospita i testicoli, che producono gli spermatozoi.

Illuminare la regione e identificare l'epididimo, una struttura responsabile della maturazione e della conservazione degli spermatozoi.

Inserire nel tessuto epididimo una siringa contenente una soluzione di coltura specializzata per gameti.

Applicare una pressione negativa mentre si perfora il tessuto per estrarre il liquido epididimico contenente spermatozoi.

Trasferire il liquido raccolto in una capsula contenente la soluzione di coltura per preservare la vitalità degli spermatozoi.

Usando un microscopio, conta gli spermatozoi maturi e sani che mostrano motilità.

Trasferire la soluzione in una provetta, quindi centrifugare per separare gli spermatozoi e rimuovere il surnatante.

Risospendere le cellule in una soluzione di coltura fresca.

Gli spermatozoi isolati sono ora pronti per l'uso nelle procedure di trattamento dell'infertilità.

Per iniziare, raccogli un pacchetto di strumenti chirurgici, due siringhe, una soluzione disinfettante, guanti di gomma sterili e una medicazione adesiva. Esaminare la confezione degli strumenti chirurgici che è stata sottoposta a sterilizzazione a vapore ad alta pressione per verificare che non sia danneggiata. Posizionare la confezione sul tavolo strumenti e aprire lo strato esterno. Successivamente, chiedi agli andrologi di indossare guanti di gomma sterili.

Aprire lo strato interno della confezione degli strumenti chirurgici e controllare che il nastro indicatore di sterilizzazione sia correttamente sterilizzato. Quindi, preparare due siringhe da 5 millilitri dotate di aghi da 0,7 millilitri per l'anestesia e la chirurgia. Aprire l'ampolla contenente lidocaina iniettabile. Utilizzare una siringa sterile da 5 millilitri per aspirare la soluzione di lidocaina ed eliminare le bolle d'aria dalla siringa.

Ora, posizionare il paziente preparato sul tavolo operatorio in posizione litotomica. Dopo aver tolto i pantaloni, fissare l'indumento superiore sopra l'ombelico per esporre completamente il perineo e il basso addome sotto l'ombelico. Quindi, regolare l'angolazione della lampada senza ombre per illuminare lo scroto del paziente.

Usa una pinza ovale per afferrare una palla di garza sterile. Immergere completamente la palla di garza in una soluzione disinfettante. E disinfettare la pelle, partendo dal basso addome e spostandosi verso la parte anteriore e interna delle cosce, l'area perineale, il pene e lo scroto. Quindi, posizionare un asciugamano quadrato sterile sotto i glutei del paziente. Stendere un asciugamano sterile intorno all'area chirurgica, esponendo completamente lo scroto in tutta l'area.

Utilizzando una pipetta sterile Pasteur, trasferire circa 2 millilitri di soluzione di coltura G-MPOS-PLUS nella piastra di coltura. Dopo aver chiuso il coperchio, consegnare il piatto all'infermiera in sala operatoria attraverso la finestra di trasferimento. A questo punto, posizionare il piatto di coltura sull'asciugamano sterile sul tavolo degli strumenti e aprire il coperchio.

Utilizzando un'altra siringa da 5 millilitri, aspirare circa 0,2 millilitri di soluzione di coltura G-MPOS-PLUS e rimuovere le bolle d'aria. Quindi, tenere lo scroto del paziente con la mano sinistra, fissando l'epididimo che richiede la puntura. Palpare l'epididimo con la mano destra per confermare la posizione della puntura chirurgica.

Successivamente, con una siringa da 5 millilitri contenente la soluzione di coltura G-MPOS-PLUS nella mano destra, perforare perpendicolarmente alla pelle nel tessuto epididimale. Mantenendo la pressione negativa, perforare ripetutamente il tessuto epididimo per consentire al fluido di entrare attraverso l'ago, quindi estrarre l'ago da puntura.

Iniettare il liquido epididimo estratto nella piastra di coltura. Successivamente, aspirare la soluzione di coltura G-MPOS-PLUS nelle vicinanze per risciacquare la siringa e massimizzare la quantità di liquido epididimico raccolto. A questo punto, trasferire la piastra di coltura contenente il fluido di coltura G-MPOS-PLUS e il liquido epididimico al tecnico di laboratorio degli embrioni attraverso la finestra di trasferimento.

Posizionare il piatto di coltura sul tavolino di un microscopio ottico invertito e fissarlo. Accendere l'interruttore di alimentazione del microscopio e regolare l'intensità della luce in modo appropriato. Quindi, ruotare il convertitore del microscopio ottico invertito. Seleziona l'obiettivo 10 volte e ruota le spirali di messa a fuoco grossolana e fine per regolare la lunghezza focale.

Una volta individuati gli spermatozoi dell'epididimo, osservarli a un ingrandimento di 40 volte per valutarne il numero e la qualità. Utilizzando una pipetta sterile Pasteur, trasferire il liquido dalla piastra di coltura in una provetta da centrifuga da 15 millilitri dopo aver osservato una quantità sufficiente di spermatozoi attivi. Posizionare la provetta da centrifuga sul vassoio della bilancia e utilizzare una provetta da centrifuga della stessa specifica contenente acqua sterile per livellare.

Quindi aprire lo sportello della centrifuga. Posizionare i tubi nello slot della scheda in modo simmetrico e chiudere lo sportello. Premere il pulsante Start per avviare il processo di centrifugazione. Una volta completato il processo, rimuovere dalla centrifuga la provetta contenente il liquido epididimale. Quindi, aspirare delicatamente il surnatante con una pipetta sterile di Pasteur e scartare il surnatante aspirato.

Utilizzando una pipetta sterile Pasteur, trasferire il sedimento dal fondo della provetta da centrifuga a una nuova provetta da centrifuga contenente circa 2 millilitri di soluzione di coltura G-IVF Plus. Pipettare delicatamente la soluzione per risospendere completamente il sedimento. Trasferire circa 0,5 millilitri di soluzione di coltura G-IVF Plus nella provetta da centrifuga. Soffiare delicatamente gli spermatozoi dell'epididimo sul fondo per renderlo completamente sospeso e utilizzarli per la procedura ICSI.