Spettrometria di massa al plasma accoppiata induttivamente con ablazione laser per visualizzare i metalli nel tessuto cerebrale del topo

Posizionare un campione di tessuto cerebrale di topo e gli standard in una camera di ablazione laser.

Gli standard contengono concentrazioni note di metalli aggiunti negli omogeneizzati di tessuto cerebrale di agnello.

Riempi la camera con gas argon e focalizza un raggio laser ultravioletto sul tessuto.

Il laser vaporizza il campione e gli standard in uno schema lineare, creando un aerosol di particelle fini.

Il gas argon trasporta le particelle nel plasma accoppiato induttivamente, una fonte di ionizzazione ad alta temperatura.

Il plasma atomizza e ionizza le particelle in ioni caricati positivamente.

Gli ioni entrano nello spettrometro di massa e vengono separati in base al loro rapporto massa-carica.

I dati risultanti vengono confrontati con un database di riferimento per identificare i metalli presenti nel campione. Dagli standard viene generata una curva di calibrazione.

Calcola le concentrazioni di metalli nel campione calibrando le sue intensità di segnale rispetto a quelle degli standard, rivelando la distribuzione spaziale dei metalli all'interno della fetta cerebrale.

Innanzitutto, posizionare un campione di tessuto cerebrale e tutti gli standard di tessuto corrispondenti alla matrice nella camera di ablazione laser. Assicurarsi che i campioni rientrino nella profondità di campo della telecamera LACCD. Chiudere lo sportello della camera e serrare a mano le viti.

Quindi, nel software ICP-MS, aprire la valvola del gas di trasporto e impostare la portata su 1,2 litri al minuto. Nel software LA, eseguire uno spurgo di 30 minuti della cella di ablazione con il gas vettore per una cella di ablazione a 2 volumi. Ogni 10 minuti, spostare lo stadio del campione in ciascun angolo della camera per ridurre la quantità di aria residua nella cella.

Accendere l'ICP-MS e lasciare che lo strumento si riscaldi per due ore. Mentre lo strumento si sta riscaldando, nel software di ablazione laser, tracciare una linea di ablazione lunga circa 3 millimetri lungo la superficie del primo standard tissutale. Fare clic sulla linea di ablazione e impostare il diametro del fascio predefinito, la velocità di scansione e la fluenza radiante. Duplicare la linea sei volte, distanziandole in base al diametro della trave. Ripetere questo processo per ogni standard.

Quindi, utilizzare lo strumento Linea per disegnare l'area di ablazione sul campione dall'angolo in alto a sinistra attraverso il punto più largo del campione, utilizzando gli stessi parametri degli standard.

Duplicare la linea secondo necessità per una copertura completa del campione con la stessa spaziatura utilizzata negli standard. Quindi tracciare una serie di linee per la scansione intermittente degli standard entro e non oltre 20 ore dalla scansione del campione o tra ciascun campione. Aggiungi una scansione degli standard alla fine dell'esperimento.

In base alla lunghezza della linea e alla velocità di scansione, determinare il tempo di analisi per il campione e le linee standard. Quindi creare un nuovo batch nel software ICP-MS e selezionare Analisi risolta nel tempo. Scegliere i valori del rapporto massa/carica di interesse e impostare i tempi di integrazione per ciascun rapporto, in modo che il tempo di integrazione totale per un ciclo sia di 0,25 secondi. Salvare il batch.

Per un lotto standard, inserire il tempo di analisi per ogni linea con un buffer aggiuntivo di 15 secondi per tenere conto dei tempi di riscaldamento e lavaggio del laser. Impostare un elenco di esecuzione di esempio con un'acquisizione per ogni linea standard. Per il lotto di campioni, duplicare il lotto standard e regolare i tempi e il numero di acquisizioni di conseguenza per il modello di ablazione del campione.

Una volta che l'ICP-MS si è riscaldato, aggiungere il primo batch alla coda e assicurarsi che il software sia in attesa di un trigger dallo strumento LA. Quindi, nel software LA, accendere l'alimentazione del laser e impostare i tempi di riscaldamento e lavaggio del laser. Avviare la sequenza laser e verificare che l'ICP-MS avvii correttamente la raccolta dei dati dopo l'ablazione.

Una volta raccolti i dati, estrarre i dati per gli standard dai file CSV. Eseguire la sottrazione della linea di base ed escludere il segnale di fondo. Identificare le cadute di segnale causate da fori negli standard dei tessuti.

Maschera queste aree a basso segnale e quindi esporta i dati come foglio di calcolo. Calcola un fattore di conversione da CPS a PPM per ogni elemento identificato. Ripetere questo processo per ogni standard.

Quindi, apri il software di costruzione quantitativa delle immagini e importa i dati di esempio dai file CSV. Seleziona diverse aree dello sfondo per applicare la correzione dello sfondo. Seleziona lo strumento di modifica del grafico, fai clic con il pulsante destro del mouse sull'immagine e seleziona Modifica aspetto immagine. Cambia il primo colore in corrispondenza di Z con un valore negativo elevato.

E fare clic su Fine per migliorare il segnale di fondo. Quindi, nella scheda Standard, immettere i fattori di correzione CPS PPM per ogni standard e fare clic su Vai. Apri il Browser dati nella scheda Dati, fai clic con il pulsante destro del mouse su un file immagine corretto e fai clic su Nuova immagine.

Aprire la finestra Modifica aspetto immagine e impostare la tabella dei colori e la scala. Utilizzare l'utilità Aggiungi annotazione per posizionare una scala di colori sull'immagine. Regolare la scala dei colori nella finestra della scala dei colori. Una volta che l'immagine è stata colorata e annotata, copia e incolla l'immagine in un altro programma o esporta l'immagine dal software di costruzione delle immagini.

Per attivare gli strumenti ROI, seleziona Elaborazione immagini dai pacchetti di analisi e scegli un'immagine. Nella scheda Immagine, fai clic su ROI e avvia ROI Draw. Seleziona l'area di interesse, quindi fai clic su Termina ROI.

Nella scheda Immagine, fai clic su Statistiche per ottenere i dati sul ROI. Copia e incolla i dati in un foglio di calcolo, assicurandoti di salvarli quando viene aggiunto ogni ROI. Ripetere il processo secondo necessità.