Imaging di seconda generazione armonica in un modello di ratto per studiare i difetti della tubulina

Inizia con una fetta di tessuto cerebrale di ratto montata su un vetrino e immersa in un tampone.

Il ratto soffre di tubulinopatia, una condizione causata da difetti nella tubulina, gli elementi costitutivi dei microtubuli, che portano al loro accumulo e rottura anormali.

Ciò influisce anche sulla produzione di mielina nel sistema nervoso centrale.

Posizionare la fetta sotto un microscopio a eccitazione a due fotoni coperto per ottenere immagini dettagliate.

Idratare regolarmente la fetta per mantenerne l'integrità.

Impostare il microscopio su una modalità di imaging non descansionata, una tecnica senza etichetta per rilevare segnali deboli.

Esporre il tessuto a un laser a infrarossi pulsati.

I microtubuli emettono luce come segnali rilevabili noti come generazione di seconda armonica o segnali SHG.

Le aree con accumulo anomalo di microtubuli amplificano questi segnali, aumentandone la rilevabilità.

Applica filtri ottici per perfezionare questi segnali.

L'immagine catturata rivela densità e anomalie dei microtubuli, in cui l'elevata intensità di SHG e il raggruppamento indicano difetti di tubulina e ridotta produzione di mielina.

Posizionare il campione sotto il microscopio e posizionarlo op