JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:15 min. • June 17th, 2025
Iniziare con un espianto di retina di topo postnatale vivo montato su un filtro a membrana e posto in una camera di incubazione al microscopio confocale.
La retina viene trasfettata per esprimere una proteina fluorescente nelle membrane degli interneuroni amacrini starburst.
Posizionare un peso del campione pre-bagnato sulla retina per stabilizzarla.
Riempire la camera con il tampone.
Mantenere il flusso e la temperatura ottimali del tampone nella camera per preservare la vitalità neuronale.
Posizionare un obiettivo a immersione in acqua nella camera di imaging.
Avviare l'imaging a epifluorescenza.
La luce laser, diretta attraverso l'obiettivo, eccita la proteina fluorescente nelle cellule amacrine.
La fluorescenza emessa viene catturata attraverso lo stesso obiettivo, consentendo la visualizzazione delle cellule amacrine marcate.
Identificare una cella fluorescente per l'imaging.
Impostare i parametri di imaging.
Acquisisci immagini su più piani Z per ottenere una visualizzazione 3D della morfologia dendritica completa.
Esegui l'imaging time-lapse per tenere traccia dei cambiamenti nella morfologia dendritica nel tempo.
Assemblare la camera di incubazione per immagini dal vivo e riempirla con
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