Imaging e quantificazione della rigenerazione assonale nei neuroni del ganglio retinico di ratto assotomizzati

Prendete una co-coltura di glia immortalizzata dell'olfatto umano, o cellule OEG, e neuroni gangliari retinici di ratto assotomizzati, o RGN, su un vetrino coprioggetti.

Le cellule OEG mostrano proprietà neurorigenerative che facilitano la rigenerazione assonale nelle RGN.

Gli RGN sono immunomarcati in modo che i loro somi, o corpi cellulari, emettano una fluorescenza rossa mentre i loro assoni emettono fluorescenza verde.

Utilizzando i supporti di montaggio, montare il vetrino coprioggetti contenente le cellule.

Utilizzare un microscopio a epifluorescenza per acquisire più immagini di RGN.

Aprire un'immagine nel software di imaging.

Quantifica la percentuale di neuroni con gli assoni rispetto al numero totale di RGN.

Quindi, traccia un assone partendo dal soma fino alla fine e inizia il tracciamento degli assoni per determinare le lunghezze di tutti gli assoni.

Quantificare l'indice di rigenerazione assonale dividendo la somma di tutte le lunghezze assonali per il numero totale di RGN.

Montare i vetrini coprioggetti con il mezzo di montaggio e mantenerli a 4 gradi Celsius. Utilizzare un obiettivo 40 volte di un microscopio a epifluorescenza per quantificare la rigenerazione assonale. Quan