JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:00 min. • June 17th, 2025
Inizia con un piatto contenente fette di cervello corticale di embrioni di topo transgenico in terreni integrati con luciferina.
La regione corticale contiene cellule staminali neurali che esprimono proteine fluorescenti verdi o GFP e un gene di interesse fuso con un gene reporter della luciferasi.
Posizionare la capsula sul tavolino del microscopio per le misure di fluorescenza e luminanza.
Acquisisci immagini di prova della fluorescenza GFP, concentrandoti sulle regioni di interesse.
Durante la differenziazione neuronale, le cellule staminali iniziano a esprimere il gene di interesse e producono proteine fuse con l'enzima luciferasi.
La luciferina interagisce con gli enzimi luciferasi, generando bioluminescenza che riflette direttamente l'espressione del gene di interesse durante la differenziazione.
Acquisisci un'immagine a fluorescenza per identificare specifiche regioni di attività, un'immagine a bioluminescenza per monitorare l'espressione genica dinamica e un'immagine a campo chiaro per fornire informazioni morfologiche.
Acquisisci queste immagini tridimensionali in time-lapse per visualizzare l'espressione genica durante la differenziazione neuronale all'interno dell'ambiente tiss
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