Imaging in vitro in tempo reale della ramificazione assonale nei neuroni corticali di topo

Prendete una capsula di imaging con fondo di vetro contenente neuroni corticali embrionali di topo.

Posizionare la capsula all'interno della camera ambientale di un microscopio a contrasto di interferenza differenziale, o DIC, per mantenere la vitalità cellulare durante l'imaging.

La microscopia DIC divide la luce polarizzata in due fasci che attraversano il campione.

Le variazioni dell'indice di rifrazione attraverso il campione introducono sfasamenti tra questi raggi.

Quando i fasci si ricombinano, la loro interferenza genera un'immagine ad alto contrasto, rendendo visibili le strutture cellulari più fini.

Identifica i neuroni con assoni non ramificati e utilizza l'imaging time-lapse per visualizzare la ramificazione assonale.

Trattare con netrina-1, un segnale di guida extracellulare che si lega ai recettori assonali e innesca l'esocitosi localizzata.

Le vescicole esocitiche trasportano i componenti della membrana ai siti mentre il citoscheletro viene riorganizzato per supportare l'espansione della membrana.

Al microscopio, questi cambiamenti appaiono come piccole sporgenze, che segnano l'inizio della ramificazione assonale.

Nel tempo, queste sporgenze si sviluppano in rami assonali matu