Imaging in vivo delle risposte dei neuroni gangliati genicolati mediante microscopia a epifluorescenza

Iniziate con un topo anestetizzato con un ganglio genicolato esposto chirurgicamente, un gruppo di neuroni periferici che elaborano il gusto.

Questi neuroni esprimono GCaMP, un indicatore del calcio che diventa fluorescente al legame con il calcio.

Rimuovere qualsiasi liquido che copre il ganglio per una visualizzazione chiara.

Posiziona il mouse su un tampone assorbente al microscopio e individua il ganglio genicolato utilizzando punti di riferimento anatomici.

Utilizzando un filtro appropriato sull'oscilloscopio per epifluorescenza, rilevare la fluorescenza verde dai neuroni che esprimono GCaMP.

Quindi, inserire un ago di erogazione collegato al tubo di erogazione tastant nella bocca del topo ed erogare il tastant.

Il tastant stimola le cellule dei recettori del gusto, rilasciando ATP, che si lega ai recettori dei neuroni ganglionari, innescando l'afflusso di calcio.

Questi ioni calcio si legano alle GCaMPs, inducendo l'emissione di fluorescenza.

Allinea la fotocamera con il campo visivo del microscopio e sincronizza la registrazione video con l'erogazione tatent, per catturare l'attività neuronale in tempo reale attraverso i cambiamenti di fluorescenza.

Per far funzionare il pannello tatant, utilizzare l'aspirazione per rimuovere il liquido sopra il genicolato e posizionare il mouse su un tampone assorbente sotto un microscopio da dissezione. Usa il foro lasciato nella bolla, il foro nell'osso temporale e il settimo nervo per localizzare il ganglio genicolato. E utilizzare il filtro FITC/GFP sull'endoscopio dell'epifluorescenza per verificare la presenza di singoli neuroni gangliati genicolati che esprimono GCaMP. Posizionare saldamente l'ago di erogazione per una linea di tastatura nella bocca dell'animale. Sincronizza l'inizio della registrazione video con l'inizio della presentazione tatent, guardando il feed live per le risposte.