Name: Autologo di cellule progenitrici endoteliali-Seeding Tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Scopri la tecnica di seeding di tubi di titanio con cellule progenitrici endoteliali autologhe in un modello suino per valutare la protezione contro la trombosi.

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Gli autori desiderano ringraziare Leica Microsystems per i loro preziosi consigli su immagini sezioni titanio e Gemini Bio-Prodotti per la fornitura del siero suina utilizzati in questo studio. Ci piace anche ringraziare i NIH per il loro sostegno attraverso Grant &quot;rivestimento autologo EPC per migliorare la biocompatibilità dei dispositivi di assistenza circolatoria&quot;, RC1HL099863-01. Inoltre, siamo grati per il supporto della National Science Foundation Graduate Research Fellowship di Alexandra Jantzen. Ci piace anche ringraziare George rapida, Mike Lowe e Ianthia Parker per assistere con molti aspetti della procedura chirurgica e la gestione dei nostri animali di ricerca. Steven Owen è stato prezioso per la lavorazione di pezzi molti dei nostri dispositivi semina e taglio di tubi in titanio.

<ol><li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+bleeding+and+clotting+in+the+cardiac+surgery+patient%3A+from+vascular+endothelium+to+circulatory+assist+device+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of bleeding and clotting in the cardiac surgery patient: from vascular endothelium to circulatory assist device surface.</a> Circulation. 122, 2068-2077 (2010).</li>
<li>Achneck, H. E., Sileshi, B., Lawson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+the+biology+of+bleeding+and+clotting+in+the+surgical+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Review of the biology of bleeding and clotting in the surgical patient.</a> Vascular. 16, 6-13 (2008).</li>
<li>Arvidsson, S., Askendal, A., Tengvall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+plasma+contact+activation+on+silicon%2C+titanium+and+aluminium%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Blood plasma contact activation on silicon, titanium and aluminium.</a> Biomaterials. 28, 1346-1354 (2007).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biocompatibility+of+titanium+cardiovascular+devices+seeded+with+autologous+blood-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+EPC-seeded+antithrombotic+Ti+Implants%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The biocompatibility of titanium cardiovascular devices seeded with autologous blood-derived endothelial progenitor cells: EPC-seeded antithrombotic Ti Implants.</a> Biomaterials. 32, 10-18 (2011).</li>
<li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89, 256-263 (2003).</li>
<li>Ueberrueck, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+ovine+and+porcine+animal+models+for+biocompatibility+testing+of+vascular+prostheses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of the ovine and porcine animal models for biocompatibility testing of vascular prostheses.</a> J Surg Res. 124, 305-311 (2005).</li>
<li>Velik-Salchner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+values+for+thrombelastography+%28ROTEM%29+and+selected+coagulation+parameters+in+porcine+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Normal values for thrombelastography (ROTEM) and selected coagulation parameters in porcine blood.</a> Thromb Res. 117, 597-602 (2006).</li>
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<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAchneck%2C+HE+%22American+Heart+Association+Scientific+Sessions%2C+Abstract+Oral+Sessions%2C+Medical+Aspects+End+Stage+Heart+Failure%3A+Transplantation+and+Device+Therapies%22">American Heart Association Scientific Sessions, Abstract Oral Sessions, Medical Aspects End Stage Heart Failure: Transplantation and Device Therapies</a>. , (2010).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+titanium+ventricular+assist+device+surfaces+after+gold%2Fpalladium+coating+for+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Regenerating titanium ventricular assist device surfaces after gold/palladium coating for scanning electron microscopy.</a> Microsc Res Tech. 73, 71-76 (2010).</li>
<li>Ford, J. W., Welling, T. H., Stanley, J. C., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKH26+and+125I-PKH95%3A+characterization+and+efficacy+as+labels+for+in+vitro+and+in+vivo+endothelial+cell+localization+and+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">PKH26 and 125I-PKH95: characterization and efficacy as labels for in vitro and in vivo endothelial cell localization and tracking.</a> J Surg Res. 62, 23-28 (1996).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il metodo di cellule semina tubi Ti presentato qui permette ai medici e agli scienziati di endothelialize rapidamente e in modo uniforme il sangue a contatto superfici di dispositivi impiantabili. Dal momento che abbiamo isolare ed espandere EPC da campioni di sangue periferico, nessuna procedura di grandi invasiva è necessaria per sfruttare queste cellule. Inoltre, l&#39;EPC sono autologhe, quindi, il rischio di reazione immunitaria alla cella testa di serie impianto viene eliminato. I principi dimostrato nel suo protocollo può essere utilizzato non solo per i tubi di titanio, ma per molti altri biomateriali, che vengono utilizzate nella medicina cardiovascolare. Passaggi critici in questo protocollo sono la pulizia meticolosa dei tubi Ti, come abbiamo scoperto che ogni pellicola aderente di contaminante cellule aderenza compromessi. Inoltre, una velocità di rotazione lenta (inversamente proporzionale al diametro del tubo) è essenziale durante il processo di semina, in modo che lentamente EPC possono stabilirsi e aderire alla superficie del tubo Ti è in movimento. Il nostro metodo di semina immediatamente prima dell&#39;impianto evitando impraticabile ex tempi cultura vivo; cellule aderire individualmente e in seguito forma un foglio confluenti in vivo, evitando la possibilità di embolizzazione come un foglio subito dopo il ristabilimento del flusso. I nostri studi precedenti mostrano che una volta che l&#39;EPC sono cresciuti a un livello confluenti, fanno un matrice extracellulare a cui aderire, in aggiunta al minimo ogni possibile mutare di un foglio endoteliale. Anche se la possibilità di distacco embolico non può essere completamente escluso, sembra essere molteplici rischio inferiore trombosi della superficie intero dispositivo, il problema che questa terapia è stato progettato per prevenire. Il nostro approccio di impianto nel taglio basso, l&#39;ambiente protrombotici della vena cava inferiore utilizza uno dei modelli più affidabili grande animale per la ricerca di compatibilità del sangue e trombosi dei dispositivi di 5,6. Si noti che tutti la cura degli animali e la sperimentazione è stata condotta in conformità con l&#39;Istituto Nazionale della Salute Linee guida per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio e solo dopo l&#39;approvazione dei prodotti per animali Duke University e del Comitato Istituzionale Usa. Al fine di utilizzare con successo questo metodo per testare l&#39;impianto biomateriali e dispositivi, è importante skeletonize pazientemente il segmento IVC e legare tutte le navi ramo venoso in preparazione per l&#39;inserimento dispositivo, tale che nessun sanguinamento intorno al dispositivo originario di un &#39;falso lume&#39;. Un altro passo fondamentale è l&#39;aggiunta di DPBS nel lume dispositivo in modo che le cellule sulla superficie interna del tubo rimanere umido durante la chiusura del veinotomy e prima di riperfusione è iniziata. Se il dispositivo non può essere trovato nella posizione in cui è stato impiantato, può avere migrato &#39;a monte&#39; nella IVC. Questo può essere evitato mettendo una sutura (4-O Prolene) attraverso la parete venosa e attraverso un 2-3 mm di sezione del tubo in PVC in modo che il tubo sia saldamente ancorata nella sua posizione attuale. Qualora il ricercatore hanno difficoltà a trovare le cellule fluorescenza pre-etichettati mostrato nella Figura 8, dopo espianto in un tubo di brevetto in caso contrario, è probabile che le cellule hanno staccata come un foglio coerente. Questo può essere impedito da dissezione molto delicato della vena circostante e smontaggio delle 3 sezioni del tubo Ti, dopo aver fissato la vena insieme con il tubo. La nostra tecnologia fornisce proof-of-concept per prevenire la trombosi cardiovascolare dispositivo attraverso EPC-semina. Questa tecnologia può essere utilizzata per lo sviluppo di &#39;biogene&#39; impianti fiancheggiata da cellule dei pazienti &#39;progenitrici endoteliali. Lo studio di fattibilità nel nostro modello animale della specie suina prevede i primi passi verso la traduzione di questa &#39;medicina personalizzata&#39; nella pratica clinica.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Nome Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Acepromazina </td><td> Boehringer-Ingelheim </td><td> BIC670025 </td><td> NAC # 10280002 </td></tr><tr><td> Alconox Pulitore di precisione Powered </td><td> Alconox </td><td> 1104 </td><td></td></tr><tr><td> Balfour Retrattore chirurgica </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Baytril </td><td> Bayer </td><td> APVMA 46028/0705 </td><td></td></tr><tr><td> Farfalla ago (19G) </td><td> Terumo </td><td> SV19CLK </td><td></td></tr><tr><td> Clorexidina </td><td> 3M </td><td> 9200 </td><td></td></tr><tr><td> Morsetti (45 gradi) </td><td> Aesculap </td><td> FC339T </td><td></td></tr><tr><td> DPBS (-/-) </td><td> Gibco </td><td> 14190-144 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS (+/+) </td><td> Gibco </td><td> 14040-133 </td><td></td></tr><tr><td> DuraPrep </td><td> 3M </td><td> 8635 </td><td></td></tr><tr><td> EBM-2 Media </td><td> Lonza </td><td> CC-3156 </td><td> Base per la crescita di medio siero libero e pieno </td></tr><tr><td> EGM-2 SingleQuots </td><td> Lonza </td><td> CC-3162 </td><td> Utilizzato con EBM-2 sia per la crescita media del siero libero e pieno </td></tr><tr><td> Strumento elettrocauterizzazione </td><td> Valleylab </td><td> SurgII-20 </td><td></td></tr><tr><td> Panno smeriglio </td><td> 3M </td><td> 60-0700-0425-8 </td><td> Grana 240 </td></tr><tr><td> Euthasol Eutanasia Soluzione </td><td> Virback Animal Health </td><td></td><td> ANADA #: 200-071 </td></tr><tr><td> Fentanil Patch </td><td> Actavis </td><td></td><td> NDC # 67767-120-18 </td></tr><tr><td> Flunixin </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td> NAC #: 10470183 </td></tr><tr><td> Foley Catheter (16F) </td><td> Vate </td><td> 730116 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Sigma </td><td> H8264-500ML </td><td></td></tr><tr><td> Pistola di calore </td><td> Milwaukee </td><td> 8988-20 </td><td></td></tr><tr><td> Eparina </td><td></td><td></td><td> NDC #: 25021 </td></tr><tr><td> HISTOPAQUE-1077 </td><td> Sigma </td><td> H8889-500ML </td><td></td></tr><tr><td> Intubazione del tubo </td><td> Mallinckrodt </td><td> 86113 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurano </td><td> MWI, Meridian </td><td></td><td> NDC # 13985-030 </td></tr><tr><td> IV catetere (18G) </td><td> Becton Dickinson- </td><td> 381547 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamina </td><td> Fort Dodge </td><td></td><td> NDC # 0856-2013 </td></tr><tr><td> Livello </td><td> Swanson </td><td> LLA001 </td><td></td></tr><tr><td> Luer-Lock cappuccio </td><td> CML di alimentazione </td><td> 909-001 </td><td></td></tr><tr><td> Marcaine </td><td> Hospira </td><td></td><td> NDC #: 0409-1560-10 </td></tr><tr><td> Metzenbaum Forbici </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Micro-introduttore (5F) </td><td> Galt </td><td> KIT 002-01 </td><td></td></tr><tr><td> Pinza Mosquito </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Motore </td><td> Herbach e Rademan </td><td> H1-08 </td><td></td></tr><tr><td> Ossimorfone </td><td> Endo Labs </td><td></td><td> NDC: 63481-624-10 </td></tr><tr><td> PKH26 Dye Kit </td><td> Sigma </td><td> PKH26GL-1KT </td><td></td></tr><tr><td> Suini Siero </td><td> Gemini Bio-Prodotti </td><td> 100-115 </td><td> Concentrazione del 2% nel medio piena crescita </td></tr><tr><td> Potts Forbici </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Preciso Vista pelle pinzatrice </td><td> 3M </td><td> 3998 </td><td></td></tr><tr><td> Tubi in PVC </td><td> McMaster-Carr/Insultab </td><td> 7132K117 </td><td> ampliato ID 15,88 millimetri, recuperato ID 7,95 millimetri </td></tr><tr><td> Diritto grandezza media in angolo </td><td> Adler </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Scalpel Blade (# 10-15) </td><td> Vate </td><td> 373910 </td><td></td></tr><tr><td> Tubi in silicone </td><td> McMaster-Carr </td><td> 51735K26 </td><td> 16,64 millimetri OD, 9.52 mm ID </td></tr><tr><td> Siringa (5 cc) </td><td> Becton-Dickinson (BD) </td><td> 309603 </td><td></td></tr><tr><td> Tegaderm </td><td> 3M </td><td> 90001 </td><td></td></tr><tr><td> Rubinetto a tre vie </td><td> Kendall </td><td> 170060 </td><td></td></tr><tr><td> Ti tubo </td><td> Tico titanio </td><td> N / A </td><td> Specificato come ½ &quot;OD, 0,065&quot; muro, 0,370 &quot;ID, 0,1737 £ / ft </td></tr><tr><td> Tripsina </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina soluzione neutralizzante (TNS) </td><td> Lonza </td><td> CC-5002 </td><td> 0,03% </td></tr><tr><td> Vetropolycin </td><td> Pharmaderm Animal Health </td><td></td><td> NAC #: 12920110 </td></tr><tr><td> Suture Vicryl (3-0) </td><td> Ethicon </td><td> J808T </td><td></td></tr><tr><td> Acqua bagno Sonicator </td><td> Branson </td><td> B200 </td><td></td></tr></tbody></table>

autologo di cellule progenitrici endoteliali-seeding tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni

Autologous Endothelial Progenitor Cell-Seeding Technology and Biocompatibility Testing For Cardiovascular Devices in Large Animal Model

Dispositivi impiantabili cardiovascolari sono realizzati con materiali artificiali (per esempio in titanio (Ti), politetrafluoroetilene espanso), che comportano il rischio di formazione di tromboembolie 1,2,3. Abbiamo sviluppato un metodo per allineare la superficie interna dei tubi Ti con cellule umane autologhe o suina emoderivati ​​progenitrici endoteliali (EPC) 4. Mediante l&#39;impianto di tubi di titanio contenente uno strato confluente di EPC suina nella vena cava inferiore (IVC) di suini, abbiamo testato la biocompatibilità miglioramento della cellula-superficie seminata in ambiente protrombotico di un modello animale di grandi dimensioni e non modificato rispetto a superfici di metallo nudo 5,6,7 (Figura 1). Questo metodo può essere utilizzato per endothelialize dispositivi in pochi minuti di impianto e testare la loro funzione antitrombotica in vivo. Sangue periferico è stato ottenuto da 50 kg Yorkshire suina e la sua frazione di cellule mononucleate in coltura per isolare EPC 4,8. Ti tubi (9,4 mm ID) sono stati pre-tagliati in tre sezioni 4,5 centimetri longitudinale e riassemblati con una guaina termoretraibile. Un dispositivo di semina è stata costruita, che consente la rotazione lenta dei tubi Ti. Abbiamo eseguito una laparotomia sui maiali e esteriorizzato dell&#39;intestino e della vescica urinaria. Dissezione acuto e schietto è stato utilizzato per skeletonize l&#39;IVC dalla sua biforcazione distale dell&#39;arteria renale destra prossimale. I tubi Ti sono stati poi riempiti con fluorescenza marcata autologo sospensione EPC e ruotato di 10 RPH x 30 minuti per raggiungere uniforme delle cellule di rivestimento 9. Dopo la somministrazione di 100 USP / kg di eparina, entrambe le estremità della IVC e una vena lombare sono stati bloccati. A 4 veinotomy centimetri è stata effettuata e il dispositivo inserito e pieno di PBS. Mentre il veinotomy è stata chiusa con una sutura Prolene 4-0 in esecuzione, un morsetto è stato rimosso a de-air la IVC. Al termine della procedura, la fascia è stata approssimata con 0-PDS (polidiossanone sutura), lo spazio sottocutaneo chiuso con Vicryl 2-0 e la pelle cucito con punti metallici chiusi. Dopo 3 - 21 giorni, i maiali sono stati sottoposti ad eutanasia, il dispositivo espiantato en-blocco e fissi. I tubi Ti sono stati smontati e le superfici interne ripreso con un microscopio a fluorescenza. Abbiamo scoperto che il metallo nudo tubi Ti completamente occluso considerando che la SPE-teste di serie tubi rimasti brevetto. Inoltre, siamo stati in grado di dimostrare uno strato confluente di EPC all&#39;interno del sangue a contatto della superficie. Concludendo, la nostra tecnologia può essere usata per endothelialize tubi Ti pochi minuti di impianto con EPC autologhe per prevenire la trombosi del dispositivo. Il nostro metodo chirurgico consente di testare la biocompatibilità miglioramento di tali dispositivi modificati con minima perdita di sangue ed EPC-seminato distruzione di superficie.

Un metodo per il titanio semina sangue a contatto con le cellule autologhe biomateriali e biocompatibilità test è descritta. Questo metodo utilizza cellule progenitrici endoteliali e tubi in titanio, teste di serie in pochi minuti di impianto chirurgico nelle cave cavae suina. Questa tecnica è adattabile a molti altri dispositivi biomedici impiantabili.

Autologo di cellule progenitrici endoteliali-Seeding Tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni

I dispositivi cardiovascolari impiantabili sono realizzati con materiali artificiali (ad es. titanio (Ti), politetrafluoroetilene espanso), i quali comportano il rischio...

L'obiettivo generale di questo esperimento è quello di seminare impianti vascolari con cellule progenitrici endoteliali derivate dal sangue autologo, quindi osservare l'effetto di questo trattamento sulla trombosi in un modello animale di grandi dimensioni. Questo viene ottenuto prelevando un campione di sangue periferico da suino per isolare le cellule progenitrici endoteliali porcine ad accrescimento tardivo. Successivamente, un dispositivo impiantabile.Il tubo in titanio nel nostro studio di prova di principio è rivestito con le PC autologhe. Il dispositivo viene quindi impiantato nella vena cava inferiore del maiale. I risultati mostrano una protezione contro la trombosi, basata sulla pervietà del tubo in titanio rivestito con EPC, a differenza del tubo metallico nudo di controllo, che risulta occluso.Chirurgia Duke si impegna a promuovere ricerche innovative e all'avanguardia. La seguente presentazione è un esempio di come operiamo attraverso diversi dipartimenti e discipline per far progredire la medicina. Il Dott. EK sta guidando un progetto di ricerca volto a sviluppare una tecnologia di semina cellulare che preverrà la trombosi rivestendo la superficie a contatto con il sangue dei dispositivi vascolari con le cellule progenitrici del paziente.Dato che queste cellule sono state ottenute dagli stessi pazienti che riceveranno l'impianto, si evita il rigetto da parte del sistema immunitario. I nostri risultati e i metodi qui descritti sono il frutto di un ampio lavoro di squadra. L'impianto chirurgico sarà dimostrato da Sean Gage della sezione di chirurgia vascolare, da Whitney Lane, studentessa di medicina presso la Duke, e da me stesso.Vorrei ora presentare Alexander Janssen, uno studente di dottorato del Dipartimento di Ingegneria Biomedica, che ci illustrerà nel dettaglio il processo di semina cellulare. Dimostrerò come seminare tubi di titanio con cellule progenitrici endoteliali ottenute dal sangue poco prima dell'impianto in un modello suino. Questo metodo rappresenta una dimostrazione di fattibilità e gli stessi principi di base possono essere applicati a molti altri dispositivi impiantabili, come ad esempio stent in nitinolo e dispositivi di assistenza circolatoria meccanica. Le EPC vengono isolate coltivando la frazione di cellule mononucleate del sangue porcino e di solito compaiono dopo circa sette giorni.Possono essere riconosciute per la loro tipica morfologia a selciato. Espandere le EPC fino a un numero totale di 9 milioni di cellule in coltura. Lavare le EPC preparate due volte in mezzo privo di siero, avendo cura di limitare l'esposizione alla luce durante e dopo l'etichettatura.Quindi ricoprire le cellule con un marcatore fluorescente, PKH 26, e registrare il volume di soluzione applicato. Incubare le cellule a temperatura ambiente per quattro minuti. Arrestare la reazione di marcatura aggiungendo un volume uguale di siero di suino alla soluzione di colorante un minuto dopo.Diluire le soluzioni combinate in rapporto uno a uno con mezzo di crescita completo. Quindi aspirare il liquido e risciacquare le cellule tre volte con mezzo di crescita completo, seguito da due lavaggi con DPBS privo di cloruro di calcio o cloruro di magnesio. Successivamente, coprire le cellule con tripsina prendendo nota del volume utilizzato e incubarle a 37 gradi Celsius.Dopo tre minuti di incubazione, utilizzare la microscopia per verificare che le cellule si siano staccate e, in caso affermativo, aggiungere una quantità doppia di soluzione di neutralizzazione della tripsina rispetto a quella aggiunta in precedenza. Combinare le sospensioni cellulari in un singolo tubo e misurare la densità cellulare mediante emocitometro. Infine, centrifugare la sospensione cellulare per formare un pellet e risospendere le cellule in almeno 4,5 millilitri di mezzo privo di siero.Dopo aver preparato il maiale per l'intervento chirurgico, praticare un'incisione mediana con una lama da bisturi n. 15 a partire dal secondo paio di ghiandole della memoria. Procedere in senso craniale fino al penultimo paio utilizzando l'elettrocoagulazione. Portare l'approfondimento della dissezione fino alla fascia addominale.Sollevare il peritoneo con pinze emostatiche fini e introdursi con cautela utilizzando forbici Metzenbaum, esternare la vescica urinaria e posizionare una sutura a punto stellato con Vicryl 3-0 nella parete della vescica. Praticare un'incisione centrale a punta di coltello ed inserire un catetere Foley da 16 French attraverso l'incisione. Successivamente, somministrare fluidi per via endovenosa al fine di titolare la diuresi ad almeno un millilitro per chilogrammo per ora durante l'intervento chirurgico.Successivamente, esternare l'intestino leggermente ingrandito e posizionare due retrattori chirurgici Bour per esporre l'aspetto posteriore della cavità peritoneale e identificare la vena cava inferiore mediante dissezione affilata e ottusa. Liberare con attenzione la vena cava inferiore dai tessuti circostanti. Quindi, dissezionare il vaso dall'arteria renale destra in senso prossimale fino alla biforcazione distale della vena cava inferiore.Massima attenzione durante la dissezione della vena cava inferiore, poiché anche un piccolo difetto nella vena cava inferiore può provocare un'emorragia rapida e l'esanguinamento dell'animale. Tutte le ramificazioni laterali del segmento della vena cava inferiore richiedono particolare cura durante la dissezione e la legatura, in particolare le due grandi vene lombari posteriori immediatamente prossimali alla biforcazione della vena cava inferiore. Spesso è presente una grande vena lombare sul lato posteriore.Dissezionare liberamente questa vena e controllarla con anelli vascolari. Nel frattempo, parallelamente all'intervento chirurgico, iniziare a seminare l'impianto con cellule endoteliali progenitrici (EPC) prima di iniziare questa procedura. Le impalcature in titanio per l'inserimento nei tessuti devono essere completamente assemblate e pronte all'uso in un campo sterile.Aprire l'insieme del tubo in titanio sterilizzato a gas in una siringa da cinque cc. Rimuovere quindi lo stantuffo dalla siringa da cinque cc, ma non smaltirlo. Applicare un tappo fermo alla siringa. Utilizzare una pipetta per riempire la siringa con la sospensione di EPC.Quindi reinserire lo stantuffo. Rimuovere il cappuccio ed inserire l'estremità della siringa con l'esca all'interno del tubo di silicone aperto del dispositivo fino a quando non è ben alloggiata. Eliminare eventuali bolle avanzando lentamente la soluzione cellulare finché non raggiunge la sommità del capo.Quindi chiudere l'assemblaggio con un tappo esca e sigillarlo con del nastro in un guanto sterile. Inserire l'intero assemblaggio in un supporto per siringhe lavorato e collocarlo in un incubatore a 37 gradi Celsius. Utilizzare un indicatore per verificare che le camere di alloggiamento siano livellate e lasciare incubare l'assemblaggio con una rotazione delicata.Continuare l'intervento subito dopo aver legato la vena cava inferiore somministrando 100 unità di eparina per chilogrammo di peso del maiale. Quindi, applicare immediatamente un clamp sulla vena cava inferiore con un angolo di 45 gradi in posizione distale rispetto alla vena lombare e successivamente in posizione prossimale. Successivamente, utilizzare una lama di bisturi n. 11 e forbici da tessuto per praticare un'otomia venosa longitudinale di quattro centimetri tra i clamp prossimale e distale.Svuotare qualsiasi quantità di sangue dalla vena cava inferiore (IVC) e risciacquare il suo lume interno con DPBS sterile. Inserire ora nell'IVC l'impianto con EPC posizionato o un controllo in metallo nudo per evitare che le cellule si secchino e per rimuovere l'aria. Riempire l'IVC con DPBS contenente cloruro di calcio e cloruro di magnesio.Quindi chiudere l'otomia venosa con una sutura continua in prolene 4-0 e rimuovere una molletta prossimale per eliminare l'aria dalla VCI mediante un leggero sanguinamento retrogrado. Dopo il sanguinamento, rimuovere la molletta distale per mantenere l'impianto in posizione. Applicare una sutura di mantenimento nel tubo in PVC che attraversa la parete venosa.Chiudere la fascia con OPDS su un ago CT. Chiudere lo spazio sottocutaneo con due punti continui in Vicryl 2-0. Quindi applicare le graffe per chiudere la cute.Somministrare fino a 20 millilitri di Marcaine 0,25% per via sottocutanea lungo il sito dell'incisione e coprire la ferita con garza e Tegaderm per il controllo del dolore. Somministrare flu Nixon e ossimorfone per via sottocutanea secondo necessità. Interrompere l'anestesia e, quando il maiale si sveglia, riportarlo nella sua gabbia entro i successivi sette giorni.Somministrare atri ogni 24 ore come profilassi antibiotica e assicurarsi che la patch di fentanil applicata prima dell'intervento chirurgico rimanga aderente per un totale di tre giorni. Dopo tre giorni, gli impianti tubolari in titanio posizionati sono stati rimossi ed è stata esaminata la superficie interna. A una lunghezza d'onda di eccitazione di 550 nanometri, è stato riscontrato uno strato confluenziale di cellule marcate con fluorescenza in un altro tubo.Le sezioni cellulari sono state inoltre colorate con un marcatore di adesione tra piastrine e cellule endoteliali per visualizzare i bordi cellulari. Una vasta gamma di colorazioni può essere utilizzata in questa procedura. Al contrario, un impianto tubolare in titanio nudo si occlude completamente nell'ambiente protrombotico a basso shear rate della vena cava inferiore.Come illustrato nelle immagini A e C, il tubo in titanio con cellule alloggiato è mostrato nell'immagine B ed è rimasto privo di coaguli dopo la nostra procedura di isolamento con picco di sangue. Le EPC compaiono dopo una media di sette giorni di coltura. Durante l'esecuzione della procedura chirurgica, è molto importante scolpire con attenzione e delicatezza la VCI, poiché anche la più piccola lacerazione della VCI o dei suoi rami laterali può portare a esanguinamento del suino. Dopo questa procedura, altri materiali a contatto con il sangue possono essere rapidamente endotelializzati per prevenire la trombosi.Stent vascolari endoteliali, ad esempio, rivestiti con le nostre EPC imitano il rivestimento nativo della parete vascolare e potrebbero prevenire la restenosi e la trombosi dello stent dopo il suo inserimento. La nostra tecnologia Quick See permetterà di rivestire dispositivi intravascolari con cellule endoteliali progenitrici derivate dal sangue del paziente entro pochi minuti, direttamente in sala operatoria o in laboratorio di cateterizzazione. Pertanto, si evita una prolungata coltura ex vivo.Si evita il tempo sul dispositivo stesso e la tecnologia diventa pratica per la traduzione nella pratica clinica.

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Cellule progenitrici endoteliali formanti colonia (ECFCs) sono uno strumento promettente per studiare l'omeostasi vascolare e la riparazione.

Isolamento e di espansione su vasta scala di umano adulto cellule progenitrici endoteliali che formano colonie

Qui, descriviamo una metodologia per fornire cordone umano derivati ​​dal sangue umano endoteliali che formano colonie cellule (ECFCs) e dal midollo osseo le cellule staminali mesenchimali (MSCs), inserita in un collagene / fibronectina gel, per via sottocutanea in topi immunodeficienti. Questa cella / gel combinazione genera una rete umana vascolare che collega con la vascolarizzazione del mouse.

Bioingegneria reti umane in topi immunodeficienti microvascolari

Per migliorare la nostra conoscenza della formazione neotissue cellulare e molecolare, un modello murino della TEVG è stata sviluppata di recente. Gli innesti sono stati impiantati come infrarenali innesti vena cava interposizione di C57BL / 6 topi. Questo modello raggiunge risultati simili a quelli ottenuti nella nostra ricerca clinica, ma nel corso di un time-course di gran lunga ridotto.

L&#39;impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino

Un protocollo step-by-step per il collocamento inter-posizionale di ingegneria tessutale Vessels (TEV) nella carotide di una pecora con anastomosi end-to-end e di valutazione digitale in tempo reale in vivo fino al sacrificio degli animali.

Tecnica chirurgica per l&#39;impianto di ingegneria tessutale vascolari Innesti e successive<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoraggio

Qui, vi presentiamo un protocollo per generare ingegneria dei tessuti dei vasi innesti che sono funzionali per l'innesto in topi con un doppio semina cellule staminali pluripotenti indotte in parte (PiPSC) - derivato cellule muscolari lisce e PiPSC - cellule endoteliali derivate su una nave decellularized ponteggio bioreattore.

Generazione e innesto delle navi tissutale in un modello di topo

Descriviamo un approccio microchirurgico per la generazione di un loop arterovenosa (AV) come un modello di analisi vascolarizzazione in vivo in un ambiente isolato e ben caratterizzato. Questo modello non è solo utile per l'indagine di angiogenesi, ma è anche perfettamente adatto per l'ingegneria vascolarizzato assialmente e tessuti trapiantabili.

Il arterovenosa (AV) loop in un modello di Piccoli Animali per studiare Angiogenesi e ingegneria dei tessuti vascolarizzati

Attualmente qualsiasi tipo di composito vascularized allotransplantation dipende lungo-termine-immunosoppressione, difficile da sostenere per indicazioni non-vita-critici. Vi presentiamo un nuovo tibial VCA modello porcino che può essere utilizzato per studiare osso VCA e viene illustrato l'utilizzo dell'angiogenesi chirurgico per mantenere la vitalità dell'osso senza la necessità di modulazione immunitaria a lungo termine.

Chirurgica dell'angiogenesi in porcina Allotransplantation Tibial: un nuovo grande osso animale vascolarizzato Allotransplantation composito modello

Qui, descriviamo un modello preclinico di grandi animali (porcine) di trapianto ortotopico del cuore che è stato saldamente stabilito e utilizzato per studiare nuove strategie cardioprotettive.

Un modello pre-clinico di trapianto di cuore ortotopico

Questo protocollo mira a trapiantare un cerotto biostampato 3D sull'epicardio di topi infarti che modellano l'insufficienza cardiaca. Include dettagli riguardanti l'anestesia, l'apertura chirurgica del torace, la legatura permanente dell'arteria coronaria anteriore sinistra (LAD) e l'applicazione di un cerotto biostampato sull'area infartata del cuore.

Trapianto di una patch biostampa 3D in un modello Murine di infarto miocardico

Qui, viene presentato un protocollo per l'impianto di un innesto vascolare di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di topo utilizzando la tecnica della cuffia, fornendo un modello animale adatto per studiare i meccanismi di rigenerazione del tessuto vascolare.

Impianto di innesto vascolare di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di topo tramite tecnica della cuffia

Questo studio presenta un modello suino per la valutazione di innesti di piccolo diametro nelle arterie femorali. Il modello imita la dinamica vascolare umana e valuta in modo completo la pervietà dell'innesto, l'emodinamica e il rimodellamento vascolare. Offre una preziosa piattaforma per testare gli innesti vascolari e monitorarli con l'ecografia Doppler e l'angiografia.

Impianto di innesto vascolare femorale in un modello suino per testare innesti vascolari di piccolo diametro

Scopri la tecnica di seeding di tubi di titanio con cellule progenitrici endoteliali autologhe in un modello suino per valutare la protezione contro la trombosi.

Autologo di cellule progenitrici endoteliali-Seeding Tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni (Video) | JoVE Journal

Autologo di cellule progenitrici endoteliali-Seeding Tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni

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