JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:00 min. • June 17th, 2025
Prendi una fetta di cervello di topo fissata chimicamente in una piastra multipozzetto.
Il tessuto contiene assoni circondati da guaine mieliniche ricche di lipidi. I corpi cellulari contengono corpi di Nissl composti da reticolo endoplasmatico ruvido e ribosomi.
Incubare in una soluzione di permeabilizzazione contenente un colorante fluorescente di Nissl. La soluzione permeabilizza le membrane cellulari, consentendo alla colorazione di legarsi all'RNA ribosomiale all'interno dei corpi di Nissl e di marcare i corpi cellulari.
Posizionare il tessuto sotto un microscopio confocale con un sistema di imaging coerente anti-spettroscopia Raman anti-Stokes, o CARS.
Pompa sincronizzata diretta e raggi laser Stokes sul tessuto, sintonizzati per eccitare i legami molecolari nella guaina mielinica ricca di lipidi.
Introdurre un raggio laser a sonda per interagire con i legami eccitati e produrre un segnale anti-Stokes specifico per la mielina.
Un fotorivelatore cattura il segnale per generare un'immagine specifica della mielina.
Utilizza l'imaging confocale per catturare i segnali dai corpi Nissl etichettati.
Sovrapponi le immagini confocali e CARS per visualizzare l'architettura neuronale.
Dopo aver
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