JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:41 min • June 17th, 2025
Inizia con un topo anestetizzato con un cranio esposto chirurgicamente posizionato sotto un macroscopio a fluorescenza.
La testa viene stabilizzata utilizzando una placca sopra il cranio, creando una finestra cranica.
Una cannula contenente un tracciante fluorescente viene inserita nella cisterna magna, o CM, del cervello.
Il CM funge da serbatoio per il liquido cerebrospinale, o CSF, che circola attraverso lo spazio subaracnoideo che circonda il cervello.
Usando la luce visibile, concentrati sul cranio.
Iniettare il tracciante fluorescente nel CM, quindi passare all'imaging a fluorescenza.
Illuminare utilizzando la luce di una lunghezza d'onda specifica per eccitare il tracciante.
Il tracciante assorbe questa luce ed emette segnali fluorescenti.
I traccianti fluorescenti viaggiano con il liquido cerebrospinale, consentendo la visualizzazione del suo flusso attraverso lo spazio subaracnoideo negli spazi perivascolari che circondano le arterie cerebrali e penetrano
nelle arteriole, entrando nel tessuto cerebrale.
Cattura il segnale fluorescente nel tempo per visualizzare il flusso del liquido cerebrospinale.
Posizionare con cautela il mouse e la pompa di infusione attaccata alla cannula su un carrello per il trasporto al macroscopio e posizionare il supporto per la testa sul tavolino del macroscopio. Assicurarsi che la linea dalla pompa a siringa alla Cannula Cisterna Magna non sia tesa e che non presenti attorcigliamenti. Osservare la frequenza respiratoria e la colorazione rosa delle mucose per confermare una buona ossigenazione.
Accendere la fotocamera del microscopio e il diodo a emissione di luce e avviare la modalità live. Regolare l'ingrandimento del campo di imaging in modo che la sutura nasofrontale nella parte superiore del campo e la sutura lambdoidea nella parte inferiore possano essere visualizzate chiaramente. Una volta in posizione, fissare il supporto della testa al tavolino del macroscopio e mettere a fuoco il macroscopio sul cranio esposto fino a quando il piano focale non si trova sui lati laterali delle ossa parietali, posteriormente alle suture coronali.
Per l'infusione di tracciante CSF, impostare la pompa di infusione sulla velocità e sul volume appropriati e impostare la lunghezza d'onda di eccitazione e il tempo di esposizione appropriati per il tracciante per ciascun canale. Quindi verificare che la funzione di attivazione sul macroscopio sia corretta prima di avviare contemporaneamente l'infusione del tracciante e l'imaging.