Imaging dei tessuti profondi del cervello di un pesce zebra utilizzando un microscopio a fluorescenza a tre fotoni

Posizionare una capsula di Petri contenente un pesce zebra anestetizzato con un tubo inserito nella bocca per erogare acqua ossigenata sotto la lente dell'obiettivo a basso ingrandimento del microscopio a tre fotoni.

Il cervello del pesce zebra contiene neuroni geneticamente modificati che esprimono proteine marcate in fluorescenza per la visualizzazione dei tessuti profondi durante l'imaging.

Illumina la parabola utilizzando una sorgente luminosa a LED e regola i parametri di visualizzazione per la nitidezza dell'immagine.

Abbassare la lente dell'obiettivo fino a quando il pesce zebra non è visibile, centrando la testa nel campo visivo.

Sostituire l'obiettivo a basso ingrandimento con un obiettivo ad alta risoluzione per l'imaging a tre fotoni.

Abbassare con cautela l'obiettivo fino a quando la testa è visibile senza contatto fisico e impostare i valori dell'asse su zero.

Spegnere la sorgente luminosa a LED e chiudere la tenda scura per ridurre al minimo il rumore di fondo.

Imposta i parametri di imaging ed esegui l'imaging a tre fotoni, dove lunghezze d'onda più lunghe consentono l'eccitazione a tre fotoni dei tessuti profondi.

Dopo l'eccitazione, i fluorofori neuronali emettono fluoresc