Imaging della migrazione delle cellule tumorali nel tessuto del glioblastoma mediante microscopia confocale a scansione time-lapse

Inizia con una fetta di tessuto di glioblastoma ottenuta da un tumore asportato chirurgicamente.

Mantenere la fetta di tessuto in un terreno di coltura per favorire la sopravvivenza cellulare.

Le cellule tumorali all'interno della fetta esprimono una proteina fluorescente verde, o GFP, che facilita la visualizzazione delle cellule tumorali durante la migrazione cellulare.

Posizionare la piastra di coltura contenente le fette di tessuto sul tavolino del microscopio confocale.

Posizionare un'incubatrice da palco per mantenere la temperatura del fluido.

Seleziona un obiettivo e visualizza le colture di fette al microscopio.

I microscopi utilizzano la luce laser per eccitare le proteine fluorescenti nelle cellule.

Ora, scansiona il campione strato per strato per acquisire immagini a varie profondità.

Impila le immagini per creare una rappresentazione 3D dettagliata delle celle.

Quindi, acquisisci immagini Z-stack a intervalli regolari per monitorare il movimento e la direzione delle cellule, consentendo lo studio della migrazione delle cellule tumorali nel tempo.

Posizionare il piatto in un'incubatrice superiore del tavolino del microscopio sigillato a 37 gradi, 5% CO₂ di un microscopio confocale. Utilizza un obiettivo ad aria 10x a lunga distanza di lavoro in combinazione con l'imaging a fotone singolo o multiplo per acquisire immagini tridimensionali e risolte nel tempo della migrazione cellulare. Visualizzare la fetta con il microscopio, individuando un campo adatto con un'adeguata densità di cellule tumorali marcate in fluorescenza tra il bordo della fetta e il centro del tessuto. Quindi, nella modalità di analisi multidimensionale del software di imaging, impostare il centro dello z-stack in modo tale che tutte le posizioni da riprendere contengano un segnale cellulare fluorescente visibile. E imposta un tempo adeguato per ogni acquisizione z-stack.