JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:33 min. • June 17th, 2025
Prelevare un vetrino coprioggetti rivestito di polimero contenente una coltura mista di neurone-astrociti nella camera di registrazione.
Queste cellule trasfettate esprimono proteine sensibili al calcio sul plasma e sulle membrane dell'ER, fluorescenti al legame con il calcio per tracciare la dinamica subcellulare del calcio.
Aggiungere terreni contenenti ioni calcio e coprire la camera per evitare l'evaporazione.
Posizionare la camera sotto un microscopio a fluorescenza.
Gli ioni calcio si legano alle proteine sensibili al calcio. Dopo l'irradiazione con luce blu, le proteine sensibili al calcio sulla membrana esterna dell'ER diventano fluorescenti in verde. Usa questa fluorescenza verde per localizzare gli astrociti.
Quindi, irradiare con luce verde. Le proteine sensibili al calcio sulla membrana plasmatica emettono fluorescenza in rosso. Confermare la presenza di fluorescenza rossa nello stesso astrocita che mostra fluorescenza verde.
Registra immagini time-lapse di proteine sensibili al calcio sulla membrana plasmatica, seguite dalle proteine sensibili al calcio sulla membrana esterna dell'ER.
Analizza le immagini per osservare l'attività spontanea del calcio specifica del compartimen
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici