La costrizione cronica del nervo sciatico e Ipersensibilità Testing Pain in Rats

L'obiettivo generale di questa procedura è eseguire la costrizione cronica, la lesione del nervo sciatico, un modello di dolore neuropatico di roditore comunemente usato e misurare quantitativamente i comportamenti del dolore risultanti. Ciò si ottiene posizionando prima quattro legature intestinali cromiche attorno al nervo sciatico esposto a livello della metà della coscia per creare una lesione da costrizione al nervo sciatico. Successivamente, monitorare i comportamenti del dolore nella zampa posteriore nei punti temporali desiderati misurando quantitativamente la soglia di ritiro della zampa rispetto allo stimolo meccanico utilizzando un ante di von Fray e la latenza di ritiro della zampa rispetto allo stimolo termico utilizzando un misuratore di analgesia plantare.

In definitiva si possono ottenere risultati che dimostrano l'esistenza di dolore meccanico e termico, ipersensibilità della zampa posteriore lesionata attraverso la misurazione delle risposte di ritiro evocate a stimoli sia meccanici che termici. Questo metodo di lesione dei nervi periferici sviluppato per la prima volta da bene e Z può aiutarci a rispondere a domande chiave nel campo del dolore cronico, come ad esempio quali sono i meccanismi periferici e centrali attraverso i quali viene generato il dolore neuropatico. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia del dolore neuropatico perché questo modello fornisce la base per esaminare nuove strategie per ridurre l'ipersensibilità al dolore.

In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché posizionare le suture intestinali cmic attorno al nervo statico e una tenuta appropriata per causare lesioni nervose sufficienti ma non eccessive è particolarmente impegnativo. Per iniziare questa procedura, disinfettare la superficie di lavoro chirurgica con etanolo al 70% e preparare le graffette e i tamponi di garza per strumenti sterili, che sono stati precedentemente sterilizzati in autoclave. Successivamente, anestetizzare il ratto in una camera di induzione utilizzando fluoro ISO al 5%.

Fornire il 2% di fluoro ISO attraverso una maschera facciale su misura durante l'intervento chirurgico. Successivamente, radere la zampa posteriore sinistra del ratto, quindi posizionare l'animale su un tappetino riscaldante termoregolato a 37 gradi Celsius. Applicare un unguento oftalmico lubrificante sugli occhi.

Preparate quindi la sutura intestinale cromica tagliandola in piccoli pezzi di circa tre centimetri, immergeteli in soluzione fisiologica sterile. Quindi, sterilizzare l'area rasata con tre applicazioni alternate di soluzione di alcol e iodio. Con l'animale sdraiato sul torace, sollevare la zampa posteriore sinistra e tenere il femore a 90 gradi rispetto alla colonna vertebrale usando del nastro adesivo sul piede.

Quindi praticare un'incisione sulla pelle a circa tre o quattro millimetri sotto il femore. Separare la pelle dal muscolo che circonda l'incisione tagliando il tessuto connettivo. Usa un paio di forbici smussate per tagliare il tessuto connettivo tra i muscoli glutei superficiali e bicipiti femminili.

Successivamente, utilizzare un divaricatore per allargare lo spazio tra i due muscoli al fine di consentire una chiara visualizzazione del nervo sciatico, quindi utilizzare le pinze e le micro forbici per liberare delicatamente circa 10 millimetri del nervo sciatico dal tessuto connettivo circostante. Legare la prima legatura prossimale alla triforcazione del nervo sciatico per ogni legatura. Inizia con un singolo anello sciolto.

Quindi afferra le due estremità vicino all'anello e tira fino a quando l'anello è appena aderente e la legatura non scivola lungo il nervo. Quindi tieni l'anello nella sua posizione corretta e posiziona un secondo anello sopra il primo anello per completare il nodo. Quindi, tagliare le estremità libere della legatura a una costrizione rotonda di un millimetro del nervo dovrebbe essere minima.

Ripeti i passaggi per le restanti tre legature legando ogni legatura aggiuntiva un millimetro più prossimale della precedente. Inoltre, con una costrizione minima alla fine dell'intervento, utilizzare punti di sutura per chiudere lo strato muscolare e graffette per fissare la pelle. Quindi, usa la soluzione di iodio per sterilizzare la ferita.

Osservare attentamente l'animale durante il periodo di recupero dall'anestesia e lasciarlo riprendersi in una gabbia separata con lettiera di carta piatta. Prima di iniziare l'esperimento. Maneggiare l'animale ogni giorno per diversi giorni.

Quindi, prima del test comportamentale, abituare il ratto nel recinto. L'ambiente di test deve essere mantenuto silenzioso e ben controllato con livelli di temperatura e umidità costanti e ogni sessione di test deve essere eseguita in un momento simile della giornata. Per studiare la soglia di astinenza meccanica il giorno del test, posizionare il ratto nella gabbia di prova rialzata del pavimento in rete, da 15 a 30 minuti prima dell'esperimento, utilizzando un anter di von sfilacciamento plantare dinamico, posizionare l'unità di stimolazione tattile con il filamento direttamente sotto la superficie centrale della seminatrice della zampa posteriore e premere il tasto di avvio.

Questo solleva il filamento per stimolare meccanicamente la superficie della fioriera della zampa posteriore con una forza crescente. Successivamente, registra la soglia di prelievo meccanico dalle zampe posteriori ferite e non ferite. Questo dispositivo registra e visualizza automaticamente il valore massimo fornito in caso di reazione al ritiro.

Ripetere la stimolazione meccanica tre volte con un intervallo di circa cinque minuti tra il test degli stimoli e le zampe posteriori illese in un ordine controbilanciato, quindi calcolare la media delle soglie di ritiro della zampa. Per studiare la latenza di prelievo termico il giorno del test, posizionare il ratto sul pavimento di vetro. Testare la gabbia da 15 a 30 minuti prima dell'esperimento utilizzando uno strumento per analgesia termica, posizionare la sorgente a infrarossi direttamente sotto la superficie centrale della seminatrice della zampa posteriore e premere il tasto di avvio.

Questo espone la superficie della fioriera della zampa posteriore a un raggio di calore radiante attraverso una superficie di vetro trasparente. Quindi registra la latenza di prelievo sia dalle zampe posteriori ferite che da quelle illese. Questo dispositivo registra automaticamente il tempo impiegato dall'inizio dello stimolo termico al ritiro della zampa dalla fonte di calore.

Ripetere la stimolazione con il calore almeno tre volte con un intervallo di circa cinque minuti tra gli stimoli che testano le zampe posteriori ferite e non ferite in un ordine controbilanciato, quindi calcolare la media del ritiro della zampa Le latenze qui mostrano la soglia di ritiro meccanico sia nelle zampe ferite che in quelle non ferite dei ratti wistar prima e fino a 12 giorni dopo la costrizione cronica del nervo sciatico. C'è una significativa riduzione della soglia di ritiro della zampa agli stimoli meccanici nella zampa posteriore omolaterale lesionata rispetto alla zampa posteriore controlaterale illesa. Qui è mostrata la latenza di ritiro termico sia nelle zampe ferite che in quelle non ferite prima e fino a 12 giorni dopo la costrizione cronica del nervo sciatico.

Allo stesso modo, la latenza di ritiro termico è significativamente ridotta nella zampa posteriore omolaterale lesionata rispetto alla zampa posteriore controlaterale illesa. Una volta padroneggiato, l'intervento chirurgico CCI può essere eseguito correttamente in soli 20 minuti per animale, con conseguente ipersensibilità al dolore a lungo termine della zampa posteriore. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di legare liberamente le legature poiché è l'auto-strangolamento sotto le legature a seguito dell'edema, che provoca una costrizione dopo il suo sviluppo.

Questa tecnica di lesione dei nervi periferici combinata con il test dell'onda P di ipersensibilità al dolore per i ricercatori nel campo del dolore neuropatico per esplorare i meccanismi alla base del dolore cronico dovuto alla lesione nervosa.