La coda di test Sospensione

Il test della sospensione della coda è un test comportamentale comune utilizzato per prevedere l'efficacia antidepressiva di varie manipolazioni sperimentali. Questo filmato mostra le procedure di questo test. Il test di sospensione della coda è convalidato per il topo e non è raccomandato per i roditori più grandi.

Nel test della sospensione della coda, i topi sono sospesi per la coda. Il mouse rimane sospeso per sei minuti. I comportamenti del soggetto vengono registrati durante questo periodo.

Al termine del periodo di prova di sei minuti, il nastro viene rimosso dalla coda del soggetto. Al termine del test, le registrazioni visive vengono trasferite su un computer o un monitor video. Per l'analisi, un osservatore misura il tempo che un topo trascorre lottando durante l'intera sessione di sei minuti.

I composti con proprietà antidepressive aumentano la quantità di tempo che trascorro in difficoltà. Ciò si riflette in periodi di immobilità più brevi. Ad esempio, abbiamo riportato che il farmaco stabilizzante dell'umore litio, che è clinicamente utile come farmaco antidepressivo aggiuntivo, ha ridotto il tempo di immobilità nel test di sospensione della coda.

Ciao, mi chiamo Sean del laboratorio del Dr.Todd Gould nel Dipartimento di Psichiatria dell'Università del Maryland School of Medicine di Baltimora. Ciao, sono Chantel dello stesso laboratorio. In questo video, ti mostreremo come eseguire e valutare il test della sospensione della coda.

Il test della sospensione della coda viene utilizzato per valutare la potenziale efficacia dei trattamenti antidepressivi. Andiamo quindi in laboratorio e mostriamo come eseguire l'esperimento. Sebbene non sia necessario, utilizziamo una scatola di sospensione posteriore appositamente progettata.

Per questo test. La nostra scatola di sospensione posteriore è divisa in quattro scomparti, ciascuno riservato a un singolo mouse. I divisori impediscono ai topi di osservarsi a vicenda durante il test.

Tuttavia, è possibile utilizzare un ripiano o un'altra struttura per sospendere i topi. Le dimensioni della scatola di prova della sospensione della coda sono selezionate per evitare che i topi raggiungano e si aggrappino ai bordi. Prima di iniziare l'esperimento, tagliare abbastanza frammenti di nastro adesivo e segnare il segmento che verrà utilizzato per l'adesione alla coda.

Nel nostro laboratorio, utilizzeremo frammenti di nastro adesivo di 17 centimetri. A due centimetri dall'estremità di questo frammento di nastro adesivo dovrebbe essere contrassegnato e verrà utilizzato per aderire alla coda. Posizioniamo la coda al centro di questa porzione di due centimetri.

Posizionare la scatola di prova della sospensione della coda e la videocamera. Prima di introdurre gli animali, la scatola deve essere accuratamente pulita con una soluzione sterilizzante per neutralizzare gli odori lasciati dai soggetti precedenti. Nel nostro laboratorio utilizziamo due diverse scatole di sospensione posteriori, identiche in tutto tranne che nel colore.

Per i topi albini, una scatola grigio scuro fornisce un buon contrasto per le registrazioni video. Per i ceppi di topi di colore più scuro, è appropriata una scatola bianca. Avviare la macchina per il rumore bianco.

Dovrebbe mascherare eventuali suoni intermittenti. Porta i topi nella sala operatoria per acclimatarsi. Le condizioni nella stanza devono essere mantenute costanti e prive di rumori, variazioni dei livelli di luce e altri possibili disturbi.

Questo periodo è generalmente di almeno un'ora. Una volta terminato il periodo di acclimatazione, il test può procedere per evitare che alcuni ceppi di topi si arrampichino sulla coda. Durante il test della sospensione della coda, utilizziamo cilindri di plastica che posizioniamo sopra le code.

Questi cilindri riposano alla base della coda durante il test. Nel nostro laboratorio utilizziamo cilindri di plastica lunghi quattro centimetri, con un diametro di un centimetro e un peso di 1,5 grammi. Se si utilizzano cilindri di plastica per evitare l'arrampicata, è necessario posizionarli sulle code prima di applicare il nastro.

Applichiamo il nastro adesivo all'estremità della coda con due o tre millimetri di coda rimasti all'esterno del nastro. Fai aderire il nastro alle code dei topi nella loro gabbia domestica. Usa l'estremità contrassegnata del nastro e assicurati che il nastro aderisca alla coda e torni su se stesso.

Una volta applicato il nastro, fissare ogni topo alle pareti della gabbia per evitare che il nastro adesivo sia attaccato a diversi animali. Completa rapidamente questo processo. In caso contrario, i topi saranno sottoposti a stress inutili.

La registrazione deve essere avviata prima che gli animali siano sospesi. Sospendere gli animali posizionando l'estremità libera del nastro sulla barra di sospensione in un ordine che sia controbilanciato tra i gruppi di trattamento e in modo da non ostruire la visuale della telecamera. Poiché i topi vengono sospesi uno per uno, ogni animale ha un orario di inizio leggermente diverso per il test.

Assicurati di iniziare a segnare ogni mouse esattamente all'inizio del suo periodo di sospensione. Non ostruire la visuale della telecamera è importante. Poiché l'intera sessione di sospensione della coda sarà contrassegnata come ostruzione, la visuale della telecamera potrebbe portare a dati mancanti.

Assicurarsi che tutte le estremità del nastro siano perpendicolari alla barra di sospensione con la stessa lunghezza di gioco. Per ogni materia, avviare il timer. Il test della sospensione della coda è di sei minuti.

Una volta trascorso il periodo di prova di sei minuti, rimuovere il nastro adesivo dall'estremità di ciascuna coda e riportare i topi nella gabbia di casa. Al termine del test, le informazioni sull'argomento devono essere videoregistrate. Dopo che i topi sono stati riportati nella stanza della colonia, la scatola del test deve essere accuratamente pulita e strofinata con una soluzione sterilizzante.

Ora che abbiamo terminato con i test, discuteremo il punteggio dei comportamenti. L'unica variabile che viene tipicamente valutata quando si valuta il test di sospensione della coda è il tempo in cui gli animali sono immobili Per ottenere il tempo di immobilità, misureremo il tempo in cui i topi sono mobili e lo sottrarremo dal tempo del test di sei minuti. Segneremo tutti i sei minuti del test.

Per prima cosa copriamo i topi che non vengono valutati per consentire all'osservatore di concentrarsi su un solo animale per ogni tempo trascorso dal topo. Il cellulare è misurato da un cronometro sullo schermo controllato da un dispositivo gamepad. Qui, come puoi vedere, ci sono due cronometri separati sullo schermo che vengono controllati contemporaneamente.

Il primo cronometro esegue il conto alla rovescia a partire da 360 secondi e indica all'osservatore la durata del test. Il secondo cronometro misura il tempo in cui i soggetti rimangono mobili. Come si può notare, il secondo cronometro è coperto dal primo cronometro e solo i suoi decimali in millisecondi sono visibili all'osservatore.

In questo modo, l'osservatore sarà in grado di vedere se il cronometro sta contando, ma non potrà vedere il tempo totale di mobilità fino a quando il punteggio non sarà completato. Lo facciamo per evitare che i pregiudizi dell'osservatore influenzino i risultati. I topi, soprattutto all'inizio della sessione, manifestano comportamenti legati alla fuga.

Questi comportamenti includono il tentativo di raggiungere le pareti dell'attrezzo e la barra di sospensione, forti scosse del corpo e movimenti degli arti simili alla corsa. Questi movimenti costituiscono chiaramente la mobilità. Tuttavia, man mano che il test procede, i movimenti diventano più sottili.

Nel nostro laboratorio non contiamo come mobilità i piccoli movimenti che sono confinati alle zampe anteriori, ma senza alcun movimento delle zampe posteriori. Oltre a questo, le oscillazioni simili a pendolo dovute al guadagno di slancio durante i precedenti periodi di mobilità non sono considerate mobilità. Vediamo ora il punteggio di una vera e propria sessione di test delle sospensioni posteriori.

In genere viene riportato il tempo di immobilità, non il tempo di mobilità. Il tempo di immobilità può essere calcolato sottraendo il tempo di mobilità totale dal tempo di test di 360 secondi. Punteggio. Il test della sospensione della coda richiede allenamento e pratica.

È importante stabilire uno standard interno al laboratorio e formare nuovi osservatori fino a raggiungere un alto livello di affidabilità. In questo articolo, spieghiamo come eseguire e valutare il test della sospensione della coda. Buona fortuna per i tuoi esperimenti futuri.