Name: Lendotelina-1 indotta cerebrale media occlusione dellarteria modello per lictus ischemico con guida laser flussimetria Doppler in Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Scopri il modello di occlusione dell'arteria cerebrale media indotto da endotelina-1 per studiare l'ictus ischemico nel ratto. Questo metodo meno invasivo utilizza flussimetria laser Doppler per monitorare il flusso ematico cerebrale durante la procedura chirurgica.

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Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni dal American Heart Association Greater Affiliato Sud-Est (09GRNT2060421), l&#39;American Medical Association, e presso l&#39;Università della Florida clinica e traslazionale Science Institute. Adam Mecca è un NIH / NINDS, compagno NRSA predoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt ricevuto il sostegno predoctoral borsa di studio presso l&#39;Università di programma di formazione multidisciplinare in Florida Ipertensione (T32 HL-083810).

Questo protocollo è stato approvato dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso (IACUC) presso l&#39;Università della Florida, ed è in conformità con la &quot;Guida per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio&quot; (ottava edizione, Accademia Nazionale delle Scienze, 2011). Materiale <ol><li> Animali: otto settimane di età, di sesso maschile, Sprague Dawley (Charles River, Farms Wilmington, MA, USA) del peso di 250-300 g al momento dell&#39;intervento chirurgico. </li><li> Anestesia <ol class="lalpha"><li> Inalazione sistema di anestesia (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurano anestetico (Farmaceutici Baxter, Deerfield, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotassico sistema (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Piccolo animale sistema stereotassico </li><li> Non rottura orecchio barre per i ratti </li><li> Gas testa porta l&#39;anestesia per i ratti </li></ol></li><li> Regolazione della temperatura<ol class="lalpha"><li> BAT-12 Termometro microsonda (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, Stati Uniti d&#39;America) </li><li> T / POMPA, TP600 coperta termica (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, Stati Uniti d&#39;America) </li></ol></li><li> Strumenti chirurgici <ol class="lalpha"><li> Manico bisturi e # 11 della lama, iris forcipe, Graefe pinze, divaricatori bulldog pinza, cacciavite, siringa da 10 ml con 26 gauge smussato (Strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL, Stati Uniti d&#39;America) </li><li> Micromotore trapano e supporto stereotassica, Quintessential stereotassico Injector (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) </li><li> 1,0 millimetri fresa trapano rotondo, 1,0 mm di cono rovesciato trapano fresa (Roboz chirurgico Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Forniture chirurgiche <ol class="lalpha"><li> Viti di montaggio 0-80 x 3/32 con 2.4 mm di lunghezza dell&#39;albero, da 21 gauge cannula guida [4 millimetri a lungo sotto il piedistallo] e manichino cannula (Materie plastiche uno, Roanoke, VA, USA) </li><li> Jet acrilico protesi e liquidi (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Wheeling, IL, USA) </li><li> 3,0 nylon sutura (Oasis, Mettawa, IL, USA) </li><li> Tamponi di cotone, unguento oculare Puralube (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA) </li><li> Tosatrici elettriche (Oster, Providence, RI, USA) </li></ol></li><li> Prodotti chimici <ol class="lalpha"><li> L&#39;endotelina-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Clorexidina al 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA) </li><li> Buprenorfina HCl (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA) </li></ol></li><li> Visualizzazione Attrezzature <ol class="lalpha"><li> Microscopio chirurgico (Strumento Seiler e Manufacturing, St. Louis, MO, USA) </li><li> Fibra ottica illuminatore (TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Laser Doppler flussimetria sistema (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> StMatita sonda Andard </li><li> Porta sonda </li><li> Sangue flussometro </li><li> Powerlab 4/30 con LabChart 7 </li></ol></li><li> Misurazione del volume dell&#39;infarto <ol class="lalpha"><li> Rat cervello matrice (Zivic Miller-Lab., Inc., Allison Park, PA, USA) </li><li> 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) diluito a 0,05% in PBS </li><li> Scanner piano (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J software (ImageJ 1.42q software, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. Pre-chirurgiche Steps <ol><li> Prima dell&#39;intervento, i topi sono alloggiati sotto una 12:12 ciclo luce / buio con libero accesso all&#39;acqua e roditori chow. </li><li> Anestesia viene indotta con 4% isoflurano in 100% O 2 miscela di gas in una camera di induzione fino ratto non ritiri a pinch zampa posteriore. </li><li> Latecnica settico dovrebbe essere mantenuta durante questa procedura, compreso l&#39;uso di guanti sterili, sterili strumenti chirurgici, e un telo chirurgico sterile 11. </li><li> La parte superiore della testa è rasata con tosatrici elettriche. </li><li> Il ratto viene posto in posizione prona su un tampone assorbente sdraiata su una temperatura controllata superficie operativa (coperta termica). </li><li> La testa viene posta nell&#39;apparecchio stereotassico partire posizionamento della maschera frontale del gas anestetico. </li><li> Successivamente, le barre auricolari sono inseriti e serrati. </li><li> Durante la procedura di anestesia viene mantenuta con isofluorano 2% in 100% O 2 miscela di gas. </li><li> Unguento oftalmico lubrificante viene applicato a entrambi gli occhi, e le palpebre sono chiuse per prevenire l&#39;essiccamento occhio durante la procedura chirurgica. </li><li> Una sonda di temperatura rettale è inserito per mantenere una temperatura interna costante di 37 animali ± 0,5 ° C. </li><li> Con la testa saldamente nella stereotassicodispositivo, l&#39;area chirurgica è purificato con alternanza di clorexidina al 2% e soluzione fisiologica per tre volte. </li></ol> 2. Fasi chirurgiche <ol><li> Utilizzando un bisturi, una incisione mediana è fatta sulla pelle sovrastante la calvarium dagli aspetti più caudali degli occhi (nasion) fra le orecchie (linea nucale superiore). </li><li> La pelle viene quindi retratto lateralmente con 3 pinze bulldog. </li><li> Tessuto connettivo è rimosso dal cranio con tamponi di cotone asciutti modo che molteplici strutture può essere visto chiaramente. Questi includono bregma, la sutura coronale, e la cresta a destra laterale del cranio. Tamponi di cotone sono usati per rimuovere il sangue dal campo operatorio. </li><li> Utilizzando il microscopio operatorio, bregma si trova, ed i manipolatori stereotassiche vengono regolati fino alla rotonda 1,0 millimetri fresa trapano viene azzerato a bregma. </li><li> La fresa trapano è poi spostato a 1,6 mm e 5,2 mm anteriore laterale bregma. </li><li> Un foro fresa che penetra il cranio si è esercitato per cannula posizionamento (Figura 1). Detriti in eccesso e il sangue sono continuamente spengono con tamponi di cotone. </li></ol> A questo punto, una cannula guida può essere inserito (passo 7) o diretta ET-1 attraverso il foro di iniezione può essere eseguita fresa (procedere direttamente al punto 16). <ol start="7"><li> Successivamente, fori fresa per 3 viti di montaggio si sono esercitati nello spessore parziale del cranio con un 1,0 mm di cono rovesciato trapano fresa (Figura 1). Un buco si è esercitato in ogni osso frontale di circa 1-2 mm anteriormente alla sutura coronale e 1-2 mm lateralmente alla sutura sagittale. Un buco si è esercitato nell&#39;osso parietale circa 2-3 mm posteriormente alla sutura coronale e 2-3 mm lateralmente alla sutura sagittale ipsilaterale al foro di guida cannula fresa. Tre 0-80 x 3/32 viti di montaggio sono posti in questi buchi fresa e fornirà il supporto per il cemento che tiene nella cannula. Le viti devono essere solo advanced 2 o 3 giri in modo da non danneggiare la dura madre. </li&gt; <li> La cannula guida è inserito nel supporto stereotassica cannula e bregma si trova. </li><li> I manipolatori stereotassiche vengono regolati fino a quando la cannula guida è azzerato a bregma. La cannula viene spostato nel foro situato fresa anteriore 1,6 millimetri e 5,2 mm laterale bregma. </li><li> Infine, la cannula guida è abbassato nel foro della fresa con la posizione della punta finale di 4,5 mm al bregma ventrale. </li><li> Laser Doppler sonda collocamento di flusso (opzionale) <ol class="lalpha"><li> Al fine di monitorare il flusso ematico cerebrale utilizzando LDF, un porta sonda può essere collocato in posizione prima apposizione della cannula guida con cemento dentale. </li><li> La base porta sonda viene tagliata a filo con il piedistallo, tranne per la scheda a forma di piccolo cuneo. </li><li> Il supporto sonda viene poi collocato posteriormente alla cannula guida e appena mediale alla cresta laterale del cranio con la linguetta orientata medialmente (Figura 1). </li><li> Il titolare sonda e gUIDA cannula sono apposti insieme con cemento dentale. </li></ol></li><li> Cemento dentale viene quindi utilizzato per fissare la cannula in posizione. Il cemento è in contatto con tutte e tre le viti e circonda l&#39;intera base della cannula. </li><li> Il cemento dovrebbe essere completamente asciutto prima della rimozione del supporto cannula. Questa operazione richiede circa 5 minuti. </li></ol> Dopo queste operazioni, l&#39;incisione chirurgica può essere chiuso e il manichino cannula può essere avvitato nella cannula guida. In alternativa, ET-1 indotta MCAO può essere eseguita sul ratto dopo un periodo di recupero dalla chirurgia impianto cannula. Per questo metodo, passo 19 deve essere eseguita dopo e passi 14-18 possono essere eseguite in un secondo momento. Effettuare guida impianto cannula e ET-1 iniezione durante l&#39;intervento stesso, passo 14 deve essere eseguita dopo. <ol start="14"><li> La siringa di infusione è caricato con ET-1 (diluito a 80 pM in PBS) e poi montate nel iniettore stereotassico. </li><li> Ilmanipolatori stereotassiche vengono regolati finché la punta dell&#39;ago viene azzerato al bordo della cannula guida. </li><li> La punta dell&#39;ago è abbassato attraverso la cannula guida in una posizione di 17,2 millimetri ventrale al bordo della cannula guida. Se una cannula guida non viene utilizzato, la punta dell&#39;ago viene azzerato al bregma e abbassato attraverso il foro di una fresa 8,7 millimetri posizione ventrale al bregma. </li><li> 3 ml di 80 mM ET1 viene infusa a una velocità di 1 ml al minuto. </li><li> La siringa viene lasciato in posizione per 3 minuti dopo l&#39;infusione è completa e quindi lentamente rimosso. </li><li> L&#39;incisione viene chiusa con sutura di nylon 3,0 e il manichino cannula viene avvitata nella cannula. </li><li> Una dose di analgesico appropriato (ad esempio buprenorfina a 0,05-0,1 mg / kg) deve essere utilizzato dopo l&#39;intervento chirurgico per ridurre al minimo il dolore e il disagio durante il periodo di recupero. </li><li> Il ratto viene rimosso dalla sala operatoria e collocato in un ambiente caldo, zona di recupero asciutto per prevenire l&#39;ipotermia, con connessione, facile accesso a cibo e acqua dolce. </li&gt; </ol>

<ol><li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li>
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<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
<li>Gonzalez, C. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+different+models+of+stroke+on+behaviour+and+brain+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology.</a> Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).</li>
<li>Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model+for+ischemic+stroke+with+laser+doppler+flowmetry+guidance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice.</a> J. Vis. Exp. (51), e2879(2011).</li>
<li>Sharkey, J., Butcher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+an+experimental+model+of+stroke+produced+by+intracerebral+microinjection+of+endothelin-1+adjacent+to+the+rat+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery.</a> J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).</li>
<li>Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelin-1-induced+reductions+in+cerebral+blood+flow%3A+dose+dependency%2C+time+course%2C+and+neuropathological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li>
<li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

L&#39;ET-1 indotta MCAO è un modello sperimentale consolidata di ictus ischemico che viene regolarmente utilizzato in molteplici ceppi di ratto. Molte variabili, come ceppo ratto, animale età, temperatura corporea, metodo di anestesia, e competenza operatore può portare ad un aumento dei volumi di variabilità infarto quando si utilizza questo modello 5, 14. Tuttavia, alcuni ricercatori hanno dimostrato che i vantaggi di questo modello sono l&#39;approccio relativamente non-invasiva, dose-risposta del flusso ...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li> Animali: otto settimane di età, di sesso maschile, Sprague Dawley (Charles River, Farms Wilmington, MA, USA) del peso di 250-300 g al momento dell&#39;intervento chirurgico. </li><li> Anestesia <ol class="lalpha"><li> Inalazione sistema di anestesia (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurano anestetico (Farmaceutici Baxter, Deerfield, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotassico sistema (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Piccolo animale sistema stereotassico </li><li> Non rottura orecchio barre per i ratti </li><li> Gas testa porta l&#39;anestesia per i ratti </li></ol></li><li> Regolazione della temperatura <ol class="lalpha"><li> BAT-12 Termometro microsonda (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, Stati Uniti d&#39;America) </li><li> T / POMPA, TP600 coperta termica (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, Stati Uniti d&#39;America) </li></ol></li><li> Strumenti chirurgici <ol class="lalpha"><li> Manico bisturi e # 11 della lama, iris forcipe, Graefe pinze, divaricatori bulldog pinza, cacciavite, siringa da 10 ml con 26 gauge smussato (Strumenti di precisione del Mondo, Inc., Sarasota, FL, Stati Uniti d&#39;America) </li><li> Micromotore trapano e supporto stereotassica, Quintessential stereotassico Injector (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) </li><li> 1,0 millimetri fresa trapano rotondo, 1,0 mm di cono rovesciato trapano fresa (Roboz chirurgico Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Forniture chirurgiche <ol class="lalpha"><li> Viti di montaggio 0-80 x 3/32 con 2.4 mm di lunghezza dell&#39;albero, da 21 gauge cannula guida [4 millimetri a lungo sotto il piedistallo] e manichino cannula (Materie plastiche uno, Roanoke, VA, USA) </li><li> Jet acrilico protesi e liquidi (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Wheeling, IL, USA) </li><li> 3,0 nylon sutura (Oasis, Mettawa, IL, USA) </li><li> Tamponi di cotone, l&#39;unguento oculare Puralube (Fisher scientific, Pittsburg, PA, USA) </li><li> Tosatrici elettriche (Oster, Providence, RI, USA) </li></ol></li><li> Prodotti chimici <ol class="lalpha"><li> L&#39;endotelina-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Clorexidina al 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA) </li><li> Buprenorfina HCl (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA) </li></ol></li><li> Visualizzazione Attrezzature <ol class="lalpha"><li> Microscopio chirurgico (Strumento Seiler e Manufacturing, St. Louis, MO, USA) </li><li> Fibra ottica illuminatore (TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Laser Doppler flussimetria sistema (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> Matita sonda standard </li><li> Porta sonda </li><li> Sangue flussometro </li><li> Powerlab 4/30 con LabChart 7 </li></ol></li><li> Misurazione del volume dell&#39;infarto <ol class="lalpha"><li> Rat cervellomatrice (Zivic Miller-Lab., Inc., Allison Park, PA, USA) </li><li> 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) diluito a 0,05% in PBS </li><li> Scanner piano (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J software (ImageJ 1.42q software, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA) </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

l&#39;endotelina-1 indotta cerebrale media occlusione dell&#39;arteria modello per l&#39;ictus ischemico con guida laser flussimetria doppler in rat

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

L&#39;ictus è la prima causa di disabilità e la terza causa principale di morte nel mondo, che costano una cifra stimata di 70 miliardi negli Stati Uniti nel 2009 1, 2. Diversi modelli di ischemia cerebrale sono stati sviluppati per simulare la condizione umana di ictus. È stato suggerito che fino al 80% di tutte le corse da risultato nel danno ischemico cerebrale media (MCA) area 3. Nei primi anni 1990, endotelina-1 (ET-1) 4 è stato utilizzato per indurre ischemia applicandola direttamente adiacente alla superficie del MCA dopo craniotomia. Successivamente, questo modello è stato modificato 5 utilizzando una iniezione stereotassica di ET-1 adiacente alla MCA produrre ischemia cerebrale focale. I vantaggi principali di questo modello includono la capacità di eseguire la procedura rapida, la capacità di controllare costrizione dell&#39;arteria alterando la dose di ET-1 espresso, nessuna necessità di manipolare i vasi extracranici forniscono sangue al cervello e graduale reperfusisui tassi che più strettamente imita la riperfusione nell&#39;uomo 5-7. D&#39;altra parte, l&#39;ET-1 modello ha svantaggi che includono la necessità di una craniotomia, così come una maggiore variabilità della gittata sistolica 8. Tale variabilità può essere ridotta con l&#39;uso di laser Doppler flussimetria (LDF) per verificare ischemia cerebrale durante ET-1 infusione. I fattori che influenzano la variabilità ictus comprendono la precisione di infusione e il lotto del ET-1 utilizzato 6. Un&#39;altra considerazione importante è che, anche se la riperfusione è un evento comune nel tratto umano, la durata di occlusione per ET-1 indotta MCAO non strettamente imitare quello di ictus umano in cui molti pazienti hanno riperfusione parziale per un periodo di ore o giorni dopo occlusione 9, 10. Questo protocollo descrive in dettaglio l&#39;ET-1 indotta modello MCAO per l&#39;ictus ischemico nei ratti. Sarà inoltre richiamare l&#39;attenzione su considerazioni particolari e gli svantaggi potenziali durante tutta la procedura.

1. Post-Op valutazione neurologica Dopo che l&#39;animale riprenda coscienza, una grande varietà di test possono essere utilizzati per valutare i deficit neurologici, tra cui l&#39;equilibrio, forza di presa, messa zampa, asimmetria posturale e scala arrampicata. Il compito di semi di girasole è una valutazione lorda di funzione motoria e sensoriale che ha una correlazione significativa con il volume dell&#39;infarto 7, 12. Durante questa attività, i ratti sono a tempo durante l&#39;...

Modelli animali di ischemia cerebrale sono stati sviluppati per simulare la condizione umana di ictus. Questo protocollo descrive l&#39;endotelina-1 (ET-1) indotta da occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) modello per l&#39;ictus ischemico nei ratti. Inoltre, importanti considerazioni, i vantaggi ei limiti di tale modello sono discussi.

L&#39;endotelina-1 indotta cerebrale media occlusione dell&#39;arteria modello per l&#39;ictus ischemico con guida laser flussimetria Doppler in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Questo protocollo video descrive un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media indotta da endoteliale per ictus ischemico con guida infiammatoria laser doppler nel ratto. Ciò si ottiene osservando diversi punti di riferimento, come mostrato e iniettandone uno endoteliale attraverso un foro di fresa con o senza l'uso di una cannula guida. Sono stati sviluppati diversi metodi di ischemia cerebrale per modellare la condizione umana di ictus.Un modello prevede l'iniezione di un potente vasocostrittore endoteliale o 81 nel cervello adiacente all'arteria cerebrale media dopo il tumore cranico. I principali vantaggi del modello ET one stroke sono che l'intervento chirurgico può essere eseguito rapidamente ed è meno invasivo rispetto ad altri modelli come l'occlusione intraluminale dell'arteria cerebrale media indotta da filamenti. Tuttavia, il modello ET a un colpo presenta alcuni svantaggi, tra cui la necessità di craniotomia e una maggiore variabilità del volume sistolico.Questo video mostrerà in modo graduale il modello ET one stroke per l'ictus ischemico nei ratti. Discuteremo anche diverse considerazioni speciali e le insidie comuni di questa procedura. Quindi iniziamo.L'anestesia è indotta con il 4% di fluoro ISO in ossigeno in una camera di induzione e viene mantenuta durante l'intervento chirurgico al 2%Dopo che il ratto è stato anestetizzato, i capelli vengono rimossi dalla sommità della testa con un tagliacapelli elettrico. Il ratto viene quindi posto in posizione prona su una garza sdraiata su una superficie operativa a temperatura controllata con la testa inserita nell'apparato stereotassico. Le barre auricolari vengono quindi serrate e regolate.L'unguento oftalmico lubrificante viene applicato su entrambi gli occhi per prevenire l'essiccazione degli occhi. Durante il processo chirurgico, il cuoio capelluto viene quindi pulito con una soluzione di clorexidina e soluzione salina sterile. Viene praticata un'incisione sulla linea mediana sulla pelle sovrastante il calvario tra gli aspetti più coccolati degli occhi fino a quella tra le orecchie.Successivamente, la pelle viene retratta lateralmente. I tamponi di cotone asciutti vengono utilizzati per spostare lateralmente il tessuto connettivo, in modo da poter osservare i punti di riferimento ossei Come mostrato qui. La fresa viene quindi spostata a 1,6 millimetri di torema anteriore e 5,2 millimetri di lato.In questa posizione viene quindi praticato un piccolo foro per la fresa, che dovrebbe penetrare nel cranio senza danneggiare la dura madre. Successivamente, il trapano viene spostato di circa tre o quattro millimetri di distanza per praticare tre fori poco profondi distanziati. Questo servirà come posizionamento per tre viti di ancoraggio di montaggio, avvitare parzialmente tre viti di montaggio che forniranno supporto per il fissaggio del cemento nella cannula di guida.Una guida in acciaio inox calibro 21. La cannula viene quindi inserita nel foro della fresa 4,5 millimetri sotto il bgma. Un supporto per sonda fotometrica laser Doppler viene quindi posizionato appena posteriormente alla cannula guida e medialmente al cranio laterale.Il cemento dentale Ridge viene utilizzato per fissare la cannula e il supporto della sonda in posizione. È importante modellare il cemento in modo tale che sia a contatto con tutte e tre le viti evitando la pelle. L'attacco stereotassico del braccio viene quindi rimosso dopo che il cemento è completamente asciutto.Per registrare il flusso sanguigno dell'arteria cerebrale media. Una sonda infiammatoria laser doppler viene quindi posizionata nel supporto della sonda. Una siringa Hamilton calibro 26 viene caricata con una endoteliale fresca da 80 micromolari e caricata in una pompa di iniezione automatica.Utilizzando gli attacchi stereo, l'ago della siringa di Hamilton viene abbassato fino a toccare il bordo della cannula guida. L'ago viene quindi abbassato ventralmente di 17,2 millimetri attraverso la cannula guida e tre microlitri di endotelio. Uno viene iniettato a una velocità di un microlitro al minuto utilizzando la fotometria laser doppler.Si può notare che il flusso sanguigno diminuisce di oltre il 50% rispetto al basale. Dopo alcuni minuti con il tempo, ritorna gradualmente verso il valore basale. Pochi minuti dopo il completamento dell'iniezione, l'ago viene estratto delicatamente dalla cannula guida.Infine, la ferita viene chiusa con sutura e la cannula viene tappata. Per valutare il grado di ictus Deficit, possono essere eseguiti diversi esami neurologici. Questo è un esempio del compito di mangiare semi di girasole.I ratti vengono valutati sia in base al tempo che impiegano a consumare cinque semi sia al numero di pezzi di guscio rimasti. I ratti con un maggiore deficit di ictus consumeranno i semi più lentamente e lasceranno dietro di sé più pezzi di guscio. Oltre agli esami neurologici, il volume dell'infarto può essere valutato anche utilizzando la colorazione TTC come descritto in dettaglio in un protocollo video separato, che può essere trovato all'indirizzo sullo schermo.L'occlusione dell'arteria cerebrale media indotta da ET one è un modello di ictus ischemico che viene regolarmente utilizzato nelle specie murine. Questo metodo consente il controllo della costrizione delle arterie modificando la dose di ET uno erogata e graduale rispetto alla riperfusione improvvisa che imita più da vicino quella negli esseri umani umani. Sebbene la riperfusione sia un evento comune nell'ictus umano, la riperfusione per l'occlusione dell'arteria cerebrale media indotta da ET one potrebbe non imitare da vicino quella dell'ictus umano, dove la maggior parte dei pazienti ha almeno una riperfusione parziale, ma per un periodo di ore o giorni dopo l'occlusione.Un altro svantaggio del metodo ET one stroke è che molte variabili come il ceppo del ratto, l'età, il peso e l'esperienza dell'operatore possono portare a incoerenza e volumi di infarto. Tuttavia, questa variabilità può essere ridotta con l'uso del laser doppler flow tree per verificare l'ischemia cerebrale durante la prima infusione di ET. Infine, la rapida costrizione e la graduale riperfusione durante l'occlusione dell'arteria cerebrale media indotta da ET 1 potrebbero imitare da vicino il vasospasmo osservato in seguito all'emorragia subaracnoidea.Pertanto, questo modello potrebbe anche essere uno strumento utile per studiare l'ischemia che si verifica durante gli eventi di vasospasmo. Ci auguriamo che tu abbia trovato utile questo video e buona fortuna con i tuoi esperimenti.

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Lendotelina-1 indotta cerebrale media occlusione dellarteria modello per lictus ischemico con guida laser flussimetria Doppler in Rat (Video) | JoVE Journal

L'endotelina-1 indotta cerebrale media occlusione dell'arteria modello per l'ictus ischemico con guida laser flussimetria Doppler in Rat

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