Name: Un modello di mouse ortotopico di anaplastico della tiroide Carcinoma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Impara a generare un modello ortotopico di carcinoma anaplastico della tiroide in topo mediante iniezione chirurgica di cellule ATC umane. Questo metodo replica fedelmente la progressione tumorale umana per studiare meccanismi biologici e testare nuove terapie.

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Gli autori desiderano ringraziare Drs. Wenjun Li e Daniel Kreisel (Washington University School of Medicine di St. Louis) per la loro assistenza nella formazione chirurgia. RYL è supportato dal National Institutes of Health di Grant R01 DK068057 e Fondo di ricerca del Presidente della Saint Louis University.

1. Preparazione delle cellule Note: 1) completo RPMI 1640 basata ricetta supporti cultura (500 ml) comprende 435 ml di RPMI 1640, 50 ml di FBS inattivato al calore, 5 ml aminoacidi non essenziali, 5 ml di piruvato di sodio, 5 ml di antibiotico-antimicotico; 2) posto matrigel a 4 ° C un giorno prima della raccolta delle cellule. <ol><li> Linea cellulare umana THJ ATC-11T 8 sono coltivati ​​in 6 piastre di coltura e una volta raccolte e 80-90% confluenti. </li><li> Cellule pellet per centrifugazione a 200 xg per 4 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Aspirare media e risospendere le cellule in RPMI 1640 supporti [2 ml / 6 pozzetti]. </li><li> Prendete un piccolo volume di sospensione cellulare, aggiungerlo a un volume di 0,4% tripano colorante blu e determinare la densità delle cellule utilizzando TC10 Automated Cella contatore. </li><li> Calcolare il volume di sospensione cellulare necessaria per ottenere 5 x 10 5 cellule / topo volte il numero topi iniezione. </li></ol> Nota: Per garantire annuncio<html> equiparare sospensione cellulare iniettabile, preparare le cellule come se si inietta il doppio del numero di topi (ad esempio, se l&#39;iniezione di 5 topi, quindi preparare sospensione cellulare come se si stesse iniettando 10 topi). <ol start="6"><li> Trasferire volume necessario di sospensione cellulare in un tubo da 15 ml. </li><li> Cellule pellet per centrifugazione a 200 xg per 4 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Aspirare media e risospendere le cellule in RPMI 1640 supporti completi. </li><li> Trasferire le cellule in una provetta da 1,6 ml, aggiungere 1 volume di matrigel e mescolare delicatamente con pipetta lentamente dentro e fuori. </li></ol> Nota: ogni topo riceverà 10 ml di sospensione / matrigel cocktail cella. Dal 5 x 10 5 cellule sospese in un ml di volume iniettabile 10 sono stati utilizzati con successo in precedenti studi ATC ortotopici 9-10, abbiamo utilizzato i parametri in questo rapporto. <ol start="10"><li> Posizionare sospensione cellulare in ghiaccio fino al momento dell&#39;uso. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. Preparazione del mouse <ol><li> Pulire la zona chirurgica, che include l&#39;ambito dissezione e dintorni, strofinando tutte le superfici con il 70% di etanolo. </li><li> Accendere lampade di riscaldamento / pad in cui gli animali saranno sottoposti a chirurgia. </li><li> Somministrare 0,1 ml di ketamina / xylazina (cocktail di farmaci, comprendente ketamina 9 mg / ml e xylazina 1mg/ml) per 10 g di peso corporeo per via intraperitoneale con un 1 ml, 27G ½ &quot;tubercolina siringa. </li><li> Prep del mouse per la chirurgia: 1) la barba regione del collo del topo (dalla linea della mascella per cima dello sterno e fuori a braccia), 2) scrub area chirurgica tre volte con chorhexadine imbevuti quadrati di garza, 3) scrub finale fatto con betadine garza imbevuta, 4 ) applicare delicatamente pomate oftalmiche per evitare idratazione degli occhi. </li><li> Controllare pedale riflesso per garantire il mouse sia adeguatamente sedato. </li><li> Mettere animale in decubito dorsale su una barriera monouso campo sterile nell&#39;ambito di applicazione dissezione e fissare l&#39;animale in posizione con nastro di stoffa. </li><li> Scrubs mani ed fingernails poi mettere su guanti chirurgici sterili. </li><li> In modo sterile, chirurgia aperta imballare e organizzare strumenti. </li><li> Posizionare telino sterile su animali, lasciando solo sito chirurgico esposto. </li></ol> 3. Chirurgico accesso al Tiroide e Cell iniezione <ol><li> Usando una sterile, monouso bisturi, fare un 1 a 1,5 centimetri incisione longitudinale lungo la linea mediana della gola. </li></ol> Nota: La deviazione dalla linea mediana complica profondo taglio per accedere alla trachea. Abbastanza precisa incisione mediana permette di prendere in giro e tagliare il tessuto membranoso tenendo ghiandole salivari sinistro e destro insieme e riduce il rischio di intaccare o troncare grandi arterie. <ol start="2"><li> Eseguire una seconda incisione in muscoli cinghia circondano la trachea poi tirare il lato destro del muscolo incisa a lato per esporre destra ghiandola tiroidea. </li><li> Hemostats possono essere usati a questo punto per trattenere lo strato muscolare unaparte per un facile accesso alla ghiandola tiroidea (Figura 1). </li></ol> Nota: In alternativa, se procedura eseguita da due staff chirurgico, lo strato muscolare può essere semplicemente trattenuto con una pinza mentre una siringa iniettabile pronta viene consegnato al chirurgo da parte del personale di assistenza. <ol start="4"><li> Iniettare lentamente 10 ml di sospensione cellulare in destra ghiandola tiroidea utilizzando un 31G 5/16 &quot;siringa insulina quindi rimuovere delicatamente ago. </li></ol> 4. Chiusura del sito chirurgico e di recupero del mouse <ol><li> Strato muscolare sutura con 6.0 materiale di sutura utilizzando uno stile di sutura continuo o interrotto. </li><li> Stitch la pelle nello stesso modo. </li><li> Applicare uno strato di triplo pomata antibiotica direttamente sul sito di incisione. </li><li> Consentire all&#39;animale di riprendersi in decubito dorsale sul caldo piastra elettrica. Una volta che animale può raggiungere decubito sternale senza assistenza, può essere riposto con altri topi. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Monitoraggio post-operatorio e Collezione Tissue <ol><li> Controllare il sito di incisione e la salute generale dell&#39;animale al giorno per una settimana dopo l&#39;intervento, quindi controllare una volta alla settimana. Se i punti di sutura sono ancora intatti dopo 14 giorni, vengono rimossi. </li></ol> Nota: Gli animali che presentano segni di declino della salute (ad esempio, la perdita di peso notevole, capelli arruffati, respiro affannoso) devono essere eutanasia e tessuti raccolti. <ol start="2"><li> Una volta che i topi hanno raggiunto un predeterminato post-operatorio time-point, amministrare ketamina / xylazina come descritto sopra per sedare. </li><li> Perfusione intracardiaca animali e il raccolto della tiroide / trachea e altri tessuti di interesse (non descritto in dettaglio qui). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li>
<li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li>
<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
<li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+Intervention+with+anti-BRAF+%28V600E%29+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Nel nostro modello, gli animali hanno dimostrato tiroide metastasi tumorali e malattia legate distress respiratorio cachessia e dopo 4 settimane dopo l&#39;iniezione. Come con la maggior parte degli altri modelli ortotopici utilizzando consegna iniettabile di una sospensione cellulare, l&#39;iniezione nei tessuti circostanti e di dispersione post-iniezione che si diffonde al di là del bersaglio sono possibili. Con questo detto, uno sconosciuto potenziale riconoscibile prodotto da questa procedura è l&#39;effetto di fuori esposizione obiettivo di metastasi non relative malattie o complicazioni. Questo è un problema generale con la maggior parte trapianti xenographic, indipendentemente dalla malattia indagato. Tuttavia, le conseguenze non intenzionali di metastasi possono essere minimizzati in modo significativo, garantendo l&#39;intero smussatura del ago è penetrato la membrana perfettamente sovrapponendo la ghiandola tiroide e lentamente espellendo la sospensione cellulare. Se si osservano perdite durante o dopo l&#39;iniezione, gli animali possono essere omesse dallo studio. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; È essenziale che gli animali sono perfusi precedenti il ​​raccolto della tiroide / trachea e altri tessuti. I vantaggi sono duplici: 1) i globuli rossi vengono eliminati e non ingombrare campioni istologici e 2) la morfologia dei tessuti e l&#39;integrità sono conservati. Inoltre, resezione della tiroide / trachea che hanno o una massa tumorale collegato o sono sepolti all&#39;interno di esso deve essere tagliato in modo che punti di riferimento anatomici possono essere identificati prima di essere incorporato per la preparazione istologica. Ciò consentirà di ridurre drasticamente il tempo di preparazione dei campioni. In questo rapporto descriviamo crescita locale e l&#39;invasione di tumore della tiroide avanzato dopo iniezione ortotopico di cellule ATC. ATC metastasi può essere studiato analizzando preparati istologici di altri tessuti utilizzando macchie istologiche standard, come ematossilina ed eosina, o mediante immunoistochimica utilizzando marcatori cellula o patologia pertinenti. Questo sistema può essere ulteriormente sviluppato genetically modificando le cellule del cancro della tiroide con i giornalisti di fluorescenza in modo che l&#39;imaging dal vivo può essere utilizzato per monitorare le metastasi e l&#39;efficacia dei trattamenti terapeutici.

<table><tbody><tr><td>Terreni di coltura cellulare RPMI 1640</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>I terreni e gli additivi utilizzati dipendono dalla linea cellulare</td></tr><tr><td>TC10 Contatore cellulare automatizzato</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td></td> 354234 <td></td></tr><tr><td>Graefe Pincipe, seghettato; Slight Curve, 4"</td> <td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>bisturi monouso, n. 15</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>Olsen Hegar Needle Holder - 4 &frac12; " delicato seghettato</td><td>gSource</td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sutura monofilamento nero in nylon</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>Pad riscaldante, riutilizzabile, 8" x 12"</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Nastro in tessuto, 1" X 10 yds</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>Per trattenere il mouse anestetizzato</td></tr><tr><td>Peanut Clipper/Trimmer</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>Per la rimozione dei peli dal sito chirurgico</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td><td>Penn Veterinary Supply</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>unguento oftalmico Petrolatum</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 garze, 12 strati</td><td>Butler Animal Health Supply</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>Campo sterile, barriera, 18" x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Tende (CSR Wrap)</td><td>Cardinal Health</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12; " ago</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31G 5/16" ago</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>328438</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina (9 mg/ml) / xilazina (1 mg/ml) soluzione</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unguento antibiotico</td><td></td><td></td><td></td> triplo</tr></tbody></table>

un modello di mouse ortotopico di anaplastico della tiroide carcinoma

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Sono stati creati vari tipi di modelli animali di tumori tiroidei umani, anche per via sottocutanea xenotrapianto e l&#39;impianto ortotopico di cellule di cancro in topi immunodeficienti. Modelli sottocutaneo xenotrapianto è stato prezioso per lo screening e la valutazione di nuovi trattamenti terapeutici preclinico. Ci sono una serie di vantaggi di utilizzare un modello sottocutanea; 1) rapido, 2) riproducibile, e 3) stabilimento tumore, la crescita, e la risposta ad agenti terapeutici possono essere monitorate mediante ispezione visiva. Tuttavia, la prova consistente ha messo in luce le carenze del sottocutaneo modelli di xenotrapianto 1-3. Per esempio, i trattamenti medicinali che dimostrano proprietà curative in modelli di xenotrapianto sottocutaneo spesso non hanno alcun impatto notevole sulla malattia umana. Il microambiente del sito del trapianto xenographic o iniezione è al centro di questa dissomiglianza. Ortotopici modelli di xenotrapianto di tumore forniscono una più Biolosicologicamente contesto rilevante in cui studiare la malattia. I vantaggi di impiantare le cellule malate o tessuti nel loro origine anatomica equivalente all&#39;interno di un animale ospite comprende un sito adatto per le interazioni tumore-ospite, lo sviluppo di metastasi correlati alla malattia e la capacità di esaminare l&#39;influenza site-specific sui rimedi terapeutici in fase di sperimentazione. Pertanto, modelli di xenotrapianto ortotopici harbor valore molto più clinico, perché strettamente riproducono la malattia umana. Per questi motivi, alcuni gruppi hanno sfruttato un modello di cancro della tiroide ortotopico come strumento di ricerca 4-7. Qui, descriviamo un approccio che stabilisce un modello ortotopico per lo studio di carcinoma tiroideo anaplastico (ATC), che è altamente invasiva, resiste trattamento, ed è praticamente fatale in tutti i pazienti diagnosticati. ATC cellule in coltura sono preparati come sospensione cellulare dissociato in una soluzione contenente una matrice membrana basale. Un piccolo volume è lentamente injette in destra ghiandola tiroidea. Aspetto generale e la salute dei topi sono monitorati per assicurare minime complicanze post-operatorie e per valutare penetranza patologico del cancro. I topi vengono sacrificati a 4 settimane, ed il tessuto sono raccolti per l&#39;analisi istologica. Gli animali possono essere prese al più tardi punti temporali di esaminare più da progressione avanzata della malattia. La produzione di questo modello ortotopico del mouse stabilisce una piattaforma che realizza due obiettivi: 1) ulteriormente la nostra comprensione di ATC patologia, e 2) dello schermo attuali e futuri agenti terapeutici per l&#39;efficacia nella lotta contro l&#39;ATC.

Abbiamo rilevato 19 tumori della tiroide invasivi da un totale di 20 topi iniettati con le cellule ATC dopo 4 settimane. Nell&#39;esempio mostrato in Figura 2A, i topi ricevono una iniezione ortotopico di 5X10 5 celle ATC cresciute in condizioni allegate, mostrano significativa infiltrazione di cellule tumorali nella tiroide dopo 4 settimane dopo l&#39;iniezione. La natura degli invasori cellule ATC con un caratteristico cellule affusolato e cellule medio-gigante-dimensioni con citoplasma eosinofilo e grandi nuclei è stata verificata mediante ematossilina ed eosina (H &amp; E) colorazione. Per confronto, la tiroide e trachea da un animale di controllo non per iniezione è mostrata in Figura 2B. I follicoli dell&#39;animale uninjected visualizzare un vicino, eppure sciolto, di associazione e hanno essenzialmente una morfologia rotonda. A causa delle piccole dimensioni della tiroide e utilizzo di consegna iniettabili, possono sorgere esiti non intenzionali. Figura 3A illustra lapiù comunemente osservata, che è lo sviluppo di una massa tumorale al di fuori di, ma non comprende, la tiroide. Questo è più che probabile causa di penetrazione dell&#39;ago attraverso e oltre la tiroide quando le cellule vengono espulsi. Occasionalmente, i topi presentavano alcuna crescita tumorale, sia grossolanamente e istologicamente, vengono rilevati come mostrato in figura 3B. Assenza di sviluppo del tumore rilevabile può essere causato da espulsione della sospensione cellulare dal sito di iniezione e la diffusione nei tessuti circostanti e cavità. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Esponendo la tiroide. Etichette indicano destra e sinistra tiroide fiancheggianti la trachea. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Esame istologico di crescita tumorale e nellaI campioni di tessuto vasion dopo l&#39;iniezione della tiroide successo. stati sezionati lungo il piano coronale. A) Immagine scattata a 200X di topo esibendo la crescita tumorale sostanziale con le cellule caratteristici affusolato e cellule medio-gigante-dimensioni con citoplasma eosinofilo e grandi nuclei in ematossilina ed eosina ( H &amp; E) macchiano Tu indica la lesione primaria da cui le cellule tumorali invadono la tiroide B) trachea e tiroide da animali di controllo (immagine presa a 100X) Tu, tumori,... S, muscolo liscio, Tr, trachea, venga il tuo, la ghiandola tiroidea. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Esiti non intenzionali di iniezione ortotopico. Campioni di tessuto sono stati sezionati lungo il piano coronale. A) la crescita del tumore periferico senza crescita evidente nel thyroid. B) Mancanza di individuazione del tumore al momento lordo (non mostrato) o istologici esame (freccia nera, immagine scattata a 100X) (immagine presa a 50X). Thy, ghiandola tiroidea.

Generazione di un modello ortotopico murino di carcinoma anaplastico della tiroide è descritto qui. Questa tecnica impiega posizionamento chirurgico di cellule di cancro della tiroide anaplastico umani nella tiroide di topi immunodeficienti, creando così un ambiente più clinicamente rilevante per studiare la progressione della malattia, così come schermo interventi terapeutici innovativi.

Un modello di mouse ortotopico di anaplastico della tiroide Carcinoma

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare il posizionamento chirurgico di cellule anaplastiche umane, carcinoma tiroideo o TC nella tiroide al fine di stabilire un modello murino di xenotrapianto ortotopico. Ciò si ottiene coltivando e raccogliendo prima le cellule di TC. Dopo aver preparato il topo per l'intervento chirurgico, esporre la tiroide mediante due incisioni longitudinali successive nel collo e iniettare lentamente le cellule A TC nella ghiandola tiroidea destra.Il passaggio finale consiste nel chiudere le incisioni con punti di sutura e consentire al topo di riprendersi. In definitiva, l'esame istologico di campioni provenienti da tessuti resecati viene utilizzato per mostrare la crescita e l'invasione del tumore in una varietà di condizioni. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il trapianto sottocutaneo di xenotrapianto, è che il trapianto ortotopico colloca le cellule TC nella loro nicchia biologica e replica fedelmente la progressione della malattia e la patologia che si verificano nell'uomo.Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave come determinare i meccanismi biologici dell'aggressività del cancro alla tiroide. Iniziare questa procedura coltivando la linea cellulare A TC umana TJ 11 T in sei piastre di coltura a pozzetti utilizzando terreni completi integrati con RPMI 1640 un giorno prima del prelievo delle cellule, quando le cellule sono scongelate confluentemente al 70-80%, 0,01 millilitri di gel principale a quattro gradi Celsius. Raccogliere le cellule utilizzando la tripsina una volta che sono diventate confluenti all'80-90% una volta che le cellule sono state pellettate, aspirare il terreno e risospendere le cellule in due millilitri di terreno RPMI 1640 integrato per ogni piastra a sei pozzetti raccolta.Successivamente, determinare la densità cellulare mescolando la sospensione cellulare uno a uno con il colorante blu Triam allo 0,4% per determinare la densità cellulare utilizzando un contatore di cellule automatizzato TC 10. Calcolare il volume della sospensione cellulare necessaria per iniettare 500.000 cellule per topo. Assicurarsi che siano disponibili cellule adeguate per l'impianto calcolando il doppio del numero di impianti pianificati.Trasferire il volume richiesto di sospensione cellulare in un tubo conico da 15 millilitri. Centrifugare quindi a 200 Gs per quattro minuti a temperatura ambiente. Quindi aspirare il terreno e risospendere le cellule a 100 milioni di cellule per millilitro in terreni completi integrati con RPMI 1640.Quindi, trasferire le cellule in una provetta da 1,6 millilitri. Aggiungere un volume di matri gel e mescolare delicatamente pipettando lentamente dentro e fuori. Posizionare la sospensione cellulare sul ghiaccio fino a quando non è necessaria.Innanzitutto, sterilizzare la zona chirurgica, che include l'endoscopio di dissezione e l'area circostante, strofinando tutte le superfici con etanolo al 70%. Quindi preparare l'area di recupero accendendo le lampade riscaldanti e posando i tamponi sterili. Anestetizzare il topo e prepararlo per l'intervento chirurgico radendo prima la regione del collo del topo dalla mascella alla parte superiore dello sterno e fino a ciascun braccio.Quindi, avvitare l'area chirurgica tre volte alternando quadrati di gau imbevuti di clorexidina ed etanolo. Poi un'ultima volta con la garza imbevuta di Betadine. Applicare delicatamente anche un unguento per gli occhi per evitare che gli occhi si secchino.A questo punto, controllare il riflesso del pedale per assicurarsi che il mouse sia adeguatamente sedato. Quindi posizionare il topo dorsale sdraiato su una barriera da campo sterile monouso. Sotto il cannocchiale da dissezione, fissare il topo in posizione con del nastro adesivo.Successivamente, strofinare accuratamente le mani e le unghie e indossare guanti chirurgici sterili in modo sterile, aprire la confezione chirurgica e sistemare gli strumenti. Infine, posizionare un telo sterile sul topo, lasciando esposto solo il sito chirurgico. Inizia praticando un'incisione longitudinale da uno a 1,5 centimetri lungo la linea mediana della gola utilizzando un bisturi sterile monouso.Non deviare dalla linea mediana in quanto ciò aumenterebbe la possibilità di intaccarsi o recidere le grandi arterie. Fai una seconda incisione nei muscoli della cinghia che circondano la trachea. Quindi tirare di lato il lato destro del muscolo inciso, esponendo la ghiandola tiroidea destra.Chiedi a un assistente di consegnare la siringa. Iniettarlo lentamente nella ghiandola tiroidea destra utilizzando una siringa da insulina calibro 31. Quindi rimuovere delicatamente la sutura dell'ago insieme allo strato muscolare con materiale di sutura monofilamento di nylon da sei oh utilizzando uno stile di sutura interrotto.Infine, cuci insieme la pelle nello stesso modo dopo l'intervento. Applicare uno strato di unguento antibiotico triplo direttamente sul sito dell'incisione. Consentire al mouse di recuperare la dorsale sdraiata sotto una lampada.Una volta che il topo può raggiungere la posizione sdraiata sternale senza assistenza, può essere riposizionato con altri topi nella sua gabbia. Controllare quotidianamente il sito dell'incisione e la salute generale del topo per una settimana dopo l'intervento chirurgico. Quindi controllalo una volta alla settimana.Se in qualsiasi momento il topo mostra segni di declino della salute, dovrebbe essere soppresso e i suoi tessuti raccolti. Una volta che i topi hanno raggiunto un punto temporale postoperatorio predeterminato, anestetizzano con ketamina e xilazina e perfondono l'animale tardivamente con tampone, seguito da fissativo, quindi raccolgono i tessuti e li elaborano per l'istologia. La tiroide e la trachea di un animale di controllo non iniettato sono mostrate qui con i follicoli che colorano l'ematina e l'eosina mostrano un'associazione stretta ma libera e hanno una morfologia essenzialmente rotonda.Al contrario, i topi che ricevono un'iniezione ortotopica di 500.000 cellule TC A mostrano una significativa infiltrazione di cellule tumorali nella tiroide entro quattro settimane dall'iniezione. La natura delle cellule invasive mostra caratteristiche cellule a forma di fuso e cellule di dimensioni medio-giganti con citoplasma eosinofilo e nuclei di grandi dimensioni. A causa delle piccole dimensioni della tiroide e dell'uso della somministrazione iniettabile, possono verificarsi esiti non intenzionali come lo sviluppo di una massa tumorale al di fuori della tiroide, ma non che la comprende.Ciò è dovuto alla penetrazione dell'ago attraverso la tiroide quando le cellule vengono espulse Occasionalmente, i topi che non presentano alcuna crescita tumorale, sia grossolanamente che istologicamente, vengono rilevati come mostrato qui. L'assenza di sviluppo tumorale rilevabile è causata dall'espulsione della sospensione cellulare dal sito di iniezione nei tessuti e nelle cavità limitrofe. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita entro 20 minuti. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come generare il tuo modello ortotopico per il carcinoma anaplastico della tiroide.Accedendo chirurgicamente alla ghiandola tiroidea e iniettando cellule C coltivate a .

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Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello: l'iniezione di una sospensione di cellule tumorali nella parete del cieco o il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Questo modello è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

Topo Modello ortotopico di cancro colorettale

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

Il video dimostra la tecnica di inoculazione ortotopica del cancro al seno in un modello murino. Questa tecnica produce un alto tasso di tumorigenesi con una minore variabilità nelle dimensioni e nella forma del tumore rispetto all'iniezione sottocutanea o non chirurgica.

Iniezione ortotopica: impianto di cellule tumorali tessuto-specifiche in un topo adulto

Questo video descrive la procedura per l'inoculazione ortotopica di cellule tumorali tiroidee nella ghiandola tiroidea di modelli murini, che possono quindi fungere da preziosa piattaforma per valutare la cancerogenesi e scoprire potenziali strategie di trattamento.

Inoculazione ortotopica di cellule tumorali tiroidee nella tiroide murina: una procedura per stabilire un modello murino di carcinoma tiroideo ortotopico

Un modello di tumore primario del cancro al seno ortotopica e la rimozione chirurgica del tumore primario di estendere la vita del mouse per generare metastasi spontanee sono descritti. La crescita del tumore e la progressione sono monitorati e quantificati mediante imaging di fluorescenza luciferasi.

Un modello murino ortotopico di spontanea Breast Cancer metastasi

Il cancro alla prostata è la seconda causa più comune di decessi correlati al cancro negli Stati Uniti. Un modello di cancro ortotopico fornisce un approccio utile per comprendere la biologia del cancro alla prostata e per valutare l'efficacia dei regimi terapeutici. Questo protocollo descrive in dettaglio i passaggi necessari per stabilire un modello murino di cancro alla prostata ortotopico.

Pre-clinica ortotopico Modello murino di Human cancro alla prostata

Nel contesto clinico, i pazienti con cancro al pancreas localizzato saranno sottoposti a pancreatectomia seguita da un trattamento adiuvante. Questo protocollo qui riportato mira a stabilire un metodo sicuro ed efficace per modellare questo scenario clinico nei topi nudi, attraverso l'impianto ortotopico del cancro al pancreas seguito da pancreatectomia distale e splenectomia.

Un modello ortotopico di topo resezionale del cancro al pancreas

Qui, presentiamo una pipeline standard per ottenere tumori ATC murini da modelli murini di topi geneticamente modificati. Inoltre, presentiamo dinamiche tumorali e informazioni patologiche sulle lesioni primarie e metastatizzate. Questo modello aiuterà i ricercatori a comprendere la tumorigenesi e facilitare le scoperte di farmaci.

Modello murino spontaneo di carcinoma anaplastico della tiroide

Sono stati stabiliti diversi tipi di modelli animali della tiroidite di Hashimoto, così come la tiroidite autoimmune spontanea nel topo NOD. I mouse H-2h4 sono un modello semplice e affidabile per l'induzione HT. Questo articolo descrive questo approccio e valuta il processo patologico per una migliore comprensione del modello murino SAT.

Generazione di un modello di tiroidite autoimmune spontanea del topo

Il presente protocollo descrive l'ecografia ad alta frequenza per visualizzare l'intera ghiandola tiroidea del topo e monitorare la crescita del carcinoma anaplastico della tiroide.

Ecografia ad alta risoluzione per l'analisi di tumori ATC ortotopici in un modello murino geneticamente modificato

Il presente protocollo stabilisce e caratterizza un modello di xenotrapianto derivato dal paziente (PDX) di carcinoma anaplastico della tiroide (ATC) e carcinoma a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC), poiché i modelli PDX stanno rapidamente diventando lo standard nel campo dell'oncologia traslazionale.

Definizione e caratterizzazione di modelli di xenotrapianto derivati dal paziente di carcinoma anaplastico della tiroide e carcinoma a cellule squamose della testa e del collo

Impara a generare un modello ortotopico di carcinoma anaplastico della tiroide in topo mediante iniezione chirurgica di cellule ATC umane. Questo metodo replica fedelmente la progressione tumorale umana per studiare meccanismi biologici e testare nuove terapie.

Un modello di mouse ortotopico di anaplastico della tiroide Carcinoma

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