Name: Modello murino Spinotrapezius per valutare limpatto della legatura arteriolare sulla funzione microvascolare e rimodellamento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 43 s
Description: Scopri il modello di legatura arteriosa nel muscolo spinotrapezio murino per studiare la microvascolarizzazione e il rimodellamento vascolare in condizioni ischemiche. Questa tecnica consente di analizzare la vasodilatazione funzionale con microscopia intravital.

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Riconosciamo Kevin Macleod per l&#39;uso creativo della sua musica Commons licenza nel video associato, tra cui (in ordine di apparizione) il suo &quot;Airport Lounge,&quot; tracce &quot;Wallpaper&quot; e &quot;Melodramma Sera.&quot; Vorremmo inoltre ringraziare Ndubisi Okeke e Federico Torstrick per la loro assistenza con il video chirurgia.

1. Spinotrapezius feed Arteria Chirurgia legatura <ol><li> Anestetizzare topo mediante iniezione intraperitoneale. In una siringa da 0,5 ml, formulare: 0,06 ml di 100 mg / ml Ketamina 0.03 ml di 20,0 mg / ml Xylazina 0,01 ml di 0,4 mg / ml atropina 0,30 ml di soluzione salina allo 0,9%. Dose: 0.01 * ml per grammo di peso corporeo, ip </li></ol> * Dose variabile su ceppo di topi e stock, in modo da regolare di conseguenza il recupero del mouse si trova a un&#39;ora da induzione. <ol start="2"><li> Applicare una pomata oftalmica di serie per prevenire l&#39;essiccamento della cornea. </li><li> Rimuovere i capelli dalla parte posteriore utilizzando Clippers taglio, seguito da breve applicazione di crema depilatoria. </li><li> Disinfettare il campo chirurgico con clorexidina o polivinilpirrolidone-iodio. Alternate povidone-iodio con etanolo per tre volte, per finire con povidone-iodio. </li><li> Trasferire il mouse sulla superficie precedentemente preparata lavoro chirurgico, con il rilievo di riscaldamento e telino sterilein posizione. </li><li> Creare una incisione lineare (3-5 mm) attraverso la pelle dorsale circa 5 mm caudalmente alla prominenza ossea della scapola usando forbici iris e pinze modello standard (es. FST, 11.271-30) dalla tenda tessuto e taglio parallelo colonna vertebrale. Il sito di incisione di destinazione può essere identificato con la visualizzazione transdermico del cuscinetto dorsale grasso se i permessi di pigmentazione della pelle, tagliare al confine caudale del cuscinetto adiposo. Espandere l&#39;incisione, se necessario, e si estendono attraverso gli strati cutanei secondari con le forbici a molla. <ol><li> Nota anatomica - Il muscolo spinotrapezius trova dorsalmente e si estende da T4 a L3 lungo entrambi i lati della colonna vertebrale. Il bordo anteriore si estende lateralmente a circa la scapola. Il muscolo si rastrema in direzione caudale in modo che il bordo più posteriore si trova medialmente al margine anteriore, e può fissare a filo con la spina dorsale. Due cuscinetti di grasso sono anche importante notare, posa direttamente dorsale e ventrale ai spinotrapeziusmuscolo verso la metà del cranio. </li><li> Infiammazioni per l&#39;incisione ha dimostrato di avere alcun effetto sulla risposta rimodellamento vascolare, come chirurgia legatura sham ha mostrato alcun cambiamento nel rimodellamento della vascolarizzazione spinotrapezius. Due fattori spaziali contribuiscono a questo risultato. Prima l&#39;incisione viene rimosso da 5 mm in direzione craniale della regione di interesse in cui la risposta vascolare nel muscolo è tipicamente esaminato. Inoltre, il sito di incisione sulla pelle dorsale è separato dal sito legatura dei vasi da un pad ventrale grasso che si trova sulla sommità del terzo craniale del muscolo spinotrapezius. </li></ol></li><li> Irrigare l&#39;incisione con la soluzione di Ringer riscaldata per prevenire l&#39;essiccamento del muscolo. Applicazione di vasodilatatori come papaverina aiuterà a visualizzare l&#39;arteria obiettivo per legatura. </li><li> Sotto un microscopio da dissezione, utilizzare pinze per smussare sezionare e separare (ma non rimuovere) la dorsale bianco-pad grasso dal musc sottostantetessuto colare per visualizzare la vascolarizzazione, che entra ed esce dalla spinotrapezius sul suo bordo laterale. </li><li> Individuare l&#39;arteria bersaglio, che insieme con una o due coppie di vene, passa attraverso il cuscinetto di grasso che è ventrale alle spinotrapezius il suo cammino verso il bordo laterale del muscolo. Questa arteria alimenta una porzione sostanziale della metà caudale del muscolo, che può essere confermata da riflettere e sostituendo il muscolo di osservare il percorso dell&#39;arteria all&#39;interno del muscolo. La posizione di destinazione è il segmento legatura dell&#39;arteria uscita dal pad ventrale grasso e immettendo il muscolo, ed è piuttosto accessibile in questa regione. L&#39;arteria-vena coppia potrebbe essere necessario delicatamente separata dal pad ventrale grasso in questa regione. Si noti che il spinotrapezius è alimentata da molteplici arteria-vena coppie, comprese le navi che attraversano sia le pastiglie dorsali e ventrali di grasso. Fare attenzione a non interrompere questi vasi. <ol><li> Più indicatori possono essere utilizzati per distinguere arteriadalla vena. Uno dei metodi migliori è quello di ostacolare il flusso di sangue delicatamente con la microsonda e spostare a monte dal muscolo; flusso non riprenderà nell&#39;arteria finché l&#39;ostruzione viene rilasciato. Colore può anche essere usato, come pareti venose contengono una guaina biancastra di tessuto connettivo che mancano arterie. Inoltre, si può considerare il diametro prima dell&#39;applicazione di vasodilatatore come vene sono tipicamente di dimensioni maggiori. </li></ol></li><li> L&#39;arteria è tipicamente in prossimità della sua vena accoppiato; utilizzare scollamento con una microsonda e # 5 forcipe per isolare un segmento di circa 5 mm, passando la microsonda dietro l&#39;arteria, e utilizzando la punta per fare un gap più ampio nella naturale fessura tra l&#39;arteria e la vena. Questo è il varco attraverso il quale la sutura viene filettato. </li><li> Utilizzando 10-0 sutura singolo filo e dell&#39;ago segnaposto una legatura intorno all&#39;arteria alimentazione (~ 70 micron di diametro) verso l&#39;estremità prossimale del segmento sezionato utilizzando nodo di un chirurgo. Place un ulteriore legatura verso l&#39;estremità distale del segmento dell&#39;arteria sezionato, con separazione sufficiente tra legature per consentire transezione dell&#39;arteria. <ol><li> La piccola scala associato con l&#39;arteria alimentazione spinotrapezius porta a un maggiore difficoltà chirurgica, rispetto alla legatura di un vaso più grande, come l&#39;arteria femorale. Chirurghi inesperti in particolare si hanno alti tassi di avulsione, emorragia involontaria, e altre complicanze chirurgiche. Di particolare interesse è la difficoltà di individuare e tagliare l&#39;arteria incolore dopo che il flusso è stato impedito appena prima del taglio. Per queste ragioni, ponendo due legature è raccomandato per chi non sia la procedura, il chirurgo ha una guida visiva nel localizzare dove transetto l&#39;arteria e la conferma del taglio con la separazione facilmente osservabili dei due legature. Tuttavia, un chirurgo più esperto può trovare una legatura singola sufficiente, purché siano in grado di chiaramenteindividuare e tagliare le arterie valle della legatura. Mentre questa tecnica riduce il rischio di intaccare involontariamente una nave vicina alla sutura legatura tagliente, non è priva di inconvenienti, tra cui difficoltà aumentata nel confermare l&#39;arteria stato sezionato. </li></ol></li><li> Verificare legatura osservando diminuzione del flusso di sangue (RBC ostruito colonna) a valle del sito di legatura (cioè verso il muscolo). </li><li> Usando forbici transetto dissezione dell&#39;arteria ligato, tra le due legature. Se solo una legatura è stato posto (11a), tagliato con estrema cura nella direzione a valle. </li><li> Droga caricato plain-film (1 mm) può essere posta a valle (caudalmente) come parte della procedura sperimentale. </li><li> Riposizionare la fascia sfollati e tessuto adiposo per l&#39;orientamento originale. </li><li> Chiudere l&#39;incisione cutanea con 8-0 punti di sutura non riassorbibili. Quindi posizionare il mouse in una gabbia preparata recupero riscaldato sotto osservazione e amministrare un apinappropriate analgesico come bupivacaina, 0,02-0,05 ml 0,25% infiltrazione locale. </li></ol> 2. Spinotrapezius microscopia intravitale, in situ <ol><li> Anestetizzare il mouse in una camera di induzione con 3-4% vaporizzato isoflurano in ossigeno al 100% ad una velocità di flusso di 3-4 L · min -1. <ol><li> L&#39;uso di anestesia per inalazione è preferibile per misurazioni funzionali perché c&#39;è minore depressione cardiovascolare che con anestetici iniettabili. Se l&#39;anestesia inalatoria in non disponibili, anestetici iniettabili a lunga azione, come sodio pentobarbital sono preferiti per evitare iniezioni ripetute volta che l&#39;animale è stato posizionato. </li></ol></li><li> Una volta anestetizzato, continuamente fornire isoflurano attraverso una maschera di anestesia (cono di aka) a concentrazioni di manutenzione (in genere ~ 2%) e il tasso di flusso di 0,5-1 L · min -1. <ol><li> Topi prevalentemente ventilare attraverso i loro passaggi nasali, quindi è solo ncasario per coprire il naso con il diaframma maschera anestesia. </li></ol></li><li> Se necessario, rimuovere i capelli dalla parte posteriore utilizzando cesoie taglio e crema depilatoria. </li><li> Trasportare l&#39;animale al pad calore. <ol><li> È importante mantenere topi in uno stato euthermic per evitare freddo indotta vasocostrizione, che può essere realizzato attraverso lampade, acqua circolante pastiglie di calore, riscalda microwavable pastiglie, ecc </li></ol></li><li> Inserire la sonda di temperatura rettale e impostare termo-regolatore a 35 ° C. </li><li> Effettuare una incisione cutanea alla fine caudale dei spinotrapezius con le forbici iris e pinze dello stile internazionale. </li><li> Estendere l&#39;incisione cranialmente al cuscinetto adiposo, la creazione di una incisione ferro di cavallo, e coprire il lembo cutaneo con involucro di plastica per prevenire l&#39;essiccamento. </li><li> Blunt sezionare il tessuto connettivo sottocutaneo con pinze e forbici a molla per massimizzare la visibilità. </li><li> Posizionare gli elettrodi stimolanti come toge vicinother possibile, per ridurre al minimo le dimensioni del campo corrente, e posizionarli all&#39;estremità caudale del muscolo esposto appena lateralmente alla colonna vertebrale. </li><li> Eseguire una stimolazione di prova per verificare il posizionamento degli elettrodi con un sistema di elettrodi di acquisizione dati, stimolo isolatore dell&#39;elettrodo, e controller computer, con onde quadre di durata 200 msec, 2 mA ampiezza, consegnato a 1 Hz. </li><li> Posizionare l&#39;involucro di plastica sopra il muscolo esposto per prevenire l&#39;essiccamento. </li><li> Iniziare il cronometraggio un periodo di 30 minuti durante il quale i diametri dei vasi si equilibrano. </li><li> Posizionare il microscopio intravitale sopra il muscolo spinotrapezius per visualizzare l&#39;architettura vascolare. <ol><li> Se si utilizza un obiettivo a immersione, una goccia di PBS tra l&#39;obiettivo e l&#39;involucro di plastica. </li></ol></li><li> Partenza sopra l&#39;arteriola principale (la più grande vaso visibile), manipolare la fase nel piano XY per individuare il vaso di interesse. <ol><li> Visualizzare piccolo arterioles con luce riflessa microscopio richiede un maggiore contrasto rispetto a quanto previsto dal rosso-cella della colonna. Si utilizzano principalmente un lato-stream microscopio a campo scuro imaging per migliorare il contrasto microvascolare, ma invece può essere migliorata con un microscopio a luce riflessa fluorescente dopo l&#39;iniezione endovenosa di un elevato peso molecolare fluorescente destrano. </li></ol></li><li> Dopo i 30 minuti di equilibrio, acquisire un&#39;immagine / video del vaso di interesse. </li><li> Stimolare il muscolo con onde quadre di 200 psec durata, ampiezza 2 mA, consegnato a 8 Hz, per 90 secondi, come descritto sopra. </li><li> Cattura un&#39;altra immagine / video stimolazione immediatamente dopo e continuare a catturare ogni minuto fino nave è tornato al diametro di riposo, ~ 10 min. </li><li> Ripetere i passaggi 6-18 utilizzando il muscolo controlaterale. </li><li> L&#39;analisi dei dati può essere eseguita in tempo reale con pinze video o off-line con il software di analisi delle immagini. </li><li> Eutanasia seguire il mouseing IACUC protocollo. </li></ol> 3. Tissue Harvest Spinotrapezius e fissaggio <ol><li> Anestetizzare topi mediante iniezione intraperitoneale, come nella formulazione Spinotrapezius passo legatura dell&#39;arteria alimentazione 1. </li><li> Fai un millimetro di incisione più cranici alla prominenza ossea della scapola del mouse con le forbici iris e pinze dello stile internazionale. Espandere l&#39;incisione lateralmente e caudalmente su entrambi i lati. </li><li> Rilasciare la pelle dal tronco dorsale delicatamente riflettendo la pelle e tagliare la fascia superficiale. </li><li> Utilizzare smussa per rimuovere il tessuto adiposo dorsale con pinze standard, e poi riflettere e allo stesso modo il muscolo sezionare il tessuto adiposo ventrale. </li><li> Rimuovere fascia sovrastante il muscolo con pinze e forbici a molla. Questo passaggio può essere difficile e richiede tempo, ma è importante per migliorare immunofluorescenza e di imaging. Mantenendo il tessuto idratato può facilitare la rimozione della fascia. </li><li> Individuareil bordo laterale del muscolo, e utilizzare smussa per separare il muscolo spinotrapezius dal cuscinetto adiposo che si trova ventrale ad esso. </li><li> Continua la dissezione smussa in un cranio in direzione caudale. Si noti che i vasi sanguigni più entrare e uscire da questa superficie ventrale del muscolo; se perfusione è richiesto, dovrebbe essere eseguita prima sezionare questi vasi. Si noti inoltre che nella metà caudale del muscolo, gli inserti bordo laterale nel muscolo ventrale giace ad esso. Alcuni di taglio può essere richiesto lungo questo confine per definire completamente e liberare il bordo. </li><li> Accise il muscolo spinotrapezius. Per fare ciò: <ol><li> Libera il bordo laterale del muscolo come descritto sopra. </li><li> Tagliare trasversalmente misura più craniale del muscolo. </li><li> Tagliare lungo il bordo mediale (lungo la colonna vertebrale), nel piano sagittale. </li></ol></li><li> Procedura Ripetere i passaggi 4-9 a muscolo controlaterale, e quindi l&#39;eutanasia mOuse con un metodo IACUC approvato. </li><li> Fissare i tessuti di gelatina rivestite vetrini per immersione in metanolo freddo (4 ° C) o in paraformaldeide 4% / soluzione di acqua deionizzata a temperatura ambiente per 20 min. <ol><li> In alternativa, la fissazione di perfusione può essere impiegato. Prima del punto 2, eseguire una toracotomia, fare un&#39;incisione nell&#39;atrio destro, vascolarizzazione e profumato con 5 ml di Tris 1 × soluzione salina tamponata con 0,1 mM CaCl 2 e 2% eparina attraverso il ventricolo sinistro, seguito da 5 ml di 4 % paraformaldeide per fissaggio vaso, e infine 5 ml di Tris 1 × soluzione salina tamponata con 0,1 mM CaCl 2 7. </li></ol></li><li> Immediatamente fissazione seguente, lavare campione quattro volte per 20 minuti ciascuno utilizzando 0,01 M tampone fosfato salino (PBS) con 0,1% saponina. </li></ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitto di interessi finanziari.

Il modello murino legatura spinotrapezius presentato qui è un modello efficace per piccoli animali per lo studio degli adattamenti strutturali e funzionali che derivano da una occlusione arteriosa. Questo modello è complementare al modello ampiamente utilizzato ischemia hindlimb 4, in quanto fornisce un intero muscolo vista intatti reti microvascolari con elevata risoluzione spaziale. Inoltre, dato che questo muscolo si trova appena sotto la pelle dorsale, è accessibile per l&#39;imaging di serie con la microscopia intravitale, e per la consegna della droga locale tramite superfusione o impianto a film sottile 2. Queste caratteristiche lo rendono un modello attraente piccolo animale in cui studiare gli effetti di nuovi bersagli terapeutici sul rimodellamento vascolare e la vasodilatazione funzionale dopo occlusione arteriosa. Si noti che deve essere usata cautela quando si confrontano i dati acquisiti nel modello legatura spinotrapezius ai dati acquisiti nel modello di legatura arti posteriori a causa di diverse chiavi differences. In primo luogo, i muscoli si stanno stabilizzando spinotrapezius muscoli, e si differenziano dai muscoli delle gambe in termini di funzione e tipo di distribuzione delle fibre. Il nostro gruppo ha dimostrato che la legatura arteriolare nel muscolo spinotrapezius crea ipossia o meno trascurabile in ceppi con reti collaterali ben sviluppati arteriolare, rispetto alla ipossia osservata nella zampa posteriore dopo la legatura dell&#39;arteria femorale nel modello hindlimb 1,8 - 10. Abbiamo inoltre dimostrato che il modello legatura spinotrapezius produce una diversa risposta rimodellamento in topi Balb / c rispetto a topi C57BL / 6, con Balb / c rimodellamento topi reti da collateralizzazione capillare e rimodellamento C57BL / 6 dall&#39;allargamento esistenti connessioni arteriolare 3. C&#39;è un parallelo interessante tra queste osservazioni e quelle contenute nei modelli legatura arti posteriori, in cui topi Balb / c sperimentare una ripresa prolungata perfusione dopo legatura rispetto a topi C57BL / 6 9,11,12 &lt;/ Sup&gt;. In altri modelli di ischemia tissutale, l&#39;età del mouse 13 sesso 14 e la presenza di malattia 15 incidere anche le risposte dei tessuti &#39;a occlusione arteriolare, anche se non abbiamo ancora testato questi predittori nel modello di legatura spinotrapezius. In secondo luogo, la dimensione della arteria che viene ligato nel modello spinotrapezius è sostanzialmente minore l&#39;arteria femorale, e pertanto, la legatura incide un volume di tessuto più piccolo che è più a valle, ossia ad un livello inferiore dell&#39;albero circolatorio, nel spinotrapezius rispetto al hindlimb 3. Quindi, la differenza nella posizione anatomica della legatura in questi due modelli dovrebbero essere considerati quando si confrontano le rispettive risposte fisiologiche (es. rimodellamento vascolare) di questo intervento. Terzo, la sottigliezza delle spinotrapezius può permettere ossigeno di raggiungere la porzione unperfused del tessuto dalla vicinatessuto, rispetto alla ischemia e ipossia combinata nel modello hindlimb come notato sopra 3. Quarto, il recupero del flusso verso la porzione di valle spinotrapezius della legatura è più veloce rispetto alla legatura arti posteriori. Il modello di legatura spinotrapezius è un modello unico nel suo genere cronica e non deve essere confuso con altri modelli di transitoria occlusione arteriosa o modelli di danno ischemia riperfusione. Riteniamo che sia possibile adattare questo modello per accogliere questo tipo di condizioni, ma questo è al di fuori del campo di applicazione del lavoro qui presentato. Infine, in guardia contro direttamente relative osservazioni precliniche in questo modello alle manifestazioni cliniche della malattia ischemica negli esseri umani, in particolare quando si utilizza giovane e in buona salute e topi a causa dei limiti intrinseci fisiologici come la frequenza cardiaca superiore 5. Tuttavia, riteniamo che questo nuovo modello, come un valido strumento per scoprire i meccanismi di base della risposta dei tessuti per la legatura e individuando il potenzialeobiettivi rapeutic in un ambiente in vivo. Oltre alle note chirurgiche previste nel spinotrapezius procedura di legatura dell&#39;arteria alimentazione (nota anatomica (6a), distinguendo l&#39;arteria dalla vena (9a), e l&#39;uso di una singola legatura (11a)), alcuni aspetti altro beneficio dalla procedura discussione. In primo luogo, l&#39;incisione iniziale effettuata oltre il confine dorsale cuscinetto adiposo (o qualche mm caudalmente alla scapola, se la visualizzazione transdermica non è possibile) è idealmente fatto piccolo come il chirurgo sta bene con, e ampliato durante la procedura se necessario. Questa pratica riduce la sutura necessaria per chiudere l&#39;incisione, che è conveniente per il chirurgo, riduce il tempo della procedura, ed è anche meno irritante per l&#39;animale durante il recupero. In alternativa, una incisione cutanea più grande può essere appropriato in base alla preferenza chirurgo, poiché il muscolo può essere più facile da individuare con un campo espanso. In questo caso, l&#39;incisione puòbeneficiare di un ferro di cavallo con una faccia mediale aperto per consentirne il piegamento verso la colonna vertebrale. Rendendo l&#39;incisione cutanea e si estende attraverso gli strati cutanei secondari, se la nave superficie è danneggiata e provoca emorragia, applicare una leggera pressione con garza sterile e fornire tempo per emostasi. Anche di nota, è importante gestire il tessuto con la minima forza necessaria, e se possibile tenere con una pinza più vicino al bordo laterale del muscolo e lontano dalla zona prevista ischemico. Questa pratica aiuta a evitare lesioni da schiacciamento, che può portare a ulteriori risposte mediate infiammatoria del tessuto che possono confondere il rimodellamento vascolare risposta evocata dal legatura arteriosa. In conclusione, abbiamo dimostrato l&#39;uso del muscolo murino spinotrapezius come modello chirurgico per l&#39;esame risposte vascolari e tessuti di legatura arteriolare. Questo modello è adatto per la valutazione di intravitale cambiamenti vascolari (per laesempio, vasodilatazione funzionale), e per la valutazione ex vivo di cambiamenti vascolari (per esempio, l&#39;imaging immunofluorescenza e la quantificazione di reti vascolari). Entrambi gli studi preclinici e clinici hanno dimostrato che la risposta di un individuo ad ostruzione arteriolare (ad esempio tramite legatura in topi o placche aterosclerotiche nell&#39;uomo) dipende dalla loro età la presenza o assenza di malattia (diabete mellito) il diametro dell&#39;arteria ostruita , il corredo genetico dell&#39;individuo, e la domanda metabolica del tessuto 11-15. Modelli murini, come quello qui presentato, avvalersi il ricercatore del ceppo-specifiche anatomiche e le differenze genetiche e malattie specifiche fenotipi, che facilita indagini in queste complesse relazioni.

I modelli animali di ischemia cronica sono strumenti preziosi per lo studio della fisiopatologia delle malattie ischemiche, come la malattia delle arterie periferiche, malattia coronarica e malattia cerebrovascolare. Nei roditori, come negli esseri umani, occlusione arteriosa conduce rimodellamento strutturale della rete vascolare, compresi arteriogenesi e angiogenesi. Nei pazienti sani e più giovani, questo rimodellamento può essere sufficiente per salvare il tessuto da ischemia indotta da lesioni, ma co-morbidità come diabete può compromettere rimodellamento e recupero. La comprensione dei meccanismi alla base di eventi di rimodellamento vascolare è essenziale per lo sviluppo di terapie che stimolano questi processi endogeni di rivascolarizzazione. Attualmente, legatura dell&#39;arteria femorale o resezione in hindlimb è la tecnica standard per studiare cronica ischemia indotta rimodellamento vascolare in piccoli animali 4,5. Analisi del diametro, la connettività, e reattività dii microvasi che compongono valle rete vascolare dell&#39;arteria femorale ligato è difficile, tuttavia, a causa dello spessore dei muscoli. Abbiamo sviluppato un modello arteriolare legatura nel topo muscoli spinotrapezius: legatura unilaterale dell&#39;arteria alimentazione laterale in questo muscolo dorsale stabilizzazione 1. Le spinotrapezius relativamente sottili (60-200 micron) è suscettibile di faccia immunocolorazione en per la valutazione della topologia di rete intero con un solo cella di risoluzione, che permette un esame dettagliato degli eventi rimodellamento vascolare attraverso tutto il tessuto. Il spinotrapezius è anche superficiale e accessibile, e quindi le sue navi sono facilmente osservabili al microscopio intravitale, per la caratterizzazione efficace l&#39;impatto di rimodellamento e legatura arteriolare sulla reattività vascolare. In questo rapporto, descriviamo in dettaglio e dimostrare il mouse spinotrapezius modello di legatura arteriolare. Sia in vivo ed ex vivo methods chirurgia di valutazione sono descritti di seguito, compresa la misurazione della vasodilatazione funzionale, che ha dimostrato di essere compromessa in condizioni ischemiche 6, e l&#39;imaging di immunofluorescenza intero muscolari reti microvascolari. Abbiamo anche risultati di due studi pilota separati per dimostrare l&#39;utilità del modello. Prima, abbiamo utilizzato il modello arteriosa legatura per indurre un aumento statisticamente significativo tortuosità vaso in topi C57BL / 6 (Figura 2B). Tortuosità aumenta durante arteriogenesi in arteriole collaterali. In altri ceppi di topi, che sono più vulnerabili all&#39;ischemia dovuta all&#39;assenza di arteriole collaterali (ad es Balb / c), si osserva arterialization capillare 10. Arterialization capillare viene rilevata da diametri maggiori e lo sviluppo di α-actina del muscolo liscio reattività. Secondo, la stimolazione elettrica funzionale del muscolo porta a vasodilatazione in arteriole terminali del spinotrapezinoi (Figura 3B).

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Iris forbici </td><td> FST </td><td> 14090-09 </td><td> Tipo: Strumento </td></tr><tr><td> Dimensione 7 pinza </td><td> FST </td><td> 11271-30 </td><td> Tipo: Strumento </td></tr><tr><td> Misura 5 pinza </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td><td> Tipo: Strumento </td></tr><tr><td> Primavera forbici </td><td> Roboz </td><td> RS5671 </td><td> Tipo: Strumento </td></tr><tr><td> Microprobe </td><td> FST </td><td> 10140-03 </td><td> Tipo: Strumento Può essere sostituito con sonda diritta </td></tr><tr><td> Porta aghi </td><td> FST </td><td> 12500-12 </td><td> Tipo: Strumento </td></tr><tr><td> Induzione camera </td><td> JD Dist medica. Co., Inc. </td><td> IC-1086 </td><td>Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Eye Gel </td><td> Dechra </td><td> NDC 17033-211-38 </td><td> Tipo: reagente </td></tr><tr><td> Termoforo </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Sonda di temperatura rettale </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Elettrodi stimolanti </td><td> FHC </td><td> UEWSGCSE0N1M </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Artisan Polymer Clay </td><td> Polyform </td><td> N / A </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> PowerLab sistema di acquisizione dati </td><td> ADInstruments </td><td> ML 845 </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Stimolo isolatore </td><td> ADInstruments </td><td> FE 180 </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> LabChart </td><td> ADInstruments </td><td> ML S060 / 7 </td><td> Tipo: Software </td></tr&gt; <tr><td> Per luce riflessa microscopio a fluorescenza </td><td> Olimpo </td><td> BFXM </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Alta MW destrano fluorescente </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100MG </td><td> Tipo: reagente </td></tr><tr><td> Video pinze </td><td> Colorado Video </td><td> 308 </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Analisi automatizzata vascolare (AVA) </td><td> Microvision Medical </td><td></td><td> Tipo: Software </td></tr><tr><td> Anti-αSMA fluoroforo coniugato </td><td> Sigma </td><td> 1A4-Cy3 </td><td> Tipo: reagente Clonale, 1:100 </td></tr><tr><td> Microscopio a fluorescenza </td><td> Olimpo </td><td> BFXM </td><td> Tipo: Attrezzatura </td></tr><tr><td> Elevato peso molecolare fluorescente destrano </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100MG </td><td> Tipo: reagente </td></tr></tbody></table>

modello murino spinotrapezius per valutare l&#39;impatto della legatura arteriolare sulla funzione microvascolare e rimodellamento

Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Il spinotrapezius murino è un sottile muscolo superficiale sostegno scheletrico che si estende da T3 a L4, ed è facilmente raggiungibile tramite incisione cutanea dorsale. La sua anatomia unica rende le spinotrapezius utile per le indagini del danno ischemico e rimodellamento microvascolare successiva. In questo studio dimostriamo un modello arteriolare legatura nel muscolo murino spinotrapezius che è stato sviluppato dal nostro team di ricerca e tradotto 1-3. Per alcuni ceppi di topi vulnerabili, come il topo BALB / c, questa chirurgia legatura crea affidabile ischemia del muscolo scheletrico e funge da piattaforma per lo studio terapie che stimolano la rivascolarizzazione. Metodi di valutazione sono anche dimostrato, compreso l&#39;uso di microscopia confocale e intravitale. Il spinotrapezius è adatto a studi di imaging tali a causa della sua accessibilità (anatomia dorsale superficiale) e la magrezza relativa (60-200 micron). Il muscolo spinotrapezius può essere montato en face, facilitandoimmagini delle reti microvascolari intero muscolari senza sezionamento istologico. Descriviamo l&#39;uso della microscopia intravitale acquisire seguenti metriche una procedura funzionale vasodilatazione, specificamente, l&#39;aumento del diametro arterilar come risultato della contrazione muscolare. Abbiamo inoltre dimostrato le procedure di raccolta e fissa i tessuti, necessario precursore immunostaining studi e l&#39;uso di microscopia confocale.

Una vista chirurgica dell&#39;arteria principale che alimenta il muscolo spinotrapezius che subisce legatura è mostrato in Figura 1, con etichette indicanti aree di interesse. Un&#39;immagine esempio confocale della regione raccolti e immunostained del muscolo situato direttamente a valle dell&#39;arteria ligato una settimana dopo la legatura viene mostrato nella figura 2A. Arteriole collaterali ingrandite contenenti muscolatura liscia alfa-actina esprimono cellule muscolari lisce (rosso) mostrano tortuosità seguente caratteristica legatura. Tortuosità nave, riportato come il rapporto tra la lunghezza della nave percorso e la distanza del cavo (cioè, la linea che si estende oltre le estremità stesse percorso vaso), nel muscolo ligato (destra) è maggiore rispetto a unligated muscolo controlaterale (Figura 2B; n = 8) . Figura 3 mostra i risultati di uno studio pilota in cui è stata misurata terminale vasodilatazione delle arteriole funzionale utilizzando microscopia intravitale. Come previsto, arteriolare di<html> diametro compreso aumenta in modo significativo dopo stimolazione elettrica indotta contrazione muscolare. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1highres.jpg"/> Figura 1. Campo chirurgico del riflesso muscolare spinotrapezius e arteria di alimentazione. L&#39;arteria di alimentazione è legata a due punti indicati da A0. Tra queste legature e dopo l&#39;ostruzione del flusso di sangue, l&#39;arteria è sezionato al sito indicato da A. Il segmento mirato delle transizioni arteria dal pad ventrale grassa, delineato da C, nel muscolo spinotrapezius, delineato da D, sul sito indicato con la freccia di direzione del flusso è indicata da B. tratteggiata freccia E. ghres.jpg &quot;/&gt; Figura 2. Immagine confocale della rete microvascolare muscolare spinotrapezius per lo studio pilota di tortuosità. (A) Raccolta e muscolo intero è stato montato per la muscolatura liscia immunostained alfa-actina e con immagini usando la microscopia confocale. Il campo di visualizzazione mostra la regione del muscolo situato direttamente a valle della ligato arteriola 1 settimana dopo la legatura. Vasi tortuosi sono evidenti nel muscolo come risultato della legatura (B) i risultati dello studio pilota mostrano aumentato significativamente (p = 0,035; 1 Student tailed t-test). Tortuosità esposti da microvasi nel muscolo ligato misurata dalla lunghezza della nave percorso Rapporto distanza cavo per una prova di topi C57BL / 6 (n = 8) rispetto al controllo controlaterale. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3.jpg" alt="Figura 3" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3highres.jpg"/> Figure 3. Microscopia di imaging funzionale intravitale di vasodilatazione nelle arteriole spinotrapezius, in vivo. (A) microfotografie rappresentativi di arteriole terminali spinotrapezius a riposo (a sinistra) e subito dopo la cessazione di 8 Hz contrazione muscolare (a destra). (B) Terminale diametro delle arteriole a riposo ( 8,5 ± 0,5 micron, a sinistra) e subito dopo (11 ± 1 micron, al centro) 90 sec di contrazione muscolare, che ha significativamente aumentato diametro arteriolare (p = 0,032; 1-coda paired t-test) in topi BALB / c (n = 6). La variazione percentuale indicata (a destra).

Dimostriamo un nuovo modello murino legatura arteriosa nei muscoli spinotrapezius, tra cui un passo-passo la procedura e la descrizione della strumentazione necessaria. Descriviamo l&#39;intervento chirurgico e di misurare i risultati pertinenti relativi al rimodellamento della rete vascolare e la vasodilatazione funzionale usando la microscopia confocale e intravitale.

Modello murino Spinotrapezius per valutare l&#39;impatto della legatura arteriolare sulla funzione microvascolare e rimodellamento

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

La malattia vascolare periferica colpisce circa il 12-14% della popolazione ed è particolarmente comune tra i consumatori di tabacco e le persone affette da diabete, obesità, ipertensione, età avanzata o aterosclerosi. L'obiettivo di questo intervento chirurgico è creare un modello di ischemia del muscolo scheletrico legando una delle tre arterie nutrienti della metà caudale del muscolo spino-trapezio controlaterale. Questa animazione mostra la posizione generale di queste arterie e indica il sito previsto per la legatura in risposta all'ischemia.Il tessuto vascolare subirà cambiamenti caratteristici dell'agenesi arteriosa a seconda del ceppo di topo. Questi includono la formazione di collaterali di collegamento o l'aumento della tortuosità vascolare. Mostreremo inoltre come eseguire una procedura funzionale di vasodilatazione sul trapezio spinale utilizzando la microscopia intravitale.Ciò comporta l'esposizione accurata del muscolo, il posizionamento degli elettrodi stimolanti con la relativa fonte di alimentazione e il controllore, e quindi l'allestimento del dispositivo di imaging. Infine, mostreremo come escindere il muscolo e descriveremo un processo di fissazione adatto alla colorazione immunoistochimica e all'analisi di imaging. Salve, mi chiamo Shane Pierce Kotler e sono professore associato presso il Dipartimento di Ingegneria Biomedica dell'Università della Virginia a Charlottesville.Ciao, sono Kyle Martin. Sono uno studente laureato nel laboratorio di Shane e eseguirò il modello di legatura del trapezio spinale. Il nostro laboratorio studia la crescita e il rimodellamento microvascolare, in particolare nei contesti di malattie ischemiche come malattie cardiache, malattia arteriosa periferica e ictus.Abbiamo sviluppato questo modello di legatura speculare del trapezio spinale per studiare come l'ostruzione localizzata del flusso sanguigno arterioso generi adattamenti strutturali nelle reti microvascolari a valle. Consideriamo questo modello complementare al modello ben consolidato e ampiamente utilizzato di ischemia dell'arto posteriore, in quanto offre una visione completa dell'intera rete vascolare, della neurogenesi e dell'angiogenesi in un muscolo estremamente sottile, che non richiede sezionamento istologico per l'analisi. Poiché questo muscolo è molto sottile e poiché la legatura induce una riduzione riproducibile del flusso ematico, possiamo visualizzare gli effetti della legatura arteriosa su tutto il letto microvascolare con risoluzione a livello cellulare singolo.Dopo che Kyle ci avrà illustrato passo dopo passo la procedura per eseguire il modello di legatura del muscolo spino-trapezio, i nostri collaboratori della Cal Poly ci mostreranno come utilizzano questo modello per studiare la vasodilatazione funzionale. Una volta osservato ciò, vi riporteremo all'Università della Virginia per prelevare il muscolo spino-trapezio, che deve essere effettuato prima dell'analisi mediante imaging e colorazione. Salve, mi chiamo Trevor Cardinal.Sono un professore assistente presso il Dipartimento di Ingegneria Biomedica della Cal Poly State University di San Luis Obispo, in California, e il mio nome è Josh Cutz. Sono uno studente magistrale in ingegneria biomedica presso la Cal Poly di San Luis Obispo. L'interesse principale del nostro laboratorio di ricerca riguarda la comprensione dell'impatto dell'ischemia cronica, come si verifica nella malattia vascolare periferica, sulle capacità funzionali della vascolatura di resistenza.Dopo che è stata eseguita la chirurgia di legatura dell'arteria alimentante del trapezio spinale, Josh mostrerà la procedura di vasodilatazione funzionale utilizzata nel nostro laboratorio. Nel nostro laboratorio, utilizziamo la procedura di vasodilatazione funzionale per esaminare l'effetto dell'occlusione arteriosa sulla reattività vascolare e sul controllo del flusso ematico. Gli strumenti da preparare in anticipo includono un filo con nodo a dieci punti, un filo per chiusura, una pinza portaago, forbici ad iris, pinze standard, forbici a molla e una microsonda curva.Dopo aver preparato gli strumenti chirurgici, anestetizzare il topo; qui utilizziamo la formula e la dose indicate. Verificare l'anestesia mediante il test del riflesso alla pizzicatura delle dita dei piedi, quindi applicare l'IGEL protettivo utilizzando un rasoio elettrico per rimuovere una vasta area di pelo dalla schiena dell'animale. Sebbene la legatura del trapezio spinale richieda la rimozione del pelo soltanto in una piccola zona vicino alla scapola, il prelievo del tessuto del trapezio spinale, che verrà eseguito entro pochi giorni, necessiterà di una superficie molto più ampia priva di pelo.Rimuovere rapidamente l'eccesso di peli, quindi applicare la crema depilatoria seguendo le istruzioni del produttore. Lavare la schiena con una spugna bagnata. Applicare quindi tre serie alternate di salviette con alcol e Betadine, terminando con la salvietta al Betadine.In condizioni di buona illuminazione, il sito migliore per l'incisione può essere individuato identificando transdermicamente il cuscinetto adiposo dorsale. Poiché l'arteria nutrice attraversa alla fine in modo brusco il muscolo trapezio spinale, il bordo del cuscinetto adiposo solleva la pelle in questo punto; posizionare quindi le forbici da iride direttamente dall'alto, perpendicolarmente al dorso dell'animale, ed effettuare un'incisione lineare lunga da tre a cinque millimetri. Se l'illuminazione o la pigmentazione della pelle non permettono l'identificazione transdermica.Posizionare l'incisione a cinque millimetri dal rilievo osseo della scapola, estendere l'incisione attraverso gli strati cutanei e allargarla lateralmente secondo necessità per individuare il trapezio spinale. Dissezionare la fascia sovrastante per accedere al sito di legatura. Se un vaso superficiale viene danneggiato e sanguina, come in questo caso, attendere che l'emorragia si arresti spontaneamente e applicare pressione se necessario, usando soluzione fisiologica per prevenire la desiccazione.L'arteria indicata si trova lungo l'aspetto dorsale del trapezio spinale e poi attraversa il muscolo fino al cuscino adiposo ventrale. Individuare il margine laterale del trapezio spinale ed esporlo, sollevandolo in modo da quasi capovolgerlo. Ciò rivela la sua faccia ventrale e il sito trasversale dell'arteria; dissezionare il cuscino adiposo ventrale che oscura il vaso.Attenzione alla pressione delle pinze per evitare lesioni da schiacciamento. Qui il chirurgo indica l'arteria spina trapezia da legare. Si noti la presenza di coppie di vene; un vasodilatatore come l'adenosina, a breve durata d'azione, o la papaverina, a più lunga durata d'azione, può essere applicato.In questo caso, l'arteria si trova tra due altri vasi, come indicato dalle frecce. Uno di questi è simile per dimensione all'arteria e sarebbe visibile più lateralmente se il muscolo non fosse stato riflesso, mentre l'altro è molto più grande e si troverebbe più in prossimità. I due punti di legatura sono indicati da ai.La prima legatura viene posizionata in direzione distale rispetto alla seconda. Ciò garantisce che il vaso sia ancora pieno di sangue e visibile durante il posizionamento della seconda legatura. A indica la regione da sezionare.Osservare la posizione B, dove l'arteria e la vena ad essa associata entrano nel cuscinetto adiposo ventrale delimitato da C. Questo ci permette di capire che il secondo vaso più piccolo è una vena. Si noti inoltre il muscolo trapezio spinale stesso, delimitato da D. Nel protocollo di testo allegato vengono forniti alcuni suggerimenti per distinguere l'arteria dalla vena. In breve, il nostro metodo preferito consiste nell'ostacolare il flusso sanguigno applicando pressione con una microsonda.Se il vaso è un'arteria, il flusso verrà ostruito in direzione distale verso il muscolo riflesso applicato. Questa tecnica esclude il vaso di maggiori dimensioni. Se necessario, utilizzare la microsonda piegata a 80 gradi per separare l'arteria dagli altri vasi.Questo viene fatto perforando il tessuto connettivo sotto il vaso ed eseguendo brevi movimenti laterali per ampliare un'apertura. Finché la sonda non può essere facilmente fatta passare, l'ago da sutura ora può essere infilato più agevolmente al di sotto dell'arteria. In questo caso, una piccola vena è stata leggermente incisa, causando un sanguinamento minore.Questo vaso si trova a una distanza sufficiente dalla zona ischemica da avere un impatto minimo. Nella procedura, eseguire un singolo nodo chirurgico e preparare la sutura successiva. Passare nuovamente attraverso l'apertura preesistente ed eseguire un altro nodo chirurgico alcuni millimetri a monte della legatura precedente.Tenere presente che il muscolo è riflesso e la direzione del flusso potrebbe essere opposta a quella prevista. Dopo aver posizionato entrambe le legature, verificare la presenza di una colonna di globuli rossi ostruita. Se il flusso non si è arrestato, è necessaria un'ulteriore legatura.Altrimenti sezionare il vaso tra le legature, osservando se si verifica sanguinamento; in tal caso, la legatura è stata efficace e non si osserva emorragia arteriosa. Un metodo alternativo prevede una singola legatura e sezione in direzione distale. Consultare la letteratura allegata per conoscere quando questo metodo è preferibile.Riposizionare il muscolo nella sua orientazione originale, riposizionare il tessuto adiposo e la fascia spostati e chiudere con una sutura adottata non riassorbibile. Infine, posizionare il topo in una gabbia riscaldata per il recupero, sotto osservazione e analgesia per la microscopia vitale intravital del trapezio spinale. Il topo viene prima anestetizzato con isoflurano in una camera di induzione e poi collegato a un flusso continuo di isoflurano attraverso un cono nasale.Inserire la sonda per la temperatura rettale e impostare il regolatore termico a 35 gradi C. Gli strumenti da preparare in anticipo includono forbici ad iris, pinze standard, forbici a molla e un batuffolo inumidito con PBS. Praticare un'incisione cutanea all'estremità coddle del trapezio spinale utilizzando forbici ad iris e pinze forti standard. Estendere l'incisione in direzione craniale rispetto al cuscinetto adiposo, creando un'incisione a ferro di cavallo, e coprire il lembo cutaneo con una pellicola di plastica per prevenire la disidratazione. Dissezionare in modo delicato il tessuto connettivo sottocutaneo con pinzette fini per massimizzare la visibilità.Posizionare gli elettrodi di stimolazione, mantenendoli il più vicini possibile tra loro per minimizzare l'estensione del campo elettrico; collocarli all'estremità coddle del muscolo esposto, appena laterali rispetto alla spina. Fissarli utilizzando argilla. Eseguire una stimolazione di prova per verificare il posizionamento degli elettrodi, impiegando un sistema di acquisizione dati Power Lab, uno stimolatore, un isolatore e un software per grafici di laboratorio impostati su onde quadre della durata di 200 microsecondi, ampiezza di due milliampere e somministrate a un hertz.Coprire nuovamente il muscolo esposto con pellicola di plastica. Per evitare la disidratazione, attendere 30 minuti per ogni diametro vascolare per consentire l'equilibrazione, quindi acquisire l'immagine o il video. Posizionare il microscopio intravitale sul muscolo trapezio spinale per visualizzare l'architettura della vascolatura.Se si utilizza un obiettivo ad immersione, posizionare una goccia di PBS tra l'obiettivo e la pellicola di plastica, iniziando sopra l'arteria principale, che è il vaso più grande visibile. Manipolare la piastra nel piano XY per individuare il vaso di interesse. Stimolare il muscolo con onde quadre della stessa durata e ampiezza precedenti, ma erogate a otto hertz e per 90 secondi immediatamente dopo la stimolazione.Acquisire immagini del vaso e continuare a farlo ogni minuto fino a quando non sarà tornato al diametro di riposo. L'analisi dei dati può essere eseguita in tempo reale mediante calibro video oppure in forma differita tramite software di analisi delle immagini. Ripetere la procedura dalla fase iniziale di incisione fino all’acquisizione delle immagini, utilizzando il muscolo controlaterale.Al termine, eutanasia il topo seguendo il protocollo standard A CUC per il prelievo del tessuto spina trapezio. Avremo bisogno di forbici da iride, pinze standard e forbici a molla.Anestetizzare il topo come indicato in precedenza. Iniziare praticando un'incisione di alcuni millimetri in posizione craniale rispetto alla scapola del topo. Allargare l'incisione lateralmente e quindi dissezionare su entrambi i lati.L'obiettivo è esporre il muscolo trapezio spinale, che si estende da T3 a L4 dopo l'incisione. La pelle può essere separata dalla schiena mediante leggera trazione o accurato taglio del tessuto connettivo, mantenendola ferma e superfusa con soluzione salina per prevenire la disidratazione e facilitare la manipolazione del tessuto. Utilizzare la dissezione ottusa per rimuovere il tessuto adiposo dorsale ed esporre il muscolo trapezio spinale.In modo analogo, rimuovere il tessuto adiposo ventrale. Dopo aver riflettuto il muscolo, qui viene identificato il trapezio spinale destro dell'animale. Successivamente, rimuovere la maggior quantità possibile di fascia sovrastante.Questa parte della procedura può essere noiosa, ma è fondamentale per prevenire artefatti durante la microscopia. Una volta rimosso il tessuto connettivo, escindere il tessuto come mostrato, tagliando prima il margine laterale approssimativamente parallelo al dorso e procedendo in direzione cranio-caudale. Successivamente effettuare un taglio trasversale all'estremità più craniale e infine lungo il margine mediale, più vicino alla spina, per raccogliere il muscolo controlaterale.Seguire la stessa procedura. Prima rimuovere il tessuto adiposo dorsale, poi il tessuto adiposo ventrale e infine la fascia sovrastante durante il taglio. Potrebbe risultare più facile passare gli strumenti alla mano meno dominante.Il tessuto escisso può essere fissato e lavato seguendo la procedura descritta qui dopo l'eutanasia dell'animale. Secondo un protocollo CAV migliorato. Consultare la letteratura allegata per i dettagli su una procedura alternativa di fissazione mediante perfusione.Di seguito mostriamo un diagramma etichettato del muscolo trapezio spinale riflesso. Dopo l'esposizione dell'arteria di alimentazione, le lettere indicano le regioni come in precedenza. Tener presente che ogni animale presenta un'anatomia unica.Questo particolare topo è considerato piuttosto difficile per questa procedura a causa della vicinanza degli altri due vasi. Qui è mostrato un animale più tipico. Si noti la separazione relativamente ampia dell'arteria indicata dalla vena para soprastante e l'assenza di un terzo vaso.Qui osserviamo un montaggio ottenuto con microscopia confocale di un muscolo trapezio spinale destro legato, colorato per l'actina alfa del muscolo liscio. In condizioni ischemiche, si è verificato un rimodellamento nella regione indicata a valle del sito di legatura. Questi cambiamenti possono essere quantificati mediante software di analisi delle immagini, che utilizziamo qui per misurare la tortuosità come rapporto tra la lunghezza del percorso dell'arteria e la distanza dal centro.Alcuni dati campione mostrati qui indicano un risultato statisticamente significativo per un aumento della tortuosità dei vasi rispetto al controllo controlaterale. Inoltre, illustriamo misurazioni funzionali della reattività vascolare utilizzando il software medico MicroVision su un microscopio a campo scuro fuori linea. I diametri dei vasi misurati nei video vengono rilevati prima e dopo la stimolazione e poi confrontati tra loro come variazione percentuale.I dati di esempio mostrati qui indicano un risultato statisticamente significativo per l'aumento del diametro dei vasi nelle arteriole terminali dopo la stimolazione. Salve, sono Alexander Ell e sono lo studente universitario del laboratorio di Pierce Scholer che ha montato questo video. Insieme, vi abbiamo appena mostrato come creare un modello di ischemia del muscolo scheletrico nel muscolo trapezio spinale speculare.Successivamente, abbiamo dimostrato una procedura funzionale di vasodilatazione adatta alla misurazione della reattività vascolare e del controllo del flusso ematico. Infine, abbiamo mostrato come escindere il muscolo per prepararlo alla fissazione, necessaria per la colorazione immunoistochimica e l'analisi mediante imaging. A nome dei miei collaboratori di San Luis Obispo e qui a Charlottesville, desidero ringraziarvi per aver seguito il video e vi auguro buona fortuna nei vostri futuri lavori di ricerca.

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Lesione aortica di crusca a murina: un efficace<em&gt; In Vivo</em&gt; Modello di proliferazione cellulare liscia e funzione endoteliale

Questo manoscritto descrive protocolli di video microscopia in vitro per valutare la funzione vascolare nelle arterie di resistenza cerebrale del ratto. Il manoscritto descrive anche tecniche per la valutazione di densità del microvessel con aspersione di lectine e tessuto fluorescente contrassegnato utilizzando flussometria del Laser Doppler.

Valutazione dei meccanismi di controllo vascolare utilizzando Video microscopia del arterie di resistenza isolata dei ratti

Qui viene presentato un modello sperimentale critico di ischemia dell'arto posteriore seguito da una batteria di test funzionali, istologici e molecolari per valutare l'efficacia delle terapie angiogeniche.

Valutazione dell'angiogenesi terapeutica in un modello Murine di Ischemia hindlimb

Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

Modello di infarto miocardico Murine utilizzando la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra

Questo articolo dimostra un approccio chirurgico efficiente per stabilire l'ischemia acuta nei topi con una piccola incisione. Questo approccio può essere applicato dalla maggior parte dei gruppi di ricerca senza aggiornamenti di laboratorio.

Un modello chirurgico modificato di ischemia dell'arto posteriore in ApoE-/- Topi utilizzando un'incisione in miniatura

Il reclutamento di leucociti e piastrine costituisce una componente essenziale necessaria per l'efficace crescita delle arterie collaterali durante l'arteriogenesi. La microscopia multifotonica è uno strumento efficiente per tracciare la dinamica cellulare con alta risoluzione spazio-temporale in vivo e meno fototossicità per studiare il reclutamento e lo stravaso dei leucociti durante l'arteriogenesi.

Multiphoton Intravital Imaging per il monitoraggio del reclutamento dei leucociti durante l'arteriogenesi in un modello murino di arti posteriori

Qui presentiamo un modello murino per l'anastomosi dell'arteria femorale, offrendo ai ricercatori un prezioso modello animale per studiare e simulare la stenosi anastomotica vascolare. Questo sviluppo è fondamentale per far progredire la nostra comprensione della fisiopatologia alla base di questa condizione e facilitare una ricerca più accurata ed efficace sulle malattie vascolari.

Sviluppo di un modello murino per la stenosi anastomotica dell'arteria femorale

Scopri il modello di legatura arteriosa nel muscolo spinotrapezio murino per studiare la microvascolarizzazione e il rimodellamento vascolare in condizioni ischemiche. Questa tecnica consente di analizzare la vasodilatazione funzionale con microscopia intravital.

Modello murino Spinotrapezius per valutare l'impatto della legatura arteriolare sulla funzione microvascolare e rimodellamento

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