Name: In vivo imaging di Optic Nerve Fiber Integrity by MRI Contrast-Enhanced nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: Impara l'imaging in vivo del nervo ottico con MRI potenziata da manganese nei topi. Questa tecnica consente studi longitudinali sulla degenerazione neurodegenerativa e sulle alterazioni della via visiva.

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AK è sostenuta dalla Fondazione Oppenheim e RH è supportato dalla Fondazione Velux. Ringraziamo I. Krumbein per Buder tecnica e K. per il sostegno istologico, e J. Goldschmidt (Istituto Leibniz di Neurobiologia, Magdeburgo, Germania) per un parere tecnico su TIMM colorazione.

Tutti gli interventi di animali vengono eseguite in conformità con la Convenzione europea per la cura degli animali ed uso di animali da laboratorio e la Dichiarazione ARVO per l&#39;uso di animali in Oftalmica e Vision Research. Tutti gli esperimenti sono approvate dal comitato etico locale. La procedura di lesioni ON nei topi è descritto altrove 9. 1. Intravitreali Manganese Injection <ol><li> Eseguire la Mn 2 + iniezione di 24 ore prima della MR scansione con l&#39;aiuto di un assistente. Anestetizzare gli animali mediante iniezione intraperitoneale di una soluzione di cloralio idrato 5% (420-450 mg / kg di peso corporeo in PBS sterile). Per ulteriori anestesia topica, applicare una goccia di liquido conjuncain (0,4% ossibuprocaina cloridrato) alla cornea prima puntura occhio. Per iniettare 15 nmol Mn 2 + per occhio preparare una MnCl mM soluzione 7.5 2, ad esempio, diluendo 1 L di 1 M MnCl 2 stock soluzione in 132 LH 2 &lt;/ Sub&gt; O. Carico 5 microlitri della soluzione finale in una siringa da 5 microlitri Hamilton collegato ad un piccolo mozzo dell&#39;ago rimovibile 34 G (RN ago). </li><li> Quando si avvia con l&#39;occhio destro, posizionare il mouse a sinistra lati sotto un microscopio binoculare e delicatamente aperto e fissare l&#39;occhio destro tra il pollice e l&#39;indice della mano sinistra. Raccogliete la siringa con la mano destra e prendere in mano l&#39;ago vicino alla punta. Per puntura atraumatica del bulbo oculare, inserire con attenzione l&#39;ago nel corpo vitreo alla circonferenza infero-temporale di circa 1 mm distale al limbus, risparmiando quindi i vasi sclerali. </li><li> Successivamente, l&#39;assistente applica lentamente il volume totale di 2 ml controllando la scala della siringa Hamilton. Durante questa procedura, controllare il posizionamento dell&#39;ago ottimale sotto il microscopio ed evitare la puntura della lente o fuoriuscita del liquido. Tenere l&#39;ago staticamente inserito, per altri 30 sec, quindi estrarre lentamente per minimizzare liquidofuoriuscite dal sito di iniezione. </li><li> Durante tutta la procedura, particolare attenzione deve essere presa per evitare la pressione per l&#39;occhio. Allo stesso modo, evitare i tentativi aggressivi o numerosi per bucare il bulbo oculare. Dal Mn 2 + assorbimento in RGC e di trasporto lungo l&#39;ON è già saturo a 15 nmol MnCl 2, questo riduce al minimo le variazioni di segnale da volumi di iniezione leggermente imprecisi. Per il potenziamento del segnale bilaterale della proiezione visiva, ripetere la procedura di iniezione per l&#39;occhio sinistro. </li><li> Applicare ofloxacina contenenti (3 mg / ml) collirio e pomata-pantenolo contenente una volta dopo la procedura per prevenire le infezioni oculari e asciugatura dell&#39;occhio. Restituire i topi nelle loro gabbie ma in condizioni normali fino all&#39;inizio della scansione MR. </li></ol> 2. Preparazione degli animali MRI <ol><li> Anestetizzare il mouse mediante somministrazione di una miscela di gas isoflurano / ossigeno 2% / 98%. Montare il mouse su un supporto per mouse in una posizione torti quasi orizzontale. Insert in bobina MR, e viene modificata all&#39;interno dello scanner MR. Monitorare la respirazione e la frequenza cardiaca da sistemi adeguati. Per i dettagli tecnici, consultare Herrmann et al 20. </li><li> Durante MRI, deposito di anestesia mediante insufflazione continua di un 1,5% / 98,5% miscela di gas inizialmente isoflurano / ossigeno tramite un evaporatore collegato al supporto della testina di topo da un tubo integrato. Durante la scansione, regolare la profondità di anestesia in base ai parametri vitali registrati (cioè puntare ad una frequenza respiratoria stabile di circa 40 respiri al minuto). Utilizzando un dispositivo di riscaldamento a mantenere la temperatura della superficie corporea stabile tra 35 e 37 ° C, come misurato da un sensore termico posizionato al sito addominale del mouse. Per i dettagli tecnici, consultare Herrmann et al 17. </li><li> Dopo la scansione, di liberare il mouse dal supporto e la fornitura di ossigeno puro per accelerare il recupero dall&#39;anestesia. Inoltre, mantenere la temperatura corporea stabile utilizzandouna fonte di calore luce rossa. </li></ol> 3. MRI protocollo <ol><li> Il protocollo è validato per un Tesla scanner 3, dotata di una SNR-efficiente, piccola bobina animale dedicato (bobina Litz linearmente polarizzata) con un campo efficace di vista di 35 mm × 38 mm di diametro. Azionare la bobina in modalità di trasmissione-ricezione. </li><li> Con l&#39;animale nella sua posizione finale, regolare la sintonia e corrispondenza della bobina con l&#39;ausilio di un analizzatore di frequenza. Regolare manualmente la tensione di riferimento del trasmettitore e le correnti spessori per ottimizzare l&#39;omogeneità di immagine e qualità. </li><li> Acquisire T 1 pesate immagini 2D TSE con una risoluzione di 0,5 mm × 0,5 millimetri × 2 mm di vista sagittale e trasversale per la pianificazione. Utilizzando i pianificazione esami di risonanza magnetica, acquisire le immagini MEMR in direzione di misura coronale, ruotato di essere parallela alla testa dell&#39;animale con la codifica di fase lungo la direzione sinistra-destra. Per minimizzare il tempo di acquisizione, utilizzare un campo rettangolare di vista adeguato allaDimensioni della testina reali. Impiegare una sequenza FLASH 3D viziato (VIBE 3D) utilizzando i seguenti parametri: matrice di base 256, campo visivo 54 millimetri × 50,65 millimetri x 14,08 millimetri, con il 93,8% del campo rettangolare di vista in fase di direzione codificare, e 128 fette di 0,11 mm spessore della fetta con una risoluzione fetta impostata a 61%. </li><li> Attivare l&#39;interpolazione nel piano per creare immagini finali con 512 × 480 × 128, fornendo una risoluzione effettiva di 0,21 mm x 0,21 millimetri × 0,18 millimetri (0.1 mm × 0,1 millimetri × 0,09 millimetri interpolati), tempo di eco T E = 6.51 msec, tempo di ripetizione T R = 16 msec, larghezza di banda = 160 Hz / px, flip angle = 22 °. Applicare due medie e tre ripetizioni per ottenere un tempo totale di acquisizione (T A) di circa 30 min. </li></ol> 4. MRI Analisi dei dati <ol><li> Analizzare i dati utilizzando il software fastView syngo. Per il potenziamento del segnale quantitativa, selezionare le regioni definite of interesse in 2D planari registrazioni MRI e determinare intensità di segnale (SI) della struttura migliorata (SI MEMRI), sfondo di tessuto (SI Priorità), e la deviazione standard del rumore (SD N). Se necessario, utilizzare un atlante del cervello mouse per facilitare l&#39;orientamento neuro-anatomico per LGN e le strutture SC. Calcolare il rapporto di contrasto-rumore (CNR) mediante la formula: </li><li> CNR = (SI MEMRI - SI Priorità) / SD N </li><li> Quantificare tre immagini consecutive per il calcolo della media CNR per ogni campione. Negli animali bilateralmente iniettati, analizzare ogni emisfero indipendente. </li><li> Per la rappresentazione di immagini orizzontali, coronali e sagittali, calcolare ricostruzioni multiplanari dal set di dati 3D MRI originale. Queste immagini elaborate non sono raccomandati per l&#39;analisi quantitativa. Per creare ricostruzioni 3D animati (proiezioni di massima intensità, MIPS) del retino-Tectal proiezione, utilizzare un modulo software di post-elaborazione angiografia. </li></ol> 5. Mn 2 + Autometallography (TIMM colorazione) <ol><li> Per TIMM colorazione di Mn 2 strutture cerebrali + tracciate seguendo MEMRI, iniettare una dose di 15-150 nmol Mn 2 + ivit 24 ore prima di imaging. </li><li> Dopo la scansione del MR, profumato gli animali con 30 ml ghiacciata 0,325% Na 2 S in PBS (pH 7,4). Sezionare retine e congelare i campioni nella sezione congelata. </li><li> Tagliare sequenziali, sezioni equatoriali di spessore 15 micron su un cryotome. </li><li> Eseguire TIMM colorazione 21 in assenza di fissativo e crioprotezione secondo Angenstein et al 22. </li></ol> 6. Analisi statistica Effettuare analisi statistiche utilizzando il test t di Student per singoli confronti, seguita da post hoc ANOVA. I dati sono presentati come media ± errore standard. Numeri individuali N sonoindicati separatamente per ciascun esperimento. Risultati raggiungendo P ≤ 0,05 sono considerati statisticamente significativi (P ≤ 0.05, *; P ≤ 0.01, **; P ≤ 0,001, ***).

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

MEMRI del sistema visivo si estende tecniche neurobiologiche convenzionali per valutare la funzionalità in condizioni ingenue e patologiche. Oltre ad una visione unica l&#39;integrità di un isolato fibra tratto CNS, MEMRI può essere facilmente integrato con test comportamentali, per esempio, optometria e compiti a base di acqua visivamente, di indagare le conseguenze immediate di un dato paradigma per la percezione visiva. Si collega anche elettrofisiologici e le indagini istologiche con caratterizzazione visiv...

Sulla base della sua struttura neuro-anatomica favorevole il sistema visivo roditore offre possibilità uniche per valutare composti farmacologici e la loro capacità di mediare neuroprotezione 1 o effetti pro-rigenerativi 2,3. Inoltre, per studi sulle caratteristiche funzionali e neuro-anatomica di mutanti di topo, come recentemente esemplificato per topi privi della proteina ponteggio presinaptica Bassoon 4. Inoltre, un ampio spettro di strumenti supplementari permette supplementare con delle cellule gangliari retiniche (RGC) e numeri assoni RGC nonché attività RGC, ad esempio, da elettroretinografia e test comportamentali, e la determinazione di riarrangiamenti corticali mediante imaging ottico di segnali intrinseci. Gli ultimi sviluppi tecnici in microscopia laser consentono di visualizzazione situ di RGC rigenerazione profonda dei tessuti imaging di fluorescenza in interi esemplari di montaggio delle nervo ottico (ON) e il cervello. In questo histologapproccio iCal, tetraidrofurano basato radura del tessuto in combinazione con foglio leggero microscopia a fluorescenza permette la risoluzione delle singole fibre che ri-entrare nel deafferented ON e tratto ottico 5. Mentre tali tecniche possono essere superiori in risoluzione e determinazione della curva di crescita, non consentono analisi ripetitive e longitudinali di eventi di crescita individuali, particolarmente desiderati per valutare il processo di rigenerazione lungo termine. Contrasto-enhanced MRI è stata impiegata per la visualizzazione minima invasività della proiezione retino-tectal in topi e ratti 6,7. Ciò può essere ottenuto mediante consegna intraoculare diretta di ioni paramagnetici (ad esempio, Mn 2 +) di cellule retiniche. Come un analogo calcio, Mn 2 + è incorporato in RGC somata tramite i canali del calcio voltaggio-dipendenti e attivamente trasportati lungo il citoscheletro assonale della ON intatta e tratto ottico. Mentre si accumula nei nuclei cerebralidella proiezione visiva, cioè il nucleo genicolato laterale (LGN) e collicolo superiore (SC), la propagazione transsynaptic nella corteccia visiva primaria appare trascurabile 8,9, anche se può verificarsi 10,11. Sotto MR sequenziamento, paramagnetica Mn 2 + Potenziati MR contrasto principalmente accorciando T 1 spin-reticolo tempo di rilassamento 12. Tale Mn 2 + migliorato MRI (MEMRI) è stato applicato con successo in diversi studi neuro-anatomici e funzionali di ratti, compresa la valutazione della rigenerazione assonale e la degenerazione dopo sul pregiudizio 13,14, la precisa mappatura anatomica della proiezione 15 retino-tectal , nonché la determinazione delle caratteristiche trasporto assonale dopo il trattamento farmacologico 16. Recenti ricerche nel dosaggio, tossicità, e la cinetica dei protocolli MRI neuronali Mn 2 + assorbimento e il trasporto, nonché il miglioramento hanno esteso la sua applicazione agli studi sui transgenicitopi 9 con 3 scanner Tesla comunemente utilizzati nella pratica clinica 17. Qui vi presentiamo un protocollo MEMRI adatto longitudinale imaging in vivo del mouse retino-tectal proiezione ed esemplificare la sua applicabilità valutando Mn 2 + dipendente potenziamento del segnale in condizioni di neurodegenerazione ingenue e vari. Il nostro protocollo pone particolare enfasi sulla acquisizione dati MR in un moderato 3 T campo magnetico che è generalmente più accessibile rispetto agli scanner di animali dedicati. Nei topi naive, illustriamo come intensità di segnale specifico tratto può essere sostanzialmente e riproducibile diventare aumentata dopo intravitreale (ivit) Mn 2 + applicazione. Quantitativamente, Mn 2 + propagazione lungo la proiezione visiva si verifica indipendentemente dal normale processo di invecchiamento (misurata tra 3 e 26 mesi di età topi) e aumento è refrattario alla stimolazione visiva e l&#39;adattamento all&#39;oscurità. Al contrario, Mn <sup&gt; 2 + arricchimento nei centri talamo e mesencefalo è diminuita a seguito acuta ON lesione da schiacciamento 18, così come in NFKB1 topi knock-out (p50 KO) affetti da spontanea morte apoptotica RGC e sulla degenerazione 19. Così, in espansione per analisi istologica convenzionale, longitudinale analisi MEMRI singoli animali ha la profilatura della cinetica uniche di processi neurodegenerativi. Questo dovrebbe rivelarsi utile per gli studi sulla neuroprotezione e rigenerazione assonale associati a interventi farmacologici o genetici.

<table><tbody><tr><td>Soluzione di cloruro di manganese (II) 1 M</td><td>Sigma Aldrich, Taufkirchen, Germania</td><td>M1787</td><td>Reagente di contrasto MEMRI</td></tr><tr><td>Conjuncain</td><td>Dr. Mann Pharma, Berlino, Germania</td><td>PZN 7617666</td><td>0,4% ossibuprocaina cloridrato</td></tr><tr><td>Collirio Floxal</td> Dr<td>. Mann Pharma, Berlino, Germania</td><td>PZN 3820927</td><td>3 mg/ml di loxacina</td></tr><tr><td>Unguento pantenolo</td><td>Jenapharm, Jena, Germania</td><td>PZN </td><td></td>3524531</tr><tr><td>Idrato di cloralio</td><td>Sigma Aldrich, Taufkirchen, Germania</td><td>C8383</td><td>420-450 mg/kg di peso corporeo</td></tr><tr><td>siringa di Hamilton&nbsp;</td><td>Hamilton Company, Reno, NV, Stati Uniti</td><td>7634-01</td><td>SYR 5 &micro; l, 75 RN, no NDL</td></tr><tr><td>34 G ago (34/35/pst4/tapN)</td><td>Hamilton Company, Reno, NV, USA</td><td>207434/00</td><td>ago rimovibile RN, 34 G, lunghezza 38,1 mm, punta 4</td></tr><tr><td>Binocolo Stemi-2000</td><td>Zeiss, Oberkochen, Germania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 T Scanner MRI Magnetom TIM Trio</td><td>Siemens Medical Solutions, Erlangen, Germania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bobina testa di ratto</td><td>Doty Scientific Inc., Columbia, SC, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Supporto per</td><td></td><td></td> mouse <td>su misura</td></tr><tr><td>Lampada</td><td></td><td></td><td></td>a luce rossa</tr><tr><td>Sezione congelata media NEG-50</td><td>Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germania</td><td>6502</td><td>inclusione tissutale per criosezioni</td></tr><tr><td>Diidrogeno fosfato monoidrato di sodio (NaH2PO4&middot; H2O)</td><td>Merck, Darmstadt, Germania</td><td>106346</td><td>per la perfusione di solfuri</td></tr><tr><td>Solfuro di sodio nonaidrato (Na2S&middot; 9H2O)</td><td>Sigma Aldrich, Taufkirchen, Germania</td><td>208043</td><td></td></tr><tr><td>Gomma arabica</td><td>Roth, Arlesheim, Svizzera</td><td>4159</td><td>per la colorazione TIMM</td></tr><tr><td>Idrochinone (C6H6O2</td><td>)Roth, Arlesheim, Svizzera</td><td>3586</td><td></td></tr><tr><td>Acido citrico (C6H8O7)</td><td>Roth, Arlesheim, Svizzera</td><td>6490</td><td></td></tr><tr><td>Citrato trisodico diidrato (C6H5Na3O7&middot; 2H2O)Merck</td><td>, Darmstadt, Germania</td><td>106448</td><td></td></tr><tr><td>Nitrato d'argento (AgNO3)</td><td>Roth, Arlesheim, Svizzera</td><td>7908</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imaging di optic nerve fiber integrity by mri contrast-enhanced nei topi

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

Il sistema visivo roditore comprende cellule gangliari della retina e dei loro assoni che formano il nervo ottico per entrare nei centri talamo e mesencefalo, e proiezioni postsinaptici alla corteccia visiva. Sulla base della sua struttura anatomica distinta e comoda accessibilità, è diventato la struttura preferita per gli studi sulla sopravvivenza neuronale, rigenerazione assonale, e la plasticità sinaptica. Recenti progressi in RM hanno permesso la visualizzazione in vivo della parte retino-tectal di questa proiezione utilizzando manganese mediata aumento del contrasto (MEMRI). Qui vi presentiamo un protocollo MEMRI per l&#39;illustrazione della proiezione visiva nei topi, da cui risoluzioni (200 micron) 3 possono essere raggiunti utilizzando comuni 3 scanner Tesla. Dimostriamo come l&#39;iniezione intravitreale di una singola dose di 15 nmol MnCl 2 porta ad un miglioramento saturo della proiezione intatto entro 24 ore. Con eccezione della retina, cambiamenti di intensità del segnale sono indisidente della coincisa stimolazione visiva o invecchiamento fisiologico. Applichiamo ulteriormente questa tecnica per monitorare longitudinalmente degenerazione assonale in risposta al danno del nervo ottico acuto, un paradigma con il quale Mn 2 + trasporto completamente arresti presso il sito di lesione. Al contrario, attivo Mn 2 + trasporto è quantitativamente proporzionale alla vitalità, il numero e l&#39;attività elettrica delle fibre assoni. Per tale analisi, rappresentiamo Mn 2 + cinetiche di trasporto lungo il percorso visivo in un modello di topo transgenico (NF-kB p50 KO) visualizzando atrofia spontanea di sensoriali, tra cui visivi, proiezioni. In questi topi, MEMRI indica ridotta ma non ritardato Mn 2 + trasporto rispetto ai topi wild type, rivelando così segni di alterazioni strutturali e / o funzionali da mutazioni NF-KB. In sintesi, MEMRI ponti comodamente in vivo e post mortem istologia per il characterizatisu integrità e l&#39;attività delle fibre nervose. E &#39;molto utile per studi longitudinali sulla degenerazione assonale e rigenerazione, e ricerche di topi mutanti per fenotipi originali o inducibili.

La capacità di questa tecnica di imaging per valutare con precisione la vitalità e la funzionalità della proiezione visiva si basa su una precisa applicazione di un tossico Mn 2 + dosaggio al corpo vitreo e il suo assorbimento da RGC. Questo importante assunzione viene testato in Figura 1, dove strato specifico Mn 2 + assorbimento è dimostrato dal autometallography (TIMM colorazione) 21. Sezioni retina sono state analizzate a 24 ore dopo l&#39;applicazione di una ivi...

Questo video illustra un metodo, utilizzando un clinico 3 scanner T, per contrasto-enhanced RM del mouse ingenua proiezione visiva e per studi ripetitivi e longitudinali in vivo di degenerazione del nervo ottico associati a lesioni acute ottico schiacciamento del nervo e la degenerazione del nervo ottico cronica topi knock-out (p50 KO).

In vivo imaging di Optic Nerve Fiber Integrity by MRI Contrast-Enhanced nei topi

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and ...

L'obiettivo generale di questa procedura è monitorare le alterazioni strutturali e funzionali lungo il percorso visivo nei topi in vivo. Questo viene realizzato innanzitutto mediante un'iniezione intravitreale di ioni di manganese paramagnetici, che agiscono come traccianti sensibili alla risonanza magnetica a livello intracellulare e vengono somministrati sotto forma di soluzione di cloruro di manganese 24 ore prima della scansione. Il secondo passaggio consiste nel posizionare il topo anestetizzato all'interno dello scanner a risonanza magnetica da 3 T utilizzando l'apparecchiatura adeguata per l'acquisizione delle immagini e il monitoraggio delle funzioni vitali.Successivamente, viene applicato il protocollo MEMR sensibile al tracciante e adottato per il topo, e vengono ricostruite immagini 3D multipianari del potenziamento del segnale intracerebrale lungo il percorso rettino-temporale. L'ultimo passaggio consiste nel rimuovere il topo dallo scanner di risonanza magnetica e nel sostenere le sue funzioni vitali per favorire un rapido recupero dall'anestesia, consentendo studi EMRI ripetuti sullo stesso animale o esami comportamentali o istologici successivi. Alla fine, la risonan

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Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizzare il nervo danneggiato, che mostra un progressivo aumento dei gonfiori e delle disconnessioni assonali.

Analisi al microscopio elettronico del danno assonale nel nervo ottico di topi con lesione cerebrale

Fonte: Wang, Z., et al. Imaging transpupillare in vivo a due fotoni della retina del topo. J. Vis. Exp. (2021).Questo video mostra una tecnica per l'imaging retinico in vivo utilizzando la microscopia a due fotoni. I topi anestetizzati vengono preparati per l'imaging fissando le loro teste, applicando lubrificante per gli occhi e posizionando un vetrino coprioggetti sull'occhio. Le cellule gangliari retiniche (RGC) che esprimono proteine fluorescenti vengono prima visualizzate utilizzando...

Imaging in vivo a due fotoni della retina del topo

Source: Bosco, A., et al. Dinamiche in vivo dell'attivazione microgliale retinica durante la neurodegenerazione: imaging oftalmoscopico confocale e morfometria cellulare nel glaucoma di topo. J. Vis. Exp. (2015) Questo video dimostra l'imaging in vivo della microglia retinica in un modello murino di glaucoma. Un topo transgenico con microglia retinica fluorescente che esprime proteine è posizionato sotto un oftalmoscopio. L'illuminazione a infrarossi viene utilizzata per localizzare la testa...

Imaging in vivo della microglia retinica in un modello murino di glaucoma

Fonte: Jagodzinska, J., et. al., Tomografia a coerenza ottica: imaging delle cellule gangliari retiniche del topo In Vivo. J. Vis. Exp. (2017) &lt;br /&gt; In questo video, dimostriamo l'uso della tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare gli strati retinici e valutare i cambiamenti strutturali in un modello murino geneticamente modificato con neuropatia ottica.

Imaging in vivo della retina di topo mediante tomografia a coerenza ottica

Mostriamo una tecnica per bioluminescenza vivo in vivo e vicino infrarosso per immagini di neurite ottica ed encefalite nel modello di encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) per la sclerosi multipla in topi SJL / J.

Bioluminescenza e vicino infrarosso Imaging di neurite ottica e cervello infiammazione nel modello EAE della sclerosi multipla nei topi

Questo protocollo descrive come ad alta definizione tecniche di imaging come la tomografia ottica di coerenza di dominio spettrale e scansione laser oftalmoscopia può essere utilizzata in piccoli roditori, utilizzando un sistema di piattaforma di imaging oftalmico, per ottenere informazioni su lo spessore retinico e microglial cellula distribuzione, rispettivamente.

In Vivo Imaging dei topi Reporter Cx3cr1gfp/gfp con tomografia a coerenza ottica Spectral-domain e scansione Laser oftalmoscopia

Qui, presentiamo l'utilità di longitudinale in vivo imaging nel follow-up dei cambiamenti morfologici del neovascularization coroidico laser-indotta in topi.

In Vivo Imaging multimodale e l'analisi di Mouse indotta da Laser modello di Neovascularization coroidico

Qui, presentiamo un protocollo per indurre l'infiammazione di paralisi e opticospinal di trasferimento di acquaporina-4 (AQP4)-specifiche cellule T da AQP4 topi- / - in topi WT. Inoltre, dimostriamo come utilizzare tomografia a coerenza ottica seriale per monitorare la disfunzione del sistema visivo.

Induzione di paralisi e di lesioni del sistema visivo in topi da specifiche cellule T per neuromielite ottica Autoantigen acquaporina-4

L'imaging in vivo è un potente strumento per lo studio della biologia in salute e malattia. Questo protocollo descrive l'imaging transpupillare della retina del topo con un microscopio standard a due fotoni. Dimostra anche diversi metodi di imaging in vivoimaging per marcare in modo fluorescente più coorti cellulari della retina.

Transpupillare Due fotoni In vivo Imaging della retina del topo

Il presente protocollo delinea i passaggi per l'allineamento in vivo delle immagini in fibra di tomografia a coerenza ottica a luce visibile (vis-OCTF) con le immagini confocali ex vivo della stessa retina murina allo scopo di verificare la morfologia osservata del fascio assonale delle cellule gangliari retiniche nelle immagini in vivo .

Allineamento di fibrogrammi per tomografia a coerenza ottica a luce visibile con immagini confocali della stessa retina murina

Impara l'imaging in vivo del nervo ottico con MRI potenziata da manganese nei topi. Questa tecnica consente studi longitudinali sulla degenerazione neurodegenerativa e sulle alterazioni della via visiva.

In vivo imaging di Optic Nerve Fiber Integrity by MRI Contrast-Enhanced nei topi

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