Name: Unanalisi comparativa di espressione della proteina ricombinante in diversi biofabbriche: batteri, cellule di insetto e impianti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Scopri l'espressione di proteine ricombinanti umane confrontando batteri, cellule di insetto e piante. Questo metodo evidenzia vantaggi e limiti di ciascuna piattaforma per ottimizzare la produzione.

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Questo lavoro è stato supportato dall'azione COST 'Molecular pharming: Plants as a production platform for high-value proteins' FA0804. Gli autori ringraziano il Dott. Anatoli Giritch e il Prof. Yuri Gleba per aver fornito i vettori MagnICON a scopo di ricerca.

<ol><li>Hampe, C. S., Hammerle, L. P., Falorni, A., Robertson, J., Lernmark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-directed+mutagenesis+of+K396R+of+the+65+kDa+glutamic+acid+decarboxylase+active+site+obliterates+enzyme+activity+but+not+antibody+binding%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Site-directed mutagenesis of K396R of the 65 kDa glutamic acid decarboxylase active site obliterates enzyme activity but not antibody binding.</a> FEBS Lett. 488 (3), 185-189 (2001).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+human+GAD65+accumulates+to+high+levels+in+transgenic+tobacco+plants+when+expressed+as+an+enzymatically+inactive+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Recombinant human GAD65 accumulates to high levels in transgenic tobacco plants when expressed as an enzymatically inactive mutant.</a> Plant Biotechnol. J. 9 (8), 862-872 (2010).</li>
<li>Sambrook, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+laboratory+manual.+Second+Edition%22">Molecular Cloning: A laboratory manual. Second Edition</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (1989).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+biofactories+for+the+production+of+a+major+diabetes+autoantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different biofactories for the production of a major diabetes autoantigen.</a> Transgenic Res. 23, 281-291 (2014).</li>
<li>Marillonnet, S., Giritch, A., Gils, M., Kandzia, R., Klimyuk, V., Gleba, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+planta+engineering+of+viral+RNA+replicons%3A+efficient+assembly+by+recombination+of+DNA+modules+delivered+by+Agrobacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+%28USA%29%22%5BJournal%5D)">In planta engineering of viral RNA replicons: efficient assembly by recombination of DNA modules delivered by Agrobacterium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 101 (18), 6852-6857 (2004).</li>
<li>Gleba, Y., Klimyuk, V., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+for+the+expression+of+proteins+in+plants%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Viral vectors for the expression of proteins in plants).</a> Curr. Opin. Biotechnol. 18, 134-141 (2007).</li>
<li>Engler, C., Kandzia, R., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one+pot%2C+one+step%2C+precision+cloning+method+with+high+throughput+capability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A one pot, one step, precision cloning method with high throughput capability.</a> PLoS One. 3 (11), (2008).</li>
<li>Xu, R., Li, Q. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol%3A+streamline+cloning+of+genes+into+binary+vectors+in+Agrobacterium+via+the+Gateway+TOPO+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Protocol: streamline cloning of genes into binary vectors in Agrobacterium via the Gateway TOPO vector system.</a> Plant Methods. 4 (4), 1-7 (2008).</li>
<li>Fairbanks, G., Steck, T. L., Wallach, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+analysis+of+the+major+polypeptides+of+the+human+erythrocyte+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane.</a> Biochemistry. 10 (13), 2606-2617 (1971).</li>
<li>Falorni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioimmunoassay+detects+the+frequent+occurrence+of+autoantibodies+to+the+Mr+65%2C000+isoform+of+glutamic+acid+decarboxylase+in+Japanese+insulin-dependent+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Radioimmunoassay detects the frequent occurrence of autoantibodies to the Mr 65,000 isoform of glutamic acid decarboxylase in Japanese insulin-dependent diabetes.</a> Autoimmunity. 19, 113-125 (1994).</li>
<li>Hunt, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+gene+to+protein%3A+a+review+of+new+and+enabling+technologies+for+multi-parallel+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr.+Purif%22%5BJournal%5D)">From gene to protein: a review of new and enabling technologies for multi-parallel protein expression.</a> Protein Expr. Purif. 40 (1), 1-22 (2005).</li>
<li>Arzola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+co-expression+of+post-transcriptional+silencing+suppressor+for+increased+in+planta+expression+of+a+recombinant+anthrax+receptor+fusion+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Mol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Transient co-expression of post-transcriptional silencing suppressor for increased in planta expression of a recombinant anthrax receptor fusion protein.</a> Int. J. Mol. Sci. 12 (8), 4975-4990 (2011).</li>
<li>Merlin, M., Gecchele, E., Capaldi, S., Pezzotti, M., Avesani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+recombinant+protein+production+in+different+biofactories%3A+the+green+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of recombinant protein production in different biofactories: the green perspective.</a> Biomed. Res. Int. 2014, 136419(2014).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+in+planta+expression+of+the+human+islet+autoantigen+glutamic+acid+decarboxylase+%28GAD65%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Improved in planta expression of the human islet autoantigen glutamic acid decarboxylase (GAD65).</a> Transgenic Res. 12 (2), 203-212 (2003).</li>
<li>Leuzinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+agroinfiltration+of+Plants+for+high-level+transient+expression+of+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient agroinfiltration of Plants for high-level transient expression of recombinant proteins.</a> J Vis Exp. (77), (2013).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano che non vi è alcun conflitto di interessi in merito alla pubblicazione di questo articolo.

In questo studio sono stati confrontati tre piattaforme diverse per l&#39;espressione di una proteina ricombinante umana: cellule batteriche, cellule Baculovirus / insetti e piante. La piattaforma a base vegetale è stato esaminato ulteriormente sfruttando le tre tecnologie di espressione ampiamente utilizzati (cioè transitoria - MagnICON e pK7WG2 basati - e stabili). La proteina bersaglio scelto per questo esperimento, hGAD65mut, è stata precedentemente espresso in diversi sistemi 13, e la sua produz...

Le proteine ricombinanti sono prodotte commercialmente in massa in sistemi di espressione eterologi con l'aiuto di strumenti biotecnologici emergenti. I fattori chiave che devono essere considerati nella scelta del sistema di espressione eterologa includono: qualità delle proteine, funzionalità, velocità di processo, resa e costo.
Nel campo delle proteine ricombinanti, il mercato dei prodotti farmaceutici si sta espandendo rapidamente e, di conseguenza, la maggior parte dei biofarmaci prodotti oggi sono ricombinanti. Le proteine possono essere espresse in colture cellulari di batteri, lieviti, muffe, mammiferi, piante e insetti, nonché in sistemi vegetali (tramite trasformazione stabile o transitoria) e animali transgenici; Ogni sistema di espressione ha i suoi vantaggi e limiti intrinseci e per ogni proteina ricombinante bersaglio il sistema di produzione ottimale deve essere attentamente valutato.
Le piattaforme a base vegetale stanno nascendo come un'importante alternativa ai tradizionali sistemi basati su fermentatori per una produzione sicura ed economica di proteine ricombinanti. Sebbene i costi di lavorazione a valle siano paragonabili a quelli delle cellule microbiche e dei mammiferi, il minore investimento iniziale richiesto per la produzione commerciale nelle piante e la potenziale economia di scala, fornita dalla coltivazione su vaste aree, sono vantaggi chiave.
Abbiamo valutato le piante come bioreattori per l'espressione dell'isoforma 65 kDa della decarbossilasi dell'acido glutammico umano (hGAD65), uno dei principali autoantigeni nel diabete autoimmune di tipo 1 (T1D). hGAD65 è ampiamente adottato come marcatore, sia per la classificazione che per il monitoraggio della progressione della malattia e il suo ruolo nella prevenzione del T1D è attualmente in fase di studio in studi clinici. Se questi studi avranno successo, la domanda globale di hGAD65 ricombinante aumenterà notevolmente.
Qui, ci concentriamo sull'espressione della controparte enzimaticamente inattiva di hGAD65, hGAD65mut, un mutante generato sostituendo il residuo di lisina che lega il cofattore PLP (piridossal-5'-fosfato) con un residuo di arginina (K396R)1. 
hGAD65mut mantiene la sua immunogenicità e, nelle cellule di piante e insetti, si accumula fino a dieci volte di più di hGAD65, la sua controparte wild-type. È stato ipotizzato che l'attività enzimatica di hGAD65 interferisca con il metabolismo delle cellule vegetali a tal punto da sopprimere la propria sintesi, mentre hGAD65mut, la forma enzimaticamente inattiva, può essere accumulata nelle cellule vegetali a livelli più elevati.
Per l'espressione di hGAD65mut, l'uso di diverse tecnologie, ampiamente utilizzate nelle biotecnologie vegetali, è stato esplorato qui e confrontato con le piattaforme di espressione tradizionali (Escherichia coli e Baculovirus/cellule di insetto).
In questo lavoro, le piattaforme ricombinanti sviluppate per l'espressione di hGAD65mut comprendenti sistemi tradizionali e a base vegetale sono state esaminate e confrontate sulla base della velocità e della resa del processo, nonché della qualità e della funzionalità del prodotto finale.

<table><tbody><tr><td>Estratto di lievito</td><td>Sigma</td><td>Y1333</td><td></td></tr><tr><td>Triptone</td><td>Formedium</td><td>TRP03</td><td></td></tr><tr><td>Agar Grado batteriologico</td><td>Applichem</td><td>A0949</td><td></td></tr><tr><td>Sf-900 II SFM medio</td><td>Gibco</td><td>10902-088</td><td></td></tr><tr><td>Grace' s Insect Medium, non integrato</td><td>Gibco</td><td>11595-030</td><td></td></tr><tr><td>Cellfectin II Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>10362-100</td><td></td></tr><tr><td>MS medium comprese le vitamine</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>M0222</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>Plant agar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>P1001</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillina sodica</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>A0104</td><td>Tossico</td></tr><tr><td>Gentamycina solfato</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>G0124</td><td></td></tr><tr><td>Tossico Ganciclovir</td><td>Invitrogen</td><td>I2562-023</td><td></td></tr><tr><td>Carbenicillina disodica</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C0109</td><td>Tossico</td></tr><tr><td>Kanamicina solfato</td><td>Sigma</td><td>K4000</td><td></td></tr><tr><td>Tossico Rifampicina</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>R0146</td><td>Tossico & ndash; 25 mg/ml stock in DMSO</td></tr><tr><td>Streptomicina solfato</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0148</td><td></td></tr><tr><td>Spectinomicina dicloridrato</td> tossico <td>Duchefa Biochemie</td><td>S0188</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropil-&beta;-D-1-tiogalattopiranoside)</td><td>Sigma</td><td>I5502</td><td>MES tossico</td></tr><tr><td>idrato</td><td>Sigma</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Biochemical</td><td>436994U</td><td></td></tr><tr><td>Acetosyringone</td><td>Sigma</td><td>D134406</td><td>Tossico &ndash; 0,1 M stock in siringa DMSO</td></tr><tr><td>(1 ml)</td><td>Terumo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Fluka</td><td>63136</td><td></td></tr><tr><td>BAP (6-benzilamminopurina)</td><td>Sigma</td><td>B3408</td><td>NAA tossico</td></tr><tr><td>(acido naftalene acetico)</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>N0903</td><td></td></tr><tr><td>Cefotaxime</td> irritante <td>Mylan Generics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td>Regolare il pH con 1 N HCl per fare il tampone Tris-HCl</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td>Corrosivo</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>1 M stock</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>PMSF (Fenilmetanosulfonilfluoruro)</td><td>Sigma</td><td>P7626</td><td>Corrosivo, tossico</td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanolo</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>tossico Sigma</td><td>P5927</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>DTT (Dithiothreitol)</td><td>Sigma</td><td>D0632</td><td>Tossico - 1 M di magazzino, conservare a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>CHAPS</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C1374</td><td>Cocktail tossico</td></tr> di <tr><td>inibitori della proteasi vegetale</td><td>Sigma</td><td>P9599</td><td>Non congelare/scongelare troppe volte</td></tr><tr><td>SDS (sodio dodecil solfato)</td><td>Sigma</td><td>L3771</td><td>Infiammabile, tossico, corrosivo &ndash; 10% stock</td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Blu brillante R-250</td><td>Sigma</td><td>B7920</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Sigma</td><td>24137</td> Acido acetico <td>infiammabile</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>27221</td><td>Acido corrosivo</td></tr><tr><td>anti-glutammico decarbossilasi 65/67</td><td>Sigma</td><td>G5163</td><td>Non congelare/scongelare troppe volte</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-coniglio coniugato perossidasi di rafano (HRP)</td><td>Sigma</td><td>A6154</td><td>Non congelare/scongelare troppe volte</td></tr><tr><td>Sf9 Cells</td><td>Life Tecnologie</td><td>11496</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Competente E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C2530H</td><td></td></tr><tr><td>Proteina A Sepharose</td><td>Sigma</td><td>P2545</td><td></td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari</td><td>Kit di</td> analisi immunoimmunologica Sigma <td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>Techno</td><td>Genetics</td><td>12650805</td><td>Materiale radioattivo</td></tr></tbody></table>

un&#39;analisi comparativa di espressione della proteina ricombinante in diversi biofabbriche: batteri, cellule di insetto e impianti

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

Sistemi a base vegetale sono considerati una valida piattaforma per la produzione di proteine ​​ricombinanti come risultato della loro potenziale ben documentata per la produzione flessibile, a basso costo di alta qualità, prodotti bioattivi. In questo studio, abbiamo confrontato l&#39;espressione di una proteina ricombinante umana bersaglio nelle culture tradizionali basati fermentatori cellule (batteriche e insetti) con sistemi di espressione a base vegetale, sia transitori e stabili. Per ogni piattaforma, abbiamo descritto il set-up, ottimizzazione e durata del processo di produzione, la qualità del prodotto finale e le rese e abbiamo valutato i costi di produzione provvisori, specifici per la proteina ricombinante bersaglio selezionato. Nel complesso, i nostri risultati indicano che i batteri non sono adatti per la produzione della proteina bersaglio a causa della sua accumulo all&#39;interno corpi di inclusione insolubili. D&#39;altro canto, i sistemi a base vegetale sono piattaforme versatili tcappello permettono la produzione della proteina selezionato a bassi costi di-Baculovirus / sistema cellulare di insetto. In particolare, le linee transgeniche stabili visualizzati il ​​massimo rendimento del prodotto finale e le piante che esprimono transitori sviluppo del processo più veloce. Tuttavia, non tutte le proteine ​​ricombinanti possono beneficiare di sistemi a base vegetale, ma la migliore piattaforma di produzione dovrebbero essere determinati empiricamente con un approccio caso per caso, come descritto qui.

Un disegno sperimentale per l&#39;espressione eterologa di una proteina ricombinante bersaglio in diversi sistemi di produzione è descritto qui. Il primo obiettivo è stato il set-up di diverse piattaforme stabilendo le condizioni ottimali per l&#39;espressione della proteina bersaglio in ciascun sistema. L&#39;espressione della proteina bersaglio, hGAD65mut, è stata indotta in triplicato E. culture coli. Dopo 3 ore di espressione a 37 ° C, le cellule batteriche sono state r...

In questo studio è stata confrontata l'espressione di una proteina ricombinante umana bersaglio in diverse piattaforme di produzione. Ci siamo concentrati sulle colture tradizionali basate su fermentatori e sugli impianti, descrivendo il set-up di ciascun sistema ed evidenziando, sulla base dei risultati riportati, i limiti e i vantaggi intrinseci per ogni piattaforma.

Un&#39;analisi comparativa di espressione della proteina ricombinante in diversi biofabbriche: batteri, cellule di insetto e impianti

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...

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