Due fotoni Imaging di Cellular Dynamics nel midollo spinale del mouse

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di visualizzare in tempo reale le interazioni delle cellule precursori neurali o delle cellule precursori neurali marcate in fluorescenza con gli assoni fluorescenti nel midollo spinale del topo. Ciò si ottiene rimuovendo e incorporando con cura il midollo spinale di topi trapiantati con NPCs in 5%aros e attaccandolo a un vetrino coprioggetto. L'orientamento del midollo spinale può essere modificato per visualizzare la fluorescenza in qualsiasi regione del midollo spinale.

Nella seconda fase, la preparazione del midollo spinale viene posizionata sullo stadio di imaging a due fotoni per l'imaging di NPC vitali mentre viene super fusa con terreni RPMI ossigenati caldi per un massimo di 10 ore. Un appropriato divisore di fascio diic a bordo singolo viene utilizzato per separare le emissioni YFP e GFP. In definitiva, l'imaging a due fotoni consente la visualizzazione in tempo reale delle interazioni tra gli NPC che esprimono GFP e gli assoni che esprimono YFP nel midollo spinale danneggiato.