Contrasto dinamico migliorato risonanza magnetica di un modello ortotopico cancro del pancreas mouse

L'obiettivo generale di questa procedura è applicare la risonanza magnetica con mezzo di contrasto dinamico o D-C-E-M-R-I a xenotrapianti di tumore pancreatico ORTOTOPICO nei topi. Ciò si ottiene rimuovendo prima il pancreas dall'addome e poi infondendo lentamente le cellule tumorali del pancreas umano nella coda del pancreas. Il pancreas è quindi tornato nell'addome e quando il tumore ha un diametro compreso tra cinque e sette millimetri, una tavola di plastica e una bobina di superficie vengono posizionate sopra l'humas della massa tissutale.

In definitiva, il microvascolare dello xenotrapianto tumorale può essere visualizzato mediante D-C-E-M-R-I. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi convenzionali come il D-C-M-R-I, di xenotrapianto tumorale sottocutaneo, è che i modelli ortotopici di tumore pancreatico consentono la valutazione del microambiente tumorale primario, compresa la neovascolarizzazione, l'afflusso di sangue e l'invasione delle cellule tumorali. La procedura sarà dimostrata da Sharon Samuel, ricercatrice associata e Marie Warren, un tecnico di ricerca, entrambe del nostro laboratorio.

Inizia posizionando un topo marino femmina anestetizzato di otto settimane su un termoforo dopo aver confermato il livello appropriato di sedazione pizzicando le dita dei piedi. Successivamente, rimuovere i peli dal quadrante superiore sinistro dell'addome dell'animale e somministrare un farmaco analgesico nella pelle usando le forbici dritte dell'iride. Praticare un'incisione di un centimetro nella pelle e nel peritoneo e sollevare delicatamente il pancreas attraverso l'incisione.

Quindi utilizzare una siringa da insulina da 0,5 millilitri, dotata di un ago calibro 28 per infondere lentamente 2,5 milioni di cellule tumorali del pancreas umano in 30 microlitri di DMEM nella coda del pancreas. Confermare che la soluzione crei una piccola bolla nella testa del pancreas. Quindi riposizionare delicatamente il pancreas nell'addome e chiudere il peritoneo della pelle in uno strato con due suture interrotte a cinque zero prolina.

Controllare quotidianamente le dimensioni del tumore con la palpazione con due dita dell'area chirurgica. I tumori in genere si sentono più densi e irregolari dei tessuti e degli organi circostanti. Monitora quotidianamente gli animali anche per segni di malattia.

Quando il tumore raggiunge i cinque o sette millimetri di diametro, inserire un ago affilato calibro 30 in un'estremità di un tubo di micro polietilene e una punta smussata dell'ago calibro 30 nell'altra. Collegare una siringa da un millilitro contenente il mezzo di contrasto per la risonanza magnetica appena preparato alla punta dell'ago smussato e premere lentamente lo stantuffo per riempire l'intero tubo. Quindi dilatare le vene della coda dell'animale sotto una lampada termica e utilizzare le pinze Kelly per afferrare l'asta dell'ago affilato calibro 30.

Inserisci con cautela l'ago in una delle vene dilatate della coda e fissa sia la coda che il tubo su un pezzo di plastica di 10 x 100 millimetri per mantenere la coda dritta. Successivamente, posiziona il topo supino in un letto per animali dotato di acqua calda circolante per regolare la temperatura corporea dell'animale durante l'imaging. Inserire anche una sonda di temperatura rettale in questo momento.

Quando l'animale è in posizione, applicare una tavola di plastica piegata ortogonalmente nella zona addominale, assicurandosi che il tumore si trovi dietro l'estremità superiore della tavola, quindi tirare la tavola verso il basso di circa due millimetri per assicurarsi che il tumore sia catturato saldamente Fissare la tavola al letto dell'animale. Quindi fissare un trasduttore con cuscinetto respiratorio sull'area del torace per monitorare la respirazione dell'animale durante l'imaging. Ora posiziona la bobina di superficie sulla parte superiore della regione tumorale, fissandola saldamente al letto dell'animale.

Quindi spingere il letto dell'animale nello scanner RM fino a quando la regione tumorale non si trova al centro della bobina del volume. Applicare la risonanza magnetica pesata T two per localizzare il tumore, seguita dalla risonanza magnetica pesata T one con vari angoli di ribaltamento per la mappatura T one. Quindi, per l'imaging D-C-E-M-R-I, applicare T one ponderata MRI con un angolo di ribaltamento fisso in modo continuo prima, durante e dopo l'iniezione del contrasto MRI a base di gadolinio.

Monitorare continuamente la respirazione e la temperatura corporea dell'animale durante l'imaging al termine dell'imaging, rimuovere l'ago e altre sonde e posizionare l'animale sotto una lampada termica mentre massaggia delicatamente la zona addominale inferiore. Fino a quando l'animale non si sveglia quantitativamente. D-C-E-M-R-I può essere applicato con successo per xenotrapianti di tumore pancreatico ortotopico.

Utilizzando il modello della regione di riferimento, ad esempio, queste mappe di contrasto dimostrano la regione tumorale in scala cromatica un minuto prima dell'iniezione della RM. Mezzo di contrasto. E a cinque e 40 minuti dopo si sovrapposero a T due immagini MR di peso in scala di grigi. Il topo in questo esperimento portava uno xenotrapianto di tumore pancreatico umano ortotopico.

Queste curve di aumento del contrasto sono state mediate dalla regione tumorale e dalla regione muscolare paravertebrale. Queste mappe kts e KEP per il tumore dimostrano la velocità di washin e washout dell'agente Mr.Contrast Durante il tentativo di questa procedura TCMI, è importante assicurarsi che il tumore si trovi dietro l'estremità superiore della tavola.