Name: Incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo Depositi tessuti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Impara l'incapsulamento di cellule cataboliche termogeniche per la ricerca sul metabolismo e l'obesità. Questo metodo utilizza microsfere di alginato per studiare la dissipazione energetica in vivo nei tessuti adiposi.

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Vorremmo ringraziare Jennifer Petrosino e David Disilvestro aiuto editoriale. Questa ricerca è stata sostenuta dal Premio numero 20020728 del consiglio Egg americano e Premio numero 10040042 da Novo Nordisk Farmaceutici, nonché dalla Food Innovation Center, Ufficio per gli Affari Internazionali, Center for Advanced Functional Foods ricerca, e l&#39;imprenditoria a OSU, nonché la National Science Foundation concessione CEE-0914790 (LJL). Il progetto descritto è stato sostenuto dal Premio Numero R21OD017244 (OZ) e UL1RR025755 (OSUCCC) dal Centro Nazionale per la Ricerca Risorse, finanziato dall&#39;Ufficio del Direttore, National Institutes of Health (OD) e sostenuto dal NIH tabella di marcia per la ricerca medica e NSC P30CA16058. Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il punto di vista ufficiale del Centro nazionale per le risorse di ricerca o il National Institutes of Health.

Il protocollo di studio è stato approvato da The Ohio State University comitati etici. Gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal protocollo IACUC. Tutte le procedure sono state eseguite sotto l&#39;armadio di livello 2 di biosicurezza con flusso laminare. Abbiamo seguito tutti i requisiti e le procedure di sicurezza standard. La tecnica di microincapsulazione per la preparazione di microcapsule è stata eseguita come descritto 17, 18. 1. Preparativi di materiali <ol><li> Preparare 10 ml di 2% di soluzione di alginato di sodio in soluzione salina fisiologica autoclavato (0,9% NaCl in acqua). Preparare 0,05% soluzione PLL in salina fisiologica. Preparare queste soluzioni il giorno prima e mescolare durante la notte. Filtrare le soluzioni con 0,22 micron filtro prima dell&#39;uso. </li><li> Preparare citrato di sodio 50 mM e 100 mM CaCl 2 0.9% soluzioni di NaCl e sterilizzare in autoclave. </li><li> Autoclavare tutti soluzioni, aghi, elettrodi, e bicchieri. Pulire accuratamente aghi puliti con fili per evitare intasamenti. </li><li> Determinare la quantità appropriata di cellule da utilizzare per le capsule (102 microcapsule sono necessari per ogni cm 2 di pozzo e ci sono circa 500 cellule per capsula 18). Usare 1 ml di alginato di sodio per due milioni di cellule. </li><li> Preparare una &#39;crescita dei fibroblasti Medium&#39; di siero di vitello contenente il 10%, e 100 U / ml di penicillina / streptomicina in un alto livello di glucosio (4.500 mg / l di glucosio) a medio Modified Eagle Dulbecco (DMEM). <ol><li> Preparare una &#39;Differenziazione medio I&#39; contenente 10% di siero fetale bovino, 10 ug / ml di insulina, 1 mM dexametasone, 0,5 mM xantina 3-isobutil-1-metil, e 100 U / ml di penicillina / streptomicina DMEM. </li><li> Preparare contenente siero un &#39;Differenziazione medio II&#39; 10% fetale bovino, 10 ug / ml di insulina, e 100 U / ml di penicillina / streptomicina DMEM. </li></ol></li><li> Preparare buffer di lisi contenente tablet inibitore della proteasi uno per 10 ml di Radio-Immunoprecipitazione tampone (RITampone PA). </li></ol> 2. alginato Microbeads Preparazione (Figura 1A) <ol><li> Rimuovere il vecchio mezzo da pallone di coltura cellulare. Lavare le cellule con 10 ml di PBS. Portare le cellule in sospensione con 0,25% tripsina-EDTA (2 ml per un pallone T175 confluenti). </li><li> Contare le cellule in sospensione di cellule utilizzando un emocitometro. Utilizzare 10 ml un&#39;aliquota dalla sospensione cellulare e contare le cellule secondo le istruzioni del produttore. Centrifugare le restanti cellule in terreno centrifugazione a 480 xg a temperatura ambiente per 5 min. </li><li> Sospendere il pellet cellulare in alginato di sodio, come descritto al punto 1.4. Trasferire la soluzione di sodio alginato-cella a una siringa da 5 ml. </li><li> Rimuovere le bolle d&#39;aria nella soluzione, aggiungere un ago 23-gauge e capovolgere la siringa per creare una tasca 1 ml di aria. </li><li> Mettere un piccolo bicchiere (180 ml) contenente 144 ml di CaCl mM soluzione 100 2 sotto il beccuccio ago della encapsulator. Collegare l&#39;elettrodo al encapsulator con la punta approximdiatamente 2,5 centimetri sopra la superficie della soluzione di CaCl 2 100 mM. </li><li> Inserire saldamente la siringa contenente la soluzione di alginato di sodio-cellule nella pompa a siringa. Attaccare il tubo di gomma per l&#39;apertura della siringa. Spingere lo stantuffo fino a quando la soluzione di alginato di sodio a cellule entra a metà del tubo. Regolare la tensione di 5,4 kV. Impostare il diametro 12,06 millimetri sulla pompa a siringa. Regolare la velocità di 3 ml / h. Avviare la pompa. Accendere encapsulator e mantenere la tensione a 5,4 kV. </li><li> Chiudere la finestra della cappa ed evitare inutili vibrazioni fino alla fine della formazione delle microsfere di alginato. Dopo tutta la soluzione passa attraverso l&#39;ago, solidificare microsfere sferiche alginato nella soluzione di CaCl 2 100 mM per ulteriori 20 minuti prima del rivestimento con PLL. </li></ol> 3. Microbeads rivestimento con PLL (Figura 1B) <ol><li> Rimuovere il bicchiere contenente le microsfere a forma di palla di sodio alginato-cellula e trasferire questi microbeads in una provetta da centrifuga da 50 ml. Rimuovere CaCl soluzione 2 dal pellet microperla. </li><li> Lavare le microsfere a forma di palla alginato di cellule aggiungendo 30 ml di NaCl allo 0,9%. Agitare il tubo a mano delicatamente. Rimuovere 0,9% NaCl con 25 ml pipetta dopo le microsfere sono precipitati per gravità. Ripetere altre due volte per un totale di 3 lavaggi. </li><li> Utilizzare 10 ml di soluzione PLL 0,05% per ogni 1 ml di soluzione di alginato di sodio. Aggiungere il PLL 0,05% e agitare a 1000 giri al minuto per 10 min. Nota: Di solito, 10 min è sufficiente per il rivestimento PLL. </li><li> Dopo si forma PLL cappotto, rimuovere la soluzione PLL e lavare le capsule 3 volte come descritto al punto 3.2. </li></ol> 4. Rimozione di alginato core (Figura 1C) <ol><li> Aggiungere 30 ml di 50 mM soluzione di citrato di sodio. Attendere 5 minuti o fino a quando tutta l&#39;alginato di sodio è disciolto. Lavare capsule tre volte come descritto al punto 3.1.1. </li><li> Rimuovere il 0,9% NaCl, aggiungere 20 ml di mezzo di coltura al tubo 50 mle trasferire tutte le capsule contenenti le cellule in un pallone di coltura cellulare. Maneggiare cellule incapsulate in condizioni standard di coltura cellulare 18. </li></ol> 5. Le domande vitro per lo studio xenotrapianto e Host cellulari interazioni o Cinetica di Metabolita Afflusso / Efflux tra cellule (Figura 2) <ol><li> Cellule ospiti Cultura il 24 pozzetti fino confluenti per co-culture. Utilizzare il &#39;fibroblasti crescita medio&#39; per preadipocytes coltura. </li><li> Trasferire microcapsule in 24 piastra contenente cellule ospiti confluenti bene. Aggiungere microcapsule per ottenere un monostrato (102 microcapsule / cm 2 di pozzo). </li><li> Indurre la differenziazione pre-adipociti con Differenziazione Media I. Ogni 48 ore, cambio media differenziazione Media II per sei giorni. Lisare le cellule in tampone RIPA. Utilizzare 50 proteine ​​g per condizione di analizzare l&#39;espressione proteica con Western Blot. </li></ol> 6. In Vivo Domanda di Trattento di obesità (figura 3) <ol><li> Mescolare 4% isoflurano con l&#39;ossigeno per l&#39;induzione di anestesia e 2% isoflurano con ossigeno per il mantenimento dell&#39;anestesia. Confermare adeguata profondità dell&#39;anestesia per pizzico piedi. <ol><li> Applicare una pomata anti-prurito sugli occhi per proteggere le cornee si secchi. </li></ol></li><li> Utilizzare cellule incapsulate che sono etichettati in modo permanente con proteina fluorescente artificiale, come la proteina fluorescente verde (GFP). </li><li> Utilizzare una siringa da 3 ml e un ago calibro 20 per iniettare cellule incapsulate. <ol><li> Iniettare 0,5 x 10 6 cellule sospese in 0,2 ml di soluzione in ciascuno depot grasso catetere che si trova nella zona intraperitoneale tra un gonadi e reni come mostrato in figura 3. Utilizzare questo volume di PBS e il numero di cellule per topo con un peso medio di 40 g. Regolare numero di cellule e volume in topi che hanno peso diverso o per la determinazione degli effetti dose-dipendente. </li></ol></li></ol>

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Vari metodi sono stati utilizzati per incapsulare cellule, comprese l&#39;essiccazione, estrusione, ed emulsione 19. In questo metodo, le perline alginato vengono estrusi attraverso un ago, poi rivestito con PLL e il nucleo alginato sarà sciolto per completare l&#39;incapsulamento. Anche se questo metodo è stato usato per anni, formazione delle perline con la dimensione desiderata e la forma sferica è ancora difficile. La dimensione delle capsule è fortemente dipendente dalla viscosità della soluzione di algi...

L&#39;aumento dell&#39;incidenza delle malattie croniche 1 ha stimolato studi sul trapianto di popolazioni di cellule terapeutiche 2. Le cellule staminali singenici o allogeniche sono i tipi di cellule più comunemente usati per queste applicazioni 2. Tuttavia, questi trattamenti non consentono il controllo della differenziazione e migrazione delle cellule staminali dopo l&#39;impianto e non sono convenienti. Il trapianto di cellule geneticamente modificate con funzioni benefiche anticipa migliorare il trattamento di molte malattie. Tuttavia, le modifiche genetiche di cellule vengono riconosciuti dal sistema immunitario dell&#39;ospite, quindi, questi trattamenti richiedono immunosoppressione 3. L&#39;incapsulamento di cellule che producono l&#39;insulina è stato sviluppato dal Dr. Chang 4. La tecnica si basa sulla incapsulamento delle cellule in goccioline alginato che vengono immerse in una soluzione di cloruro di calcio. Molecole alginato consistono di acido mannuronico (M) e guluronico (G) e possono essere collegati da Ca 2+. Dopo gelificazione, le perle sono sospese una soluzione di poli-L-lisina (PLL). Durante questa fase, PLL lega al G e M nelle molecole alginato che stabilisce membrana della capsula. La porosità della membrana della capsula può essere modulata variando le concentrazioni M e PLL, il tempo di incubazione, e la temperatura. Il legame del PLL dipende anche dal tipo e dalla concentrazione di alginato. Matrici alginato reticolato con ioni Ca 2+, sono instabili in ambiente fisiologico o in soluzioni tampone comuni con alta concentrazione di fosfato e ioni citrato. Questi buffer possono estrarre Ca 2+ dal alginato e liquefare il nucleo. Liquefazione del nucleo alginato fornisce spazio all&#39;interno delle capsule per il movimento e la crescita cellulare. Cellule incapsulate in alginato polyanionic con policationico poli-L-lisina (APL) sono impermeabili per immunoglobuline ma hanno afflusso di nutrienti e l&#39;efflusso di tossine. Queste proprietà consentono APL lungo termine survival di cellule incapsulate dopo il trapianto in host geneticamente diverse. Elliott et al. Riportato la sopravvivenza di funzionamento delle cellule pancreatiche suina incapsulati in un paziente umano nove anni dopo l&#39;impianto 5. Tecniche di incapsulamento possono essere classificati in microincapsulazione (3-800 micron) e macroincapsulazione (maggiore di 1000 micron). Le microcapsule sono più durevoli macrocapsules 6. Fin dalla sua scoperta dal Dr. Chang e colleghi nel 1964, microincapsulazione è stato ampiamente utilizzato per l&#39;incapsulamento delle cellule anabolizzanti che producono insulina, altri ormoni e molecole bioattive 7. Questi trattamenti hanno affrontato diverse sfide nel tessuto ospite tra cui la fibrosi e la risposta immunitaria 8. Inizialmente, gli effetti collaterali legati alla qualità dei biopolimeri sono stati risolti. Tuttavia, il trapianto di cellule anabolizzanti avvia ancora effetti collaterali, quali la fibrosi, come risultato di ormone overproduzione di fuori di una ghiandola specializzata. Negli ultimi decenni, l&#39;obesità e il diabete di tipo 2 ha raggiunto proporzioni epidemiche 9. Più del 30% delle persone adulte in tutto il mondo sono in sovrappeso e obesi 10. Aumento intra-addominale (IAB) la formazione di grasso aumenta l&#39;incidenza di infiammazione cronica e promuove diabete di tipo 2, le malattie cardiovascolari, alcuni tipi di cancro, e di altre patologie 11-13. Molte evidenze suggeriscono che la patogenesi associato con il grasso IAB può essere evitato dagli adipociti specifici. Recenti studi hanno dimostrato che il trapianto di adipociti sottocutanei in regione IAB può migliorare il metabolismo e ridurre l&#39;obesità e insulino-resistenza nei roditori in vivo 14. Efficace riduzione di obesità e insulino resistenza è stata associata con adipociti termogenica grado di dissipare l&#39;energia sotto forma di calore 15,16. Modifica termogenica adipociti può essere ottenuto mediante trasfezione stabiledi geni che partecipano al disaccoppiamento protonico mitocondriale, come la proteina di disaccoppiamento 1 (Ucp1) o di geni che regolano l&#39;espressione di altri geni Ucp1 e termogenica 15,16. Nostri studi recenti hanno dimostrato che la deficienza in aldeide deidrogenasi 1 a1 (Aldh1a1) porta al rimodellamento termogenico di grasso IAB che riduce l&#39;obesità e insulino-resistenza in questi topi 17,18. In particolare, l&#39;incapsulamento di termogenico Aldh1a1 carente (Aldh1a1 - / -) preadipocytes media stesso effetto terapeutico di grassi IAB in obesi topi wild-type, suggerendo nuove opportunità terapeutiche per il trattamento di IAB grasso 18. Nelle impostazioni sperimentali, le cellule incapsulate permettono ai ricercatori di studiare gli effetti di specifiche popolazioni cellulari in modo economicamente vantaggioso 19. Qui si discute il metodo di incapsulamento di una linea cellulare catabolico termogenica e il suo laboratorio e applicazione terapeutica in un modello murino di obesità. Il protocollo descrive three fasi per la produzione di microcapsule (Figura 1): la formazione delle microsfere di alginato (Figura 1A), la formazione del policationico poli-L-lisina (PLL) membrane sulla superficie di microsfere (Figura 1B), e la rimozione del nuclei di alginato (Figura 1C).

<table><tbody><tr><td>Dispositivo di incapsulamento (VAR V1)</td><td>Nisco</td><td>LIN-0042</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Pompa a siringa KD scientific</td><td>KD scientific</td><td>780100Y</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Microscopio Olympus&nbsp;</td><td>Olympus Optical</td><td>IX70-S8F2</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Alginato di sodio</td><td>Sigma</td><td>MKBP8122V</td><td>Nessuno Bromuro</td></tr><tr><td>di poli-L-lisina (PLL)</td><td>Sigma</td><td>020M5006V</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Sigma</td><td>SLBJ2662V</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Citrato di sodio tribasico diidrato</td><td>Sigma</td><td>030M0200</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Sigma</td><td>SLBD2595V</td><td>Nessuno Gel</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN TGX</td><td>Bio-Rad</td><td>456-1093</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Anticorpo primario ATGL (da coniglio)</td><td>Segnalazione cellulare</td><td>2138S</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Anticorpo secondario (anti coniglio)</td><td>LI-COR</td><td>926-68071</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Tampone per test di radioimmunoprecipitazione (RIPA)</td><td>Boston BioProducts</td><td>D25Y6Z</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Tamponato con fosfato soluzione salina (PBS)</td><td>Sigma</td><td>RNBD2893</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Cortizone 10 unguento anti-prurito</td><td>Cortizone 10</td><td>C4029138</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Siero neonato di vitello (CS)</td><td>Sigma</td><td>N4762</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>3-Isobutil-1-metilxantina (IBMX)</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Desametasone</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Insulina (bovina)</td><td>Sigma</td><td>I5879</td><td>Nessuno</td></tr><tr><td>Compresse da cocktail con inibitore della proteasi</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td>Nessuno</td></tr></tbody></table>

incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo depositi tessuti

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Incapsulamento delle cellule è stato sviluppato per intrappolare cellule vitali all&#39;interno delle membrane semi-permeabili. Le cellule incapsulate trapiantate possono scambiare metaboliti a basso peso molecolare in tessuti dell&#39;ospite trattato per conseguire sopravvivenza a lungo termine. La membrana semipermeabile permette innestato cellule incapsulate per evitare il rigetto da parte del sistema immunitario. La procedura di incapsulamento è stato progettato per consentire un rilascio controllato di composti bioattivi, come l&#39;insulina, altri ormoni e citochine. Qui si descrive un metodo per l&#39;incapsulamento di cellule catabolici, che consumano lipidi per la produzione di calore e la dissipazione di energia (termogenesi) nel tessuto adiposo intra-addominale di topi obesi. L&#39;incapsulamento di cellule catabolici termogenica potrebbe essere potenzialmente applicabili alla prevenzione e il trattamento dell&#39;obesità e il diabete di tipo 2. Un&#39;altra potenziale applicazione di cellule catabolici può includere la disintossicazione da alcool o altri metaboliti tossici e inquinanti ambientali.

La Figura 1 mostra che ogni fase della produzione microsfere può essere controllato al microscopio. La Figura 2A mostra come co-coltura adipociti con un monostrato di cellule incapsulate. Figura 2B è un esempio rappresentativo di uno studio quantitativa utilizzando adipociti / microcapsule co-culture sono stati descritti nella sezione 5. Lisati degli adipociti sono stati analizzati usando Western Blot. Cellule incapsulate non sono state analizzate in questo esperimento....

Qui, presentiamo un protocollo per l'incapsulamento di cellule cataboliche, che consumano lipidi per la produzione di calore nel tessuto adiposo intra-addominale e aumentano la dissipazione di energia nei topi obesi.

Incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo Depositi tessuti

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare l'incapsulamento di una linea cellulare catabolica termogenica e le sue applicazioni in vitro e potenzialmente in vivo. Per iniziare questa procedura, preparare una sospensione cellulare di alginato di sodio e trasferirla in una siringa da cinque millilitri. Il passaggio successivo consiste nell'utilizzare un dispositivo di incapsulamento per produrre microsferule di alginato.I microsferette vengono quindi ricoperte con una soluzione polionica di poli-L-lisina e il nucleo di alginato viene successivamente rimosso per formare una membrana semipermeabile attorno a una sospensione cellulare. Il passaggio finale consiste nel coltivare in co-coltura le cellule incapsulate con altre linee cellulari o nell'iniettarle nei tessuti adiposi di topi. Alla fine, l'analisi ematica immunitaria mostra un'attività lipolitica maggiore negli adipociti coltivati in co-coltura con microcapsule contenenti adipociti carenti di aldeide deidrogenasi.Sebbene l'immunoeistochimica mostri un trapianto riuscito di cellule incapsulate nei tessuti adiposi di topi, questo metodo può fornire informazioni sulla termogenesi e sul tessuto apus. Può inoltre essere a

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Primarie preadipociti bianchi isolati dal tessuto adiposo bianco nei topi possono essere differenziate in cellule del beige / brite. Presentato qui è un sistema affidabile modello cellulare per studiare la regolazione molecolare della "doratura" di grasso bianco.

Isolamento e la differenziazione di cellule stromali vascolari alle celle Beige / Brite

La differenziazione degli adipociti bianchi e beige da progenitori vascolari del tessuto adiposo porta il potenziale di miglioramento metabolico nell'obesità. Descriviamo i protocolli per CD34 + CD31 + isolamento di cellule endoteliali da grasso umano e per una successiva in vitro espansione e differenziazione in adipociti bianchi e beige. Diverse applicazioni a valle sono discussi.

Isolamento, espansione e adipogenico induzione di CD34 + CD31 + cellule endoteliali dal tessuto adiposo umano omentale e sottocutaneo

Qui, presentiamo micro-frammentazione senza enzimi adiposi umani utilizzando un dispositivo di sistema chiuso. Questo nuovo metodo consente l'ottenimento di ammassi sub-millimetrici di tessuto adiposo adatto per il trapianto in vivo, la coltura in vitro e l'ulteriore isolamento e caratterizzazione delle cellule.

Tessuto Adiposo Umano Microframmentazione per la Fenotipizzazione Cellulare e la Caratterizzazione del Secretome

Presentiamo un metodo semplice per isolare le cellule progenitrici adipose altamente vitali dalle pastiglie di grasso epididimale del topo utilizzando lo smistamento delle cellule attivato a fluorescenza.

Preparazione di cellule progenitrici adipose dai tessuti adiposi epididimali del topo

Questo rapporto descrive un protocollo per l'isolamento simultaneo dei preadipociti primari marroni e bianchi dai topi appena nati. Le cellule isolate possono essere coltivate in coltura e indotte a differenziarsi in adipociti bianchi e marroni completamente maturi. Il metodo consente la caratterizzazione genetica, molecolare e funzionale delle cellule adipose primarie in coltura.

Isolamento e differenziazione dei preadipociti bianchi e marroni primari dai topi appena nati

Questo metodo di trapianto di isole ricoperte di grasso è adatto per il rilevamento di isole innestate nella cavità intraperitoneale. In particolare, non richiede l'uso di agenti bioleganti o sutura.

Trapianto di isole ricoperte di grasso utilizzando tessuto adiposo bianco epididimo

I preadipociti sono isolati dalla frazione vascolare stromale del tessuto adiposo bruno interscapolare di topi neonati e differenziati in cellule che accumulano goccioline lipidiche, esprimono marcatori molecolari e mostrano la morfologia mitocondriale degli adipociti bruni maturi. Queste cellule vengono ulteriormente analizzate mediante immunofluorescenza e microscopia elettronica a trasmissione.

Differenziazione e imaging di adipociti marroni dalla frazione vascolare stromale del tessuto adiposo interscapolare da topi neonati

Questo protocollo descrive l'isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale (SVF) dal tessuto adiposo murino per ottenere preadipociti e ottenere la differenziazione degli adipociti in vitro. L'uso di un dissociatore tissutale per la digestione della collagenasi riduce la variazione sperimentale e aumenta la riproducibilità.

Isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale dal tessuto adiposo bianco murino mediante un dissociatore tissutale

Qui, descriviamo un protocollo per isolare, coltivare e fenotipizzare le cellule endoteliali microvascolari dal tessuto adiposo sottocutaneo umano (hSATMVECs). Inoltre, descriviamo un modello sperimentale di cross-talk hSATMVEC-adipociti.

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Le dimensioni e la fragilità degli adipociti maturi hanno limitato le tecniche e gli strumenti disponibili per il loro studio e isolamento. Qui viene descritto un protocollo per l'isolamento di adipociti murini maturi, che può essere facilmente adattato a diversi depositi adiposi e diete di topi.

Isolamento e coltura di adipociti murini primari da topi magri e obesi

Impara l'incapsulamento di cellule cataboliche termogeniche per la ricerca sul metabolismo e l'obesità. Questo metodo utilizza microsfere di alginato per studiare la dissipazione energetica in vivo nei tessuti adiposi.

Incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo Depositi tessuti

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