Name: Continua infusione endovenosa è la Strada del trattamento scelta per arginina-vasopressina bloccante dei recettori conivaptan nei topi per studiare Stroke-evocato Cervello Edema (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Scopri come somministrare conivaptan per via endovenosa continua nel modello murino di ictus per ridurre l'edema cerebrale. Questo protocollo chirurgico ottimizza il recupero post-ictus e migliora la progettazione di studi futuri.

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Ringraziamo Swedish Medical Center per fornire il finanziamento e strutture. Ringraziamo anche Craig Hospital per l&#39;uso generoso di spazio di laboratorio.

Gli esperimenti sono stati effettuati in conformità con le linee guida del National Institutes of Health per la cura e l&#39;uso di animali nella ricerca e sono stati approvati dal Comitato di cura degli animali e Usa Swedish Medical Center. Tutte le procedure sono state eseguite con opportune tecniche asettiche. animali da laboratorio utilizzati per lo studio erano di sesso maschile, 3 mesi di età, wild type topi C57 con il peso corporeo dal 25 al 27 g. 1. In Vivo fase di aspirazione <ol><li> Pre-coat il filamento con resina dentale prima dell&#39;intervento. <ol><li> Tagliare un pezzo lungo 12 millimetri di filamento da una sutura 7-0 in nylon. Mescolare 2 parti di resina con 1 parte di induritore, e poi immergere immediatamente la punta del filamento nella miscela per coprire circa 1/3 della sua lunghezza. Rimuovere rapidamente e verificare che sia coperto con un cappotto superficie liscia di resina dentale. </li><li> Far asciugare il filamento per 2 ore prima dell&#39;uso. </li></ol></li><li> Posizionare il mouse in unn camera di induzione dell&#39;anestesia (2 volumi L), e impostare il flusso di 1,5% isoflurano nel 25% di aria arricchita di ossigeno camera a 2 L / min andare nella camera. </li><li> Lasciare che il mouse per rimanere in camera di induzione fino a completo anestetizzato, 8 come determinato dalla mancanza di risposta alla coda pizzico. </li><li> Posizionare il mouse sul tavolo operatorio con un tampone riscaldato, e impostare la concentrazione di isoflurano a 1% per il mantenimento dell&#39;anestesia consegnato spontaneamente attraverso il cono di naso. </li><li> Clip capelli sulla parte anteriore e la parte posteriore del collo, e spruzzare collo con alcool. Applicare veterinaria pomata oftalmica su entrambi gli occhi. </li><li> Per monitorare costantemente la temperatura corporea, utilizzare una sonda temperatura rettale collegata al display digitale durante l&#39;intervento chirurgico. </li><li> Posizionare il mouse in posizione supina, applicare la soluzione macchia 10% iodopovidone per la disinfezione, coprire con un telino sterile, e poi fare una incisione mediana lungo il collo con una dimensione di 10 bisturi chirurgico. </li> &lt;li&gt; temporaneamente legare l&#39;arteria sinistra carotide comune (CCA) con sutura 6.0 seta. </li><li> Posizionare un altro legame sulla carotide esterna sinistra (ECA). </li><li> Inserire una clip microvascolare sulla carotide interna (ICA). </li><li> Tagliare un piccolo foro sulla carotide esterna con le forbici microvascolari. Inserire un filamento fatta 7-0 sutura in nylon rivestito con resina dentale nell&#39;apertura della Corte dei conti, e avanzare cefalicamente, durante la rimozione del clip, fino a quando si avverte resistenza (circa 5-7 mm dal punto di biforcazione della CCA). </li><li> Inserire un legame temporanea sulla carotide interna per fissare il filamento in posizione. Fare riferimento al diagramma, figura 1A. Chiudere la pelle con suture di seta, e infiltrarsi la ferita sul fronte del collo con 0,2 ml di bupivacaina 0,5%, come nel passo 2.6. </li><li> Lasciare che il mouse per risvegliare dall&#39;anestesia e riguadagnare la coscienza in una camera di recupero per 60 min. Non lasciare l&#39;animale incustodito fino a quando non ha riacquistatocoscienza sufficiente per mantenere prona sternale. </li><li> Testare il mouse per il neurologica deficit di punteggio (NDS) come segue: 0 = normale funzione motoria, 1 = flessione del busto e della zampa anteriore controlaterale sulla sponda idraulica, 2 = girando verso il lato controlaterale, ma la postura normale a riposo, 3 = appoggiandosi al controlaterale lato a riposo, 4 = nessuna attività motoria spontanea. 4,9 <ol><li> Per il test NDS, sollevare topo per la coda e posto su una superficie piana per l&#39;osservazione (2-3 min). In alternativa, osservare topi in camera di recupero. Escludere i topi che presentano NDS inferiore al 2 dall&#39;esperimento a causa di insufficiente occlusione della MCA. Nota: tecnica laser Doppler flussimetria può essere utilizzato per confermare MCA occlusione 9-11. </li></ol></li><li> Re-anestetizzare l&#39;animale dopo 60 min di recupero nella camera di induzione come sopra descritto, ri-sterilizzare la precedente incisione cutanea con soluzione scrub povidone-iodio 10%, e riaprire la ferita chirurgica sulladavanti al collo tagliando e rimuovendo la sutura di seta. </li><li> Per rimuovere il filamento dalla Corte dei conti effettuare le seguenti operazioni: <ol><li> Posizionare una clip microvascolare sul ICA. Sciogli la sutura sul ICA e tirare il filamento fuori mentre si tiene la clip aperta. </li><li> Chiudere la clip e posizionare un pareggio sul ECA prossimale al taglio. </li><li> Rimuovere il morsetto e rimuovere la legatura del CCA per ripristinare il flusso di sangue al cervello. Fare riferimento al diagramma, figura 1B. </li></ol></li></ol> 2. Installazione di IV catetere nella vena giugulare per il trattamento continuo 48 ore Nota: procedere all&#39;installazione del catetere subito dopo la fase 1.16.3 senza risveglio del mouse. <ol><li> Utilizza due diverse dimensioni di tubi flessibili: inserire il tubo interno (0,94 mm di diametro esterno, per contenere il farmaco infuso) nel tubo esterno (3,18 mm di diametro esterno, per la protezione del tubo interno). </li><li> Pallacciare il mouse nella posizione prona, applicare la soluzione scrub povidone-iodio 10% per la disinfezione, e fare 1 cm un&#39;incisione sul retro del collo con una taglia 10 bisturi chirurgico. Ruotare il mouse in posizione supina, ri-sterilizzare la parte anteriore del collo con soluzione scrub povidone-iodio 10%, e riaprire la ferita chirurgica sulla parte anteriore del collo. Tunnel il tubo sotto la pelle dal incisione fatta sul retro verso la parte anteriore del collo, e esteriorizzare dalla ferita aperta 1 cm. </li><li> Rimuovere tessuto adiposo sottocutaneo dal lato sinistro della parte anteriore del collo circa 1 cm lateralmente dalla linea mediana. Individuare la vena giugulare sinistra, posizionare due legami lungo la vena 5 mm l&#39;uno dall&#39;altro, e un po &#39;allungare la vena. Fare un piccolo foro sulla vena giugulare tra i due legami con le forbici microvascolari; inserire la punta del tubo interno 5 millimetri caudalmente profondità (verso il cuore). </li><li> Fissare il tubo con entrambe legami con la vena giugulare. Chiudere la pelle sulla parte anteriore del collo conuna sutura 3-0 seta. Fare riferimento al diagramma, figura 1C. </li><li> Fissare il tubo alla pelle sul retro del collo con una sutura, e collegare il tubo ad una pompa microinfusion IV attraverso una girevole. Il girevole permette la libera circolazione di topi all&#39;interno della gabbia con pieno accesso al cibo e all&#39;acqua. </li><li> Infiltrati le incisioni cutanee sulla parte anteriore e la parte posteriore del collo con 0,2 ml di 0,5% bupivacaina per prevenire il dolore post-operatorio. Nota: A seconda dei protocolli specifiche di polizia istituzionali, gli animali possono essere trattati con oppioidi, i FANS, o antibiotici pre e post-operatorio. Tuttavia, i trattamenti menzionati possono alterare i risultati di esito ictus ischemico (vedi la discussione sezione). 11-14 </li><li> Lasciare che l&#39;animale per risvegliare nella camera di recupero, e quindi ospitare l&#39;animale in una gabbia separata fino al punto di fine dell&#39;esperimento. Non lasciare l&#39;animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente a mantenere sternaleprona. </li><li> Impostare la velocità di infusione per 48 ore in continuo trattamento IV di conivaptan (0,14 mg / ml in 5% di destrosio) o un veicolo a 1,5 ml / kg / ora, 4 e iniziare l&#39;infusione. Nota: La quantità totale di IV conivaptan infuso dovrebbe essere di circa 0,2 mg / topo / giorno in un volume totale di 1,44 ml. Nota: Eseguire iniezione intraperitoneale (IP) di conivaptan due volte al giorno con quantità totale di 0,2 mg in 1,44 ml di 5% di destrosio. Implementare iniezione IP è stato come precedentemente descritto. 15 Restrain topi afferrando la pelle della superficie posteriore del corpo e la coda. Iniettare conivaptan o di un veicolo nel quadrante in basso a sinistra dell&#39;addome con un / 1 ago pollice 26 G / 2. 15 </li><li> Osservare gli animali due volte al giorno per tutta la durata dell&#39;esperimento (48 ore). Consentire agli animali di avere pieno accesso al cibo e all&#39;acqua. Se l&#39;animale mostra segni di sofferenza o di dispnea consultare un veterinario. Se eutanasia è necessario per l&#39;animale in grave distress fare riferimento al punto 3.1 di seguito, ed escludere l&#39;animale dallo studio. </li></ol> 3. Valutazione della Stroke-evocata edema cerebrale al punto finale <ol><li> Sacrificare il mouse da un eccesso di anestetizzare con il 5% isoflurano. </li><li> Utilizzare un bisturi per fare una incisione pelle sopra l&#39;osso del cranio lungo la linea mediana, e ritrarre la pelle per esporre l&#39;intero cranio sopra cervello. Iniziando il foro occipitale, tagliare l&#39;osso del cranio lateralmente lungo il perimetro del cervello su ogni lato, e sollevare con attenzione senza toccare il cervello sottostante. Sever cervello dalla colonna vertebrale e nervi attaccati alla base del cranio. </li><li> Rimuovere il cervello, separarlo dal bulbo olfattivo e il cervelletto, e sezionare il cervello lungo la fessura interemisferica in emisferi cerebrali ischemici e non ischemici, come descritto in precedenza. 9 </li><li> Valutare edema cerebrale confrontando wet-to-dry rapporti (WDR) come descritto in precedenza 4,9. pesare i tessutiprima e dopo essiccazione per 3 giorni a 100 ° C in un forno. Calcolare il contenuto d&#39;acqua del cervello (BWC) in% H 2 O = (WT 1-asciutto. / Peso bagnato.) X 100%. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo studio ha un valore importante per la ricerca preclinica ictus. Questo studio rivela che continua infusione endovenosa di conivaptan (0,2 mg / die) dopo ictus sperimentale nei topi riduce efficacemente l&#39;edema cerebrale dopo 48 ore di trattamento. L&#39;effetto di iniezione IP la stessa dose di conivaptan su edema cerebrale è stato anche indagato. trattamento conivaptan da entrambe le vie IV e IP produce acquaresi nei topi, come indicato da: 1) aumento della osmolalità plasmatica leggermente al di sopra i liv...

L'ictus continua ad essere un enorme fardello per pazienti e medici. I modelli di ictus di animali sono stati utilizzati in laboratorio per quasi due decenni. 1 Ciononostante, i trattamenti sperimentali che funzionano negli animali spesso falliscono nell'uomo. 2 Questa discrepanza nei risultati del trattamento può essere dovuta a vari fattori, come le vie di somministrazione dei farmaci utilizzati nella ricerca sugli animali, il metabolismo e il tasso di eliminazione dei farmaci e molti altri aspetti. Una delle principali complicanze dell'ictus, l'edema cerebrale, è al centro dell'attuale ricerca nel campo delle neuroscienze. I meccanismi di formazione dell'edema cerebrale coinvolgono disturbi dell'acqua e dell'equilibrio elettrolitico innescati dalla risposta arginina-vasopressina (AVP) al danno cerebrale ischemico. 3 Pertanto, l'AVP e i suoi recettori (V1a e V2) sono al centro degli studi di ricerca sulla formazione di edema cerebrale post-ischemico. 3
Abbiamo sviluppato una metodologia per studiare gli effetti del bloccante del recettore misto arginina-vasopressina (V1a e V2) conivaptan sull'edema cerebrale post-ischemico nei topi. 4 I bersagli molecolari del conivaptan5 rendono il farmaco un candidato adatto per l'esplorazione delle sue proprietà nell'alleviare l'edema cerebrale. Inoltre, il conivaptan deve essere studiato nel contesto degli eventi fisiopatologici dell'ictus. 6 Nel progettare questo studio, abbiamo preso in considerazione il confronto dei risultati del trattamento utilizzando due diverse vie di somministrazione di conivaptan: endovenosa (IV)4 e intraperitoneale (IP). 7 Sono stati valutati gli effetti dei trattamenti sull'edema cerebrale indotto da ictus. Qui vengono descritti protocolli dettagliati per l'induzione chirurgica dell'ictus sperimentale mediante occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) e seguiti da un trattamento continuo con conivaptan mediante l'installazione di un catetere IV giugulare. Dopo l'induzione dell'ictus, gli animali sono stati assegnati in modo casuale ai seguenti gruppi: veicolo o conivaptan (0,2 mg/die) trattati per via endovenosa o IP.

<table><tbody><tr><td>Pad riscaldato</td><td>K& Monitor di temperatura H Manufacturing Inc</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>con sonda rettale</td> Bobina di sutura in seta <td>Physitemp</td><td>7029</td><td></td></tr><tr><td>, sutura in seta 6-0</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>SP114</td><td></td></tr> su ago, sutura in nylon <tr><td>3-0</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td></td></tr>, polisilossano <tr>in resina dentale<td>7-0</td><td>Ethicon</td><td>1696G</td><td></td></tr><tr><td>con indurente</td><td>Heraeus Kulzer</td><td>65817930</td><td></td></tr><tr><td>Pompa per microinfusione IV</td><td>Kent Scietific</td><td>GT0897</td><td></td></tr><tr><td>Girevole 22GA</td><td>Instech</td><td>375/22PS</td><td></td></tr><tr><td>Tubo da laboratorio, 0,94 mm x 0,51 mm</td><td>Dow Corning</td><td>508-002</td><td></td></tr><tr><td>Tubo da laboratorio, 3,18 mm x 1,98 mm</td><td>Dow Corning</td><td>508-009</td><td></td></tr></tbody></table>

continua infusione endovenosa è la strada del trattamento scelta per arginina-vasopressina bloccante dei recettori conivaptan nei topi per studiare stroke-evocato cervello edema

Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema

L&#39;ictus è una delle principali cause di morbilità e mortalità nel mondo. Ictus è complicata da edema cerebrale e altri eventi fisiopatologici. Tra i giocatori più importanti per lo sviluppo e l&#39;evoluzione di edema cerebrale ictus-evocato è l&#39;ormone arginina-vasopressina e dei suoi recettori, V1a e V2. Recentemente, il bloccante dei recettori conivaptan V1a e V2 ha continuato ad attrarre l&#39;attenzione come un potenziale farmaco per ridurre l&#39;edema cerebrale dopo ictus. Tuttavia, i modelli animali che coinvolgono applicazioni conivaptan nella ricerca corsa devono essere modificati sulla base di percorsi praticabili di somministrazione. Ecco i risultati di 48 ore endovenosa continua (IV) sono confrontati con i trattamenti intraperitoneale (IP) conivaptan dopo l&#39;ictus sperimentale nei topi. Abbiamo sviluppato un protocollo in cui occlusione dell&#39;arteria cerebrale media è stato combinato con l&#39;installazione del catetere nella vena giugulare per il trattamento IV di conivaptan (0,2 mg) o veicolo. Diverse coorti di animali sono stati trattati con 0,2mg in bolo di conivaptan o di un veicolo IP quotidiana. Sperimentale ictus-evocato edema cerebrale è stata valutata in topi dopo IV continuo e trattamenti IP. Il confronto dei risultati è emerso che la somministrazione IV continua di conivaptan allevia post-ischemica edema cerebrale nei topi, a differenza della somministrazione IP di conivaptan. Concludiamo che il nostro modello può essere utilizzato per i futuri studi di applicazioni conivaptan nel contesto di ictus e di edema cerebrale.

La temperatura corporea degli animali è stata nel range fisiologico e stabile durante tutta la procedura chirurgica dell&#39;induzione ictus. Due topi che mostravano NDS inferiore a 2 subito dopo MCAO sono stati esclusi dallo studio. MCAO nei topi produce il volume dell&#39;infarto nell&#39;emisfero ipsilaterale a 48 ore. Valutazione delle fette TTC-macchiato mostra che circa il 50% dell&#39;emisfero è affetto da infarto dopo ...

I nostri studi hanno rivelato che gli effetti benefici del conivaptan dipendono dal metodo di somministrazione dopo l'ictus sperimentale nei topi. Abbiamo sviluppato un protocollo di ricerca per la somministrazione del bloccante del recettore tramite catetere endovenoso sulla formazione di edema cerebrale evocato da ictus nei topi.

Continua infusione endovenosa è la Strada del trattamento scelta per arginina-vasopressina bloccante dei recettori conivaptan nei topi per studiare Stroke-evocato Cervello Edema

Stroke is one of the major causes of morbidity and mortality in the world. Stroke is complicated by brain edema and other pathophysiological events. Among ...

L'obiettivo generale di questo studio preclinico è creare un modello murino efficace di somministrazione di Conivaptan dopo un ictus, al fine di migliorare la progettazione di futuri studi di ricerca nel campo dell'ictus. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande fondamentali nella ricerca sull'ictus, come ad esempio qual è l'importanza della via di somministrazione sugli effetti benefici della Conivaptan nel recupero dall'ictus nei topi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che assisterà i ricercatori negli studi di modellizzazione della Conivaptan e dei suoi effetti sull'edema cerebrale indotto dall'ictus.Almeno due ore prima dell'intervento chirurgico, tagliare un pezzo di filamento lungo 12 millimetri da una sutura in nylon 7-0, quindi mescolare due parti di resina dentale con una parte di indurente ed immergere rapidamente il filamento nella miscela, fino a ricoprirne circa quattro millimetri. Verificare immediatamente che la punta del filamento sia ricoperta da uno strato uniforme di resina dentale. Successivamente, lasciare asciugare il filamento all'aria per due ore.Quando la resina è pronta, posizionare un topo anestetizzato su un tappetino riscaldante sul ta

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Questo articolo viene illustrato due metodi molto diversi di iniezione: 1) nel cervello (intracerebroventricolare) e 2) sistemica (endovenosa) per introdurre gli agenti terapeutici nel sistema nervoso centrale di topi neonati.

Consegna di agenti terapeutici attraverso intracerebroventricolare (ICV) e per via endovenosa (ev) nei topi

In questo video, dimostriamo l'assemblaggio di un sistema di infusione cerebrale con pompa micro-osmotica seguito dal suo impianto chirurgico nel cranio del topo. Questo sistema consente la somministrazione continua di potenziali farmaci e facilita lo studio dei loro effetti sul cervello e sul tessuto cerebrale.

Sistema di infusione continua di farmaci in modello murino: una procedura chirurgica per impiantare un sistema di infusione con pompa microosmotica nel cervello di topo per la somministrazione continua di farmaci

Fonte: Zeynalov, E. et. al., L'infusione endovenosa continua è la via di trattamento scelta per il bloccante del recettore dell'arginina-vasopressina Conivaptan nei topi per studiare l'edema cerebrale evocato dall'ictus. J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra la somministrazione endovenosa di un antagonista del recettore dell'arginina-vasopressina (AVP) in un modello murino. L'occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media induce edema cerebrale. Un antagonista del recettore AVP viene...

Somministrazione endovenosa di bloccanti del recettore per ridurre l'edema cerebrale in un modello murino

Si descrive un metodo per indirizzare farmaci per il sistema nervoso centrale o impianto di un catetere o eseguendo una iniezione in bolo nel ventricolo destro laterale nei topi. Ci concentriamo in particolare sulla fornitura di oligonucleotidi antisenso. Questa tecnica è facilmente adattabile ad altri farmaci e ai ratti.

Consegna diretta intraventricolare di farmaci per il sistema nervoso centrale, Roditore

Gli accessi vascolari per misurare l'emodinamica, fornire fluidi ed eseguire prelievi di sangue sono importanti per qualsiasi studio su piccoli modelli animali. Presentiamo una tecnica per l'impianto di cateteri nell'arteria carotide e nella vena giugulare comune in un ratto anestetizzato per il collegamento a un sistema per eseguire monitoraggio, infusioni e campionamento.

Cateterismo dell&#39;arteria carotide e giugulare Vena di eseguire misure emodinamiche, Infusi e campionamento del sangue in un modello di ratto cosciente

La consegna a convezione migliorata (CED) è un metodo che consente la consegna efficace delle terapie nel cervello mediante la perfusione diretta di grandi volumi di tessuto. La procedura richiede l'uso di cateteri e una procedura di iniezione ottimizzata. Questo protocollo descrive una metodologia per il CED di un anticorpo in un cervello di topo.

Consegna di anticorpi nel cervello di Murine tramite consegna convezione-migliorato

Un metodo per la fornitura di cellule staminali neurali, adattabile per l'iniezione di soluzioni o sospensioni, attraverso l'arteria carotide comune (mouse) o l'arteria carotide esterna (ratto) dopo ictus ischemico è segnalato. Le cellule iniettate sono distribuite ampiamente in tutto il parenchyma cerebrale e possono essere rilevate fino a 30 d dopo la consegna.

Consegna intra-arteriosa di cellule staminali neurali al cervello di ratto e topo: applicazione all'ischemia cerebrale

Il monitoraggio della pressione intracranica nei modelli di roditori di emorragia intraventricolare non traumatica non è comune nella letteratura corrente. Qui, dimostriamo una tecnica per misurare la pressione intracranica, la pressione arteriosa media e la pressione di perfusione cerebrale durante l'emorragia intraventricolare in un modello animale di ratto.

Monitoraggio della pressione intracranica nel modello di roditore emorragia intraventricolare non traumatico

Questo protocollo descrive l'impianto consecutivo di una pompa osmotica per indurre l'aneurisma dell'aorta addominale mediante rilascio di angiotensina II in topi carenti di apolipoproteina E (ApoE) e di una porta di accesso vascolare con catetere della vena giugulare per il trattamento farmacologico ripetuto. Il monitoraggio dello sviluppo dell'aneurisma mediante ecografia 3D viene condotto efficacemente nonostante gli impianti dorsali.

Trattamento farmacologico mediante catetere venoso centrale in un modello murino di aneurisma dell'aorta addominale indotto da angiotensina II e monitoraggio mediante ecografia 3D

L'ambliopia è un disturbo dello sviluppo della corteccia visiva che è spesso accompagnata da forte soppressione di un occhio. Vi presentiamo una nuova tecnica per la misurazione e il trattamento di soppressione endoculare in pazienti affetti da ambliopia che possono essere distribuiti utilizzando occhiali per la realtà virtuale o di un dispositivo portatile iPod Touch.

La misurazione e trattamento di soppressione in Ambliopia

Scopri come somministrare conivaptan per via endovenosa continua nel modello murino di ictus per ridurre l'edema cerebrale. Questo protocollo chirurgico ottimizza il recupero post-ictus e migliora la progettazione di studi futuri.

Continua infusione endovenosa è la Strada del trattamento scelta per arginina-vasopressina bloccante dei recettori conivaptan nei topi per studiare Stroke-evocato Cervello Edema (Video) | JoVE Journal

Continua infusione endovenosa è la Strada del trattamento scelta per arginina-vasopressina bloccante dei recettori conivaptan nei topi per studiare Stroke-evocato Cervello Edema

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