Saggi di co-immunoprecipitazione e pull-down

I saggi di co-immunoprecipitazione (CoIP) e pull-down sono metodi strettamente correlati per identificare interazioni proteine-proteine stabili. Questi metodi sono correlati all'immunoprecipitazione, un metodo per separare una proteina bersaglio legata a un anticorpo da proteine non legate. In CoIP, una proteina legata agli anticorpi è a sua volta legata a un'altra proteina che non si lega con l'anticorpo, questo è seguito da un processo di separazione che preserva il complesso proteina-proteina. La differenza nei saggi pull-down è che le proteine esca marcate con affinità sostituiscono gli anticorpi e la cromatografia di affinità viene utilizzata per isolare complessi proteina-proteina.

Questo video spiega il CoIP, i test pull-down e la loro implementazione in laboratorio. Viene trattato un protocollo passo-passo per ogni tecnica, inclusi i reagenti, gli apparecchi e gli strumenti utilizzati per purificare e analizzare le proteine legate. Inoltre, la sezione applicazioni di questo video descrive una procedura per studiare come le proteine del mixovirus inibiscono la nucleoproteina dell'influenza, un'indagine sul ruolo degli ioni calcio nella calmodulina tramite un test pull-down e un test pull-down modificato per caratterizzare le interazioni proteiche transitorie.