Un modello semplificato per il trapianto di valvole cardiache eterotopiche nei roditori

Questo protocollo descrive un metodo semplice ed efficiente per il trapianto di foglietti valvolari aortici sotto la capsula renale per consentire lo studio dell'alloreattività delle valvole cardiache.

Il trapianto di valvole cardiache è proposto come un nuovo tipo di trapianto con il potenziale per fornire valvole cardiache durevoli, in grado di crescere somatica senza necessità di anticoagulazione. Questa tecnica è pratica e più semplice rispetto ai metodi precedenti per lo studio dell'immunobiologia del trapianto di valvole cardiache. Dopo aver anestetizzato il ratto, utilizzare le forbici di dissezione per incidere la pelle dallo xifoide alla tacca sternale.

Ed eseguire una sternectomia tagliando le costole su ciascun lato, lateralmente allo sterno fino a raggiungere un accesso ottimale al cuore. Iniettare eparina nell'atrio sinistro. Dopo il sacrificio, asportare il timo per migliorare la visualizzazione dei grandi vasi.

Quindi rimuovere il cuore sul blocco con l'aorta ascendente fino al livello dell'arteria innominata. Dopo aver posto il cuore del donatore in una capsula di Petri sterile subito dopo la cardiectomia, in un tampone ghiacciato e freddo, utilizzare la pinza e le forbici Vannas Spring per sezionare il cuore fino a quando rimane solo la radice aortica con un bracciale ventricolare di un millimetro prossimale alla valvola aortica. Per aprire la valvola aortica, effettuare un taglio longitudinale per aprire il seno di Valsalva tra i seni sinistro e non fraterno per visualizzare tutti e tre i volantini.

Per asportare singolarmente ogni volantino della valvola aortica, utilizzare la pinza smussata per afferrare il bordo del foglio e utilizzare le forbici a molla Vannas per asportare il volantino tagliando da una commessura fino all'anulus quindi verso la commessura successiva. Conservare i foglietti asportati in una soluzione tampone ghiacciata fino a quando non sono pronti per essere impiantati nel ratto ricevente, ma impiantare tutti i foglietti entro quattro ore dalla conservazione a freddo. Una volta che il ratto ricevente è completamente anestetizzato, mantenere la temperatura corporea a 36-38 gradi Celsius durante l'intervento chirurgico con la piastra riscaldante.

Quindi, posizionare il ratto in una posizione sdraiata laterale destra per accedere al rene sinistro. Somministrare buprenorfina al ratto ricevente per via sottocutanea prima dell'intervento chirurgico. E usa le forbici per incidere la pelle sul fianco longitudinalmente per un pollice.

Allo stesso modo, incidere la parete addominale sottostante. Usando il pollice e l'indice, applicare una leggera pressione dorsalmente e ventralmente mentre si utilizza la pinza curva. Sollevare il polo caudale del rene attraverso l'incisione addominale e cutanea.

Esternalizzare l'estremità cranica del rene in modo simile. In alternativa, il rene può essere esternalizzato afferrando il grasso perirenale e tirando verso l'alto con leggera tensione. Una volta esternalizzato, mantenere il rene umido con tampone salino caldo sul rene.

Per creare una tasca sottocapsulare, iniziare applicando una leggera pressione alla capsula renale utilizzando una serie di pinze smussate in modo che la capsula renale possa essere chiaramente distinta dal parenchima sottostante. Contemporaneamente utilizzando un altro set di pinze smussate, afferrare con attenzione la capsula e tirare delicatamente verso l'alto per creare un foro nella capsula. Con una pinza smussata, estendere l'incisione fino a creare uno spazio di circa due millimetri per ospitare il foglietto della valvola aortica.

Sviluppare una tasca sottocapsulare poco profonda che sia leggermente più grande del lembo della valvola mentre si solleva il bordo dell'incisione con una serie di pinze e si avanza una sonda smussata sotto la capsula renale. Iniziare il trapianto della valvola aortica recuperata sollevando la capsula fibrosa del bordo facendo avanzare il foglietto aortico nella tasca sottocapsulare con pinza smussata. L'incisione e la capsula renale possono essere lasciate aperte.

Spingere delicatamente il rene nella sua posizione anatomica usando la controtrazione applicata ai bordi dell'incisione. Chiudere l'incisione addominale con una sutura chirurgica sterile in esecuzione e chiudere la pelle con graffette. Dopo l'operazione, posizionare il topo in una gabbia pulita su una piastra riscaldante con accesso a cibo e acqua.

Se necessario, somministrare buprenorfina al ratto ricevente ogni sei-dodici ore per alleviare il dolore. Monitorare l'animale ogni giorno per valutare la guarigione delle ferite di routine e segni di dolore o angoscia. E rimuovere le graffette dopo sette-dieci giorni dall'intervento chirurgico.

Un'immagine rappresentativa mostra la posizione del foglietto della valvola aortica sotto la capsula renale per l'implementazione. E dopo tre, sette e ventotto giorni all'interno del ratto ricevente, localizzare e recuperare il tessuto trapiantato è diventato facile. I lembi della valvola aortica hanno mantenuto la loro architettura nativa dopo il trapianto eterotopico in animali singenici.

Dimostrare l'utilità di questo modello come linea di base per confrontare la risposta immunitaria nei trapianti allergenici. L'istologia con colorazione di ematossilina ed eosina ha rivelato che i lembi valvolari nei trapianti singenici dopo sette giorni erano strutturalmente intatti senza segni di gonfiore edematoso. L'integrità strutturale del foglietto valvolare dopo il trapianto è stata ulteriormente confermata dall'immunoistochimica per l'actina della muscolatura liscia e CD31.

I lembi della valvola aortica sono molto delicati. È importante maneggiarli con molta attenzione senza danneggiare le valvole. Il trapianto di valvole cardiache sottocapsulari renali semplifica il trapianto di valvole cardiache eterotopiche.

Ciò consentirà ai ricercatori con limitate capacità microchirurgiche di esplorare l'immunobiologia del trapianto di valvole cardiache.