Name: Approccio chirurgico, sfide e risoluzioni per il trapianto di utero nei ratti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Impara il trapianto di utero destro nei ratti, una procedura microchirurgica complessa che migliora i tassi di nascite vive. Questo protocollo dettagliato facilita l'applicazione della ricerca alla clinica.

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Questo studio è stato sostenuto dal Fondo nazionale svizzero per la ricerca scientifica (sovvenzione del progetto n. 310030_192736). Ringraziamo la dottoressa Frauke Seehusen dell'Istituto di patologia veterinaria dell'Università di Zurigo per il suo sostegno istopatologico.

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le prescrizioni federali svizzere sugli animali e approvati dall'Ufficio veterinario di Zurigo (n° 225/2019), garantendo la cura dell'uomo. Le femmine di ratto vergine di Lewis (peso corporeo di 170-200 g) e le femmine di ratto vergine bruno norvegese (170-200 g) sono stati utilizzati come donatori / riceventi dell'utero, mentre i ratti Lewis maschi (300-320 g) sono stati utilizzati per l'accoppiamento. I ratti avevano un'età compresa tra 12 e 15 mesi. Gli animali sono stati ottenuti da fonti commerciali (vedi Tabella dei materiali) e sono stati alloggiati in condizioni controllate e in un ambiente arricchito con libero accesso all'acqua e al cibo standard.
1. Recupero dell'utero
NOTA: Per i dettagli sulla procedura, consultare le relazioni 12,13,15 pubblicate in precedenza.
<ol><li>Indurre l'anestesia con isoflurano e ossigeno all'interno di un contenitore di plexiglas chiuso (14 cm x 25 cm x 13 cm) per 1-2 minuti (isoflurano 5 vol% in O2).<ol><li>Somministrare buprenorfina per via sottocutanea (0,05 mg/kg) e bupivacaina (0,5%, 8 mg/kg) per via sottocutanea nella regione dell'incisione addominale pianificata 30 minuti prima dell'intervento.</li>
		<li>Rasare tutta la pelle addominale del ratto con un rasoio elettrico.</li>
		<li>Utilizzare nastri per mantenere l'animale fissato su una piastra riscaldante durante l'intervento chirurgico. Applicare un unguento per gli occhi su entrambi gli occhi.</li>
		<li>Mantenere l'anestesia durante la procedura con 2-4 vol% di isoflurano in ossigeno mediante somministrazione continua attraverso un piccolo cono nasale.</li>
		<li>Monitorare la profondità dell'anestetico in base ai parametri clinici senza strumenti specializzati (frequenza respiratoria di ~ 70-120 / min-una caduta lenta del 50% è accettabile durante l'anestesia; controllare la profondità dell'anestetico con pizzicare la punta; il colore delle mucose dovrebbe essere rosa, non blu o grigio)16 e regolare la concentrazione di isoflurano di conseguenza. NOTA: Opzionale: il monitoraggio frequente della respirazione durante l'intervento chirurgico è fattibile con l'aiuto di un assistente.</li>
		<li>Confermare la profondità dell'anestetico eseguendo un pizzico della punta.</li>
		<li>Pulire la pelle addominale con un movimento circolare con tre tamponi alternati di una soluzione antisettica e alcool al 70%. Lasciare asciugare.</li>
		<li>Posizionare un drappo sterile (vedi Tabella dei materiali) con una finestra addominale sopra l'animale.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire laparotomia mediana.<ol><li>Aprire l'addome attraverso un'incisione lunga 6-8 cm sulla linea mediana, a partire da 0,5 cm sotto lo xiphisternum verso l'ipogastrio. Utilizzare un bisturi n. 10 per l'incisione cutanea e piccole forbici affilate per l'incisione linea alba. Non danneggiare il fegato o la vescica.</li>
		<li>Spostare l'intestino all'esterno della cavità addominale usando tamponi di cotone, coprirli delicatamente con una garza inumidita con soluzione salina sterile e proteggerli con un sacchetto di plastica sterile per un migliore isolamento.</li>
		<li>Inserire divaricatori o clip (vedi Tabella dei materiali) nelle cartelle della parete addominale sinistra e destra per mantenere il muscolo peritoneale da parte e l'addome aperto, per ottenere un accesso e una visibilità ottimali dell'utero e dei vasi associati. Fissare le clip/riavvolgitori con dei nastri.</li>
		<li>Applicare soluzione salina preriscaldata per mantenere umida la zona chirurgica e l'intestino ed evitare l'essiccazione dei visceri.</li>
	</ol></li>
	<li>Raccogli il corno uterino destro con la cavità uterina comune e la cervice più i peduncoli vascolari, compresi i vasi iliaci interni, interni e comuni.<ol><li>Ligate (poliglactina 4/0; vedi Tabella dei materiali), cauterizzare e recidere il corno uterino sinistro adiacente alla ramificazione dalla cavità uterina comune.</li>
		<li>Rimuovere il grasso in eccesso che circonda l'utero e la vagina. NOTA: Mantenere il grasso intorno al sistema uterino-vascolare.</li>
		<li>Sezionare la vescica al suo attaccamento alla cervice con cauterizzazione di tutti i vasi vescicali drenanti e nutrienti. Durante la cauterizzazione, mantenere un'adeguata distanza tra la cervice e la vagina per evitare la cauterizzazione inutile su queste due strutture. Altrimenti, aumenta il rischio di necrosi del trapianto. NOTA: La maggior parte delle manipolazioni chirurgiche dovrebbe interessare la vescica. Ritrarre o tirare la vescica caudalmente con un morsetto vascolare (vedere la tabella dei materiali) per ottenere una migliore visione dell'excavatio vesicouterina.</li>
		<li>Cauterizzare e recidere i vasi uterini discendenti a livello dell'uretere il più distale possibile alla cervice. NOTA: Mantenere la microcircolazione intorno alla vagina e alla cervice il più possibile durante la divisione.</li>
		<li>Separare la porzione cervicale/vaginale del futuro innesto dall'attacco rettale e dai legamenti paravaginali e paracervicali. NOTA: Evitare qualsiasi cauterizzazione sulla vagina dell'innesto.</li>
		<li>Sezionare attentamente la vagina tramite diatermia intorno a 2-3 mm caudale della cervice. NOTA: Nessun villi (cervice) è visibile all'interno del lume vaginale.</li>
		<li>Localizzare sia l'arteria uterina che la vena alle loro origini. Ligate (poliammide 8/0; vedi Tabella dei materiali), cauterizzare e recidere i vasi glutei e tutti i vasi caudali dei vasi uterini. NOTA: La legatura diretta della vena iliaca caudale comune alla vena uterina è solitamente possibile.</li>
		<li>Con la dissezione smussata, liberare i vasi iliaci comuni l'uno dall'altro, dalla biforcazione dell'aorta e della vena cava fino alla divisione dei vasi uterini. NOTA: Si può ottenere un migliore accesso chirurgico all'area rimuovendo uno o due linfonodi adiacenti.</li>
		<li>Asportare il corno uterino destro a 3 mm dalla tuba di Falloppio, dopo aver cauterizzato il peduncolo utero-ovarico allo stesso livello. Ciò consente l'anastomosi del corno uterino innesto nella parte superiore del corno uterino ricevente.</li>
		<li>Posizionare le legature (poliammide 8/0) direttamente attorno all'arteria iliaca e alla vena comune destra, prossimali alle biforcazioni aortica e cavale. Fare una piccola incisione (0,5-1 mm) nell'arteria iliaca comune destra adiacente alla biforcazione e inserire un ago da 30 G piegato e smussato o un ago dritto e smussato da 25 G nel lume (per il lavaggio). Fissarlo con una legatura (poliammide 6/0). NOTA: Un'ulteriore opzione è il fissaggio aggiuntivo con un morsetto bulldog per evitare lo spostamento dell'ago e/o del vaso.</li>
		<li>Sezionare la vena iliaca comune caudalmente della legatura nella vena iliaca comune destra per consentire il deflusso durante il lavaggio.</li>
	</ol></li>
	<li>Lavare l'innesto seguendo i passaggi seguenti.<ol><li>Lavare manualmente l'utero utilizzando siringhe da 3 ml con circa 9 ml di soluzione fredda di Ringer (RHX: Ringer integrato con 50 UI/mL di eparina e 0,4 mg/mL di xilazina) ad una velocità di flusso di 6 ml/min. Sciacquare nuovamente con 6 mL di soluzione per la conservazione degli organi integrata con eparina (50 UI/ml) e xilazina (0,4 mg/ml) (vedere Tabella dei materiali). NOTA: Evitare un'elevata pressione di lavaggio e garantire il corretto posizionamento dell'ago.</li>
		<li>Rimuovere il trapianto quando il tessuto uterino è diventato pallido. Tagliare l'arteria iliaca comune caudalmente della legatura alla biforcazione dell'aorta addominale.</li>
	</ol></li>
	<li>Posizionare il trapianto in una soluzione refrigerata per la conservazione degli organi (4 °C) per la preparazione e la conservazione della tavola posteriore prima del trapianto.</li>
	<li>Dopo aver rimosso l'innesto, eutanasia l'animale ruotando prima l'impostazione dell'isoflurano al massimo e quindi inducendo il pneumotorace bilaterale seguito dal dissanguamento17.</li>
</ol>2. Trapianto di utero singeneico
NOTA: Per i dettagli sulla procedura, consultare le relazioni 12,13,15 pubblicate in precedenza.
<ol><li>Indurre l'anestesia e preparare l'animale come indicato al punto 1.1.<ol><li>Somministrare analgesia efficace (come descritto al punto 1.1.1) e 200 UI/kg di eparina ad alto peso molecolare 30 minuti prima dell'intervento.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire laparotomia mediana.<ol><li>Aprire l'addome attraverso un'incisione della linea mediana lunga 6-8 cm a partire da 0,5 cm sotto lo xifisno verso l'ipogastrio. Utilizzare un bisturi n. 10 per l'incisione cutanea e piccole forbici affilate per l'incisione linea alba. Non danneggiare il fegato e la vescica.</li>
		<li>Spostare l'intestino tenue all'esterno della cavità addominale usando tamponi di cotone, avvolgerli con una garza inumidita sterile e coprirli con un sacchetto di plastica sterile per un migliore isolamento.</li>
		<li>Inserire divaricatori o clip nelle cartelle della parete addominale sinistra e destra per mantenere il muscolo peritoneale da parte e l'addome aperto, per ottenere un accesso e una visibilità ottimali dell'utero e dei vasi associati. Fissare le clip/riavvolgitori con dei nastri.</li>
		<li>Applicare soluzione salina preriscaldata per mantenere umida la zona chirurgica e l'intestino ed evitare l'essiccazione dei visceri.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire un'isterectomia con dissezione e mobilizzazione del terzo superiore della vagina dal retto e dalla vescica.<ol><li>Cauterizzare la microvascolarizzazione intorno all'utero, alla cervice e alla vagina. Tagliare e separare l'utero dalle strutture circostanti vicino all'organo per proteggere la microcircolazione del sinistro uterino.</li>
		<li>Rimuovere il tessuto adiposo dall'ambiente circostante.</li>
		<li>Amputare il corno sinistro mediante cauterizzazione. Sul lato destro, conservare un segmento di 7-8 mm della parte superiore dell'utero per la successiva anastomosi all'innesto uterino.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire il trapianto di utero.<ol><li>Mobilitare e separare i giusti vasi iliaci comuni, dall'origine dei vasi uterini fino alla biforcazione aortica/cavale.</li>
		<li>Posizionare l'innesto nella cavità addominale. Avvolgere l'innesto in una garza imbevuta di soluzione di conservazione dell'organo freddo. NOTA: L'innesto deve essere mantenuto freddo durante l'anastomosi.</li>
		<li>Posizionare morsetti vascolari atraumatici sulla vena iliaca comune destra su ciascun lato, inquadrando il futuro sito di anastomosi. NOTA: Abbassare l'anestesia a 1-1,5 vol% isoflurano per adattarsi all'improvvisa diminuzione del precarico cardiaco e alla conseguente ipotensione.</li>
		<li>Tagliare una fessura leggermente più grande dell'apertura della vena dell'innesto nella vena iliaca comune.</li>
		<li>Posizionare la vena dell'innesto.</li>
		<li>Posizionare una sutura di sospensione (poliammide 10/0; vedi Tabella dei materiali) in ciascun angolo della fessura sulla vena iliaca comune destra. NOTA: Tenere il nodo di sutura allentato nell'angolo caudale per una migliore regolazione e per evitare effetti di corde della borsa.</li>
		<li>Lavare regolarmente l'area di anastomosi con RHX raffreddato durante la procedura per prevenire trombosi.</li>
		<li>Anastomosi un lato della vena dell'innesto nella vena del ricevente con sei-otto anelli di una sutura continua (Figura 1). NOTA: Iniziare con la sutura cranica (poliammide 10/0) e prima anastomizzare la parte in entrata dei vasi.</li>
		<li>Anastomosi l'altro lato della nave allo stesso modo, questa volta partendo dall'esterno.</li>
		<li>Legare un nodo alla sutura cranica, e poi uno alla sutura di soggiorno caudale (poliammide 10/0), dopo aver terminato le anastomosi su entrambi i lati. NOTA: Stringere le suture continue solo quanto necessario per evitare effetti di corda della borsa.</li>
		<li>Posizionare morsetti vascolari atraumatici sull'arteria iliaca comune destra su ciascun lato, inquadrando il futuro sito di anastomosi.</li>
		<li>Eseguire l'anastomosi arteriosa (arteria iliaca comune destra [RCIA] tramite 8-10 anelli utilizzando suture interrotte (poliammide 10/0). NOTA: Le suture interrotte sono più facili da controllare rispetto a quelle continue (opzionali con la tecnica "bocca di pesce")18. Il lavaggio costante dell'area di anastomosi con RHX raffreddato durante la procedura aiuta a prevenire le trombosi. Quando si utilizzano suture continue, eseguire questo passaggio analogo all'anastomosi venosa.</li>
	</ol></li>
	<li>Eseguire la riperfusione dell'innesto.<ol><li>Quando entrambi i siti di anastomosi appaiono evidenti e qualsiasi sanguinamento viene fermato, rilasciare i morsetti vascolari sui vasi dell'innesto (Figura 2).</li>
		<li>Ispezionare l'innesto per segni di riperfusione, come arrossamento, riempimento della vena o pulsazione nell'arteria dell'innesto.</li>
		<li>Collegare il bracciale vaginale del trapianto alla volta vaginale della ricevente utilizzando da sei a sette suture interrotte intraluminali (poliglactina 6/0). NOTA: Iniziare con una singola sutura a ore 12 e posizionare prima quelle successive nelle posizioni a ore 10 e 1. Le due suture a ore 9 e 3 dovrebbero essere legate dopo le suture in prima fila19,20.</li>
		<li>Anastomosi il corno uterino dell'innesto end-to-end al segmento uterino cranico rimanente dell'utero ricevente utilizzando da cinque a sette suture interrotte (poliammide 7/0). NOTA: Non cucire attraverso il lume.</li>
	</ol></li>
	<li>Chiudere l'addome con una sutura continua. Utilizzare poliglactina 4/0 per suturare lo strato muscolare e poliammide 6/0 o clip per ferite chirurgiche per la pelle.</li>
	<li>Lascia che l'animale si riprenda in una gabbia riscaldata una volta completato il trapianto. Rimanere con l'animale fino a quando non ha riacquistato la capacità di sdraiarsi sternale e mantenere un alloggiamento singolo fino al suo completo recupero. Fornire un trattamento di analgesia psotopertativa somministrando per via sottocutanea buprenorfina (0,05 mg/kg) e FANS adatti, tuttavia non prima di 4-8 ore dopo la prima dose di anestesia. Fornire continuamente buprenorfina attraverso l'acqua potabile (1 mg/kg, orale, 5 mL di buprenorfina in 160 mL di acqua potabile (0,3 mg/ml)) per tre giorni dopo l'intervento.</li>
	<li>La sutura della pelle viene rimossa 10-14 giorni dopo la sicurezza.</li>
</ol>

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<li>Tilney, N. L., Guttmann, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+initial+ischemia%2Freperfusion+injury+on+the+transplanted+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of initial ischemia/reperfusion injury on the transplanted kidney.</a> Transplantation. 64 (7), 945-947 (1997).</li>
<li>de Rougemont, O., Dutkowski, P., Clavien, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+modulation+of+liver+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biological modulation of liver ischemia-reperfusion injury.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 15 (2), 183-189 (2010).</li>
<li>Jakubauskiene, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relaxin+and+erythropoietin+significantly+reduce+uterine+tissue+damage+during+experimental+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Relaxin and erythropoietin significantly reduce uterine tissue damage during experimental ischemia-reperfusion injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (13), 7120(2022).</li>
<li>Wang, Y., Wu, Y., Peng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+inhibits+the+inflammatory+response+and+oxidative+stress+induced+by+uterine+ischemia+reperfusion+injury+by+activating+PI3K-AKT+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Resveratrol inhibits the inflammatory response and oxidative stress induced by uterine ischemia reperfusion injury by activating PI3K-AKT pathway.</a> PLoS One. 17 (6), 0266961(2022).</li>
<li>Kisu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+for+donors+in+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">Risks for donors in uterus transplantation.</a> Reproductive Sciences. 20 (12), 1406-1415 (2013).</li>
<li>Jones, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+transplantation+in+transgender+women%5BTitle%5D)+AND+%22BJOG%3A+an+International+Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology%22%5BJournal%5D)">Uterine transplantation in transgender women.</a> BJOG: an International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 126 (2), 152-156 (2019).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.

Il protocollo qui presentato offre istruzioni dettagliate per l'approccio chirurgico alla base del trapianto di utero nei ratti. Il protocollo è stato ottimizzato per aumentare le probabilità di nascite vive dopo UTx e successivo accoppiamento. Il protocollo originale è stato ripreso dal gruppo Brännström 12,13, ispirato al lavoro sui topi di Akouri et al.10, e modificato in base alle esperienze degli autori negli ultimi anni. In quanto ta...

Il trapianto uterino (UTx) è un nuovo trattamento per l'infertilità assoluta del fattore uterino (AUFI). L'AUFI deriva da un'assenza (congenita o acquisita) o da una malformazione dell'utero e colpisce il 3%-5% delle donne in tutto il mondo1. Ragioni etiche, legali o religiose escludono l'adozione o la maternità surrogata per molte donne che hanno un desiderio di maternità ma soffrono di AUFI2. Per queste donne, UTx rimane l'unica opzione per iniziare la propria famiglia. UTx è stato applicato in clinica, anche se con successo misto; La procedura è tecnicamente impegnativa e richiede un miglioramento costante per il suo stabilimento clinico.
Nel 2014, il primo trapianto di utero da un donatore vivente (LD), con conseguente gravidanza di successo, è stato eseguito dal pionieristico gruppo svedese di Brännström3. La prima nascita dopo UTx da un donatore deceduto (DD) è stata segnalata nel 2016 in Brasile4. Entro il 2021, più di 80 UTx sono stati eseguiti in tutto il mondo, tuttavia con un tasso di successo di circa il 50% e con innesti provenienti da LD per la maggior parte1.
Sebbene non salvi la vita, UTx è una procedura sempre più popolare per soddisfare i desideri della propria progenie. Pertanto, la domanda di innesti sta aumentando, ponendo la donazione DD in un focus futuro. Tuttavia, la donazione di DD è complicata a causa di esposizioni ischemiche notevolmente più lunghe al freddo (e nel caso di morte cardiaca, anche a caldo), aumentando i rischi di disfunzione e rigetto del trapianto 5,6. La tecnica chirurgica, la corrispondenza di compatibilità richiesta e l'immunosoppressione associata rimangono problemi critici per quanto riguarda gli esiti UTx7.
Per gestire i rischi di cui sopra nella clinica, sono necessari modelli animali appropriati per l'esplorazione dell'ischemia e dell'immunosoppressione. L'endpoint clinicamente più rilevante per i modelli animali rimane la nascita positiva; ad oggi, gravidanze a seguito di UTx sperimentale sono state raggiunte in topi, ratti, pecore, conigli e scimmie cynomolgus8. Mentre gli animali più grandi sono predestinati all'acquisizione e all'ottimizzazione delle tecniche chirurgiche, i roditori hanno il netto vantaggio di brevi periodi di gestazione. Pertanto, i modelli di roditori sono superiori per quanto riguarda le considerazioni pratiche, finanziarie ed etiche9. Tuttavia, la sfida principale di UTx nei topi è la piccola anatomia, con la chirurgia altamente impegnativa legata alla bassa riproducibilità di UTx10 murino. Al contrario, i ratti sono chirurgicamente più accessibili e conservano i vantaggi di brevi tempi di gestazione. Come tale, il ratto è diventato il modello di scelta per UTx9. Wranning et al. hanno introdotto il modello di ratto di UTx ortotopico nel 2008, e utilizzando questo modello, il primo parto vivo dopo UTx e accoppiamento naturale è stato riportato11,12,13. Studi successivi hanno avuto contributi critici all'implementazione di UTx negli esseri umani9.
Tuttavia, UTx rimane impegnativo nei ratti e solo pochi gruppi hanno ancora padroneggiato questa tecnica chirurgica. Un ostacolo rilevante alla diffusione dell'UTx nel ratto tra i ricercatori è la mancanza di una descrizione precisa delle singole fasi microchirurgiche, delle insidie e delle misure appropriate per la risoluzione dei problemi14. Questo protocollo mira a fornire una guida dettagliata per questa procedura microchirurgica altamente complessa per facilitare l'implementazione di questo modello animale nella ricerca futura.

<table><tbody><tr><td>Forbice angolata su laterale 5 mm</td><td>F.S.T</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Graffetta grande</td><td>No specifico</td><td></td><td>Usato come divaricatore</td></tr><tr><td>Ago per piega smussata G30</td><td>Unimed S.A.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaina 0,5%</td><td>Sintetica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg/mL</td><td>Temgesic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dosiernadel G25</td><td>H.SIGRIST& PARTNER AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF Pinze</td><td>F.S.T</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10/0</td><td>Ethicon</td><td>2810G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 6/0</td><td>Ethicon</td><td>667H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 7/0</td><td>Ethicon</td><td>EH7446H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8/0</td><td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Femal Brown Norway Rats (150-170 g)</td><td>Janvier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ratti Lewis femmina (150-170 g)</td><td>Charles River Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici fini - Sharp</td><td>F.S.T</td><td>14060-09</td><td>Qualsiasi altra piccola forbice funziona troppo</td></tr><tr><td>Halsey Micro Needle Holder</td><td>F.S.T</td><td>12500-12</td><td>Qualsiasi altro piccolo needholder funziona troppo</td></tr><tr><td>Heparin Natrium 25000 I.E./ 5 mL</td><td>B. Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Institute Georges Lopez Perfusion Solution ( IGL)</td><td>Institute Georges Lopez</td><td></td><td>Soluzione per la conservazione degli organi&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Ratti Lewis maschi (300-320 g)</td><td>Charles River Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro Serrefines 13 mm</td><td>F.S.T</td><td>18055-04&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Micro Serrefines 16 mm gebogen</td><td>F.S.T</td><td>18055-06</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Serrefine Applicatore a morsetto con serratura&nbsp; &nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>18056-14&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>M&ouml; lnlyncke Op asciugamano</td><td>M&ouml; lnlyncke</td><td>800300</td><td>Telo sterile</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octenisept</td><td>Sch&uuml; lke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nastro di carta</td><td>Tesa</td><td></td><td>Per fissare l'animale</td></tr><tr><td>Philips Avent Schneller Flaschenw&auml; rmer SCF358/02</td><td>Philips</td><td>12824216</td><td></td></tr><tr><td>Ringerfundin</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun 2%</td><td>Bayer</td><td></td><td>Xylazine</td></tr><tr><td>Portaaghi con manico rotondo</td><td>F.S.T</td><td>12075-12</td><td></td></tr><tr><td>Portaaghi con manico rotondo</td><td>FST</td><td>12075-12</td><td></td></tr><tr><td>S & Pinza dilatatrice per vasi a T - Angolata 45 gradi</td><td>F.S.T</td><td>00276-13</td><td></td></tr><tr><td>Sacryl Naht</td><td>KRUUSE</td><td>152575</td><td></td></tr><tr><td>Scapel No 10</td><td>Swann Morton</td><td>201</td><td></td></tr><tr><td>Small Histo-Container</td><td>Qualsiasi piccolo histo-container</td><td></td><td></td> funziona bene per la conservazione a freddo dell'innesto</tr><tr><td>Piccoli sacchetti di plastica Plastik Qualsiasi</td><td></td><td></td><td>sacchetto di plastica trasparente va bene</td></tr><tr><td>Steril Cotton fioc</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td></td><td>Qualsiasi batuffolo di cotone sterillo va bene</td></tr><tr><td>Garza sterile</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td></td><td>Qualsiasi garza sterile va bene</td></tr><tr><td>Forbice dritta 8mm</td><td>F.S.T</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio operatorio - ndash; SZX9</td><td>Olympus</td><td>OLY-SZX9-B</td><td></td></tr><tr><td>Sutter Antiaderente GLISS 0,4 mm</td><td>Sutter</td><td>78 01 69 SLS</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per legatura di sutura&nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>00272-13</td><td></td></tr><tr><td>Tappetino riscaldante ThermoLux</td> Pinze per <td>tessuti ThermoLux</td><td></td><td></td></tr><tr><td>per pelle</td><td></td><td></td><td>Tutte le pinze per tessuti vanno bene</td></tr><tr><td>Pinze per dilatatori per vasi</td><td>F.S.T</td><td>00125-11</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl più 4/0</td><td>Ethicon</td><td>VCP292H</td><td></td></tr></tbody></table>

approccio chirurgico, sfide e risoluzioni per il trapianto di utero nei ratti

Surgical Approach, Challenges, and Resolutions for Uterus Transplantation in Rats

Il trapianto uterino (UTx) è un nuovo approccio per il trattamento delle donne con infertilità assoluta del fattore uterino (AUFI). Si stima che il 3% -5% delle donne soffra di AUFI. Queste donne sono state private della possibilità di avere figli fino all'avvento di UTx. L'applicazione clinica di UTx è stata guidata da studi sperimentali su animali e il primo UTx di successo è stato raggiunto nei ratti. Date le loro caratteristiche fisiologiche, immunologiche, genetiche e riproduttive, i ratti sono un sistema modello adatto per tali trapianti. In particolare, il loro breve periodo di gestazione è un chiaro vantaggio, poiché l'endpoint abituale dell'UTx sperimentale è la gravidanza di successo con parto vivo. La sfida più grande per i modelli di ratto rimane la piccola anatomia, che richiede competenze microchirurgiche avanzate ed esperienza. Sebbene UTx abbia portato alla gravidanza in clinica, la procedura non è stabilita e richiede una continua ottimizzazione sperimentale. Qui viene presentato un protocollo dettagliato, inclusa la risoluzione dei problemi essenziali per il ratto UTx, che dovrebbe rendere l'intera procedura più facile da comprendere per coloro che non hanno esperienza in questo tipo di microchirurgia.

Vengono presentati i risultati di due gruppi di ratti. UTx è stato effettuato prima (gruppo 1, n = 8) e dopo (gruppo 2, n = 8) aggiustamento del protocollo (Tabella 1) per dimostrare gli effetti delle nostre modifiche (si veda la Discussione per una spiegazione delle nostre modifiche)12,15,21.
L'esito dell'UTx del ratto è associato a tre fasi chiave. La prima fase è i...

Il presente protocollo descrive tutti i passaggi essenziali per il successo del trapianto uterino (UTx) nei ratti. Il modello di ratto si è dimostrato adatto a promuovere l'implementazione clinica di UTx; tuttavia, rat UTx è una procedura molto complessa che richiede istruzioni accurate.

Approccio chirurgico, sfide e risoluzioni per il trapianto di utero nei ratti

Uterine transplantation (UTx) is a new approach for treating women with absolute uterine factor infertility (AUFI). An estimated 3%-5% of women suffer ...

Il trapianto di utero destro appartiene a una delle procedure microchirurgiche più complesse padroneggiate solo da pochi. Il nostro protocollo sposta il trapianto di utero destro da una fase sperimentale a una metodologia applicabile. Il nostro protocollo porta ad un alto tasso di nati vivi dopo il trapianto di utero.Presto promuoverà l'applicazione del trapianto di utero destro per la ricerca reale. Pazienza e resistenza sono tratti chiave durante l'intera procedura. Dopo aver eseguito una laparotomia mediana, su un ratto anestetizzato, raccogliere il corno uterino destro con la cavità uterina comune e la cervice insieme ai peduncoli vascolari.Cauterizzare la ferita e ligare il corno dell'utero sinistro con una sutura di poligalattina 4-0. Ora recidi il corno uterino sinistro adiacente alla ramificazione dalla cavità uterina comune. Separare la porzione cervicale e vaginale del futuro innesto dall'attacco rettale.Separare il futuro innesto dai legamenti paravaginali e paracervicali. Usando la diatermia, sezionare la vagina intorno a due o tre millimetri caudali della cervice. Individuare l'arteria uterina e le vene alle loro origini.Ligate tutte le navi caudali delle navi uterine con 8-0 posto in poliammide. Posto 8-0 legature poliammidiche direttamente intorno all'arteria iliaca comune destra e alla vena prossimale alle biforcazioni aortiche e cavali. Fare un'incisione lunga da 0,5 a un millimetro nell'arteria iliaca comune destra direttamente adiacente alla biforcazione.Inserire un ago dritto smussato da 25 gauge nel lume per eliminarlo. Fissare l'ago con una legatura in poliammide 6-0. Per consentire il deflusso durante il lavaggio, sezionare la vena iliaca comune caudale alla legatura nella vena iliaca comune destra.Utilizzando una siringa da tre millilitri, lavare l'utero con la soluzione fredda di Ringer, seguita da una soluzione di conservazione degli organi sia integrata con eparina e xilazina. Tagliare l'arteria iliaca caudale comune della legatura alla biforcazione dell'aorta addominale. Quindi, usando la dissezione smussata, recidere i vasi iliaci comuni dalla biforcazione della vena cava dell'aorta alla divisione dei vasi uterini.E rimuovere il trapianto quando il tessuto uterino diventa pallido. Posizionare il trapianto nella soluzione di conservazione dell'organo freddo per facilitare la preparazione e la conservazione del tavolo posteriore prima del trapianto. Dopo aver posizionato l'innesto nella cavità addominale e posizionato la vena dell'innesto, posizionare una sutura di mantenimento in poliammide 10-0 nell'angolo cranico e una sutura sciolta nell'angolo caudale della fessura sulla vena iliaca comune destra.Anastomosi un lato della vena dell'innesto nella vena del ricevente usando da sei a otto anelli di una sutura continua. Allo stesso modo, anastomosi l'altro lato della nave partendo dall'esterno. Quindi, utilizzando la poliammide 10-0, legare un nodo alla sutura cranica e un altro nodo alla sutura caudale.Eseguire l'anastomosi arteriosa utilizzando 10-0 suture interrotte in poliammide all'arteria iliaca comune destra con otto-10 anelli. Per iniziare la perfusione dell'innesto, quando i siti appaiono evidenti, rilasciare i morsetti vascolari sui vasi dell'innesto e controllare l'innesto per segni di riperfusione. Collegare il bracciale vaginale del trapianto alla volta vaginale utilizzando da sei a sette punti di sutura interrotti di poligalattina 6-0.Utilizzando da cinque a sette suture interrotte in poliammide 7-0, anastomosi il grafico del corno uterino da un capo all'altro del segmento uterino cranico ricevente. Monitorare l'operazione post ratto. Dopo il trapianto uterino, due ratti del Gruppo 1 hanno mostrato segni di gravidanza.Tuttavia, l'esame ha rivelato utero dilatato, suggerendo che i cuccioli si sono sviluppati normalmente, ma i ratti non sono riusciti a consegnare i cuccioli. L'esame istologico nei feti ha mostrato che i cuccioli si sono sviluppati fino al parto. Cinque ratti del gruppo 2 hanno mostrato una gravidanza con tre che hanno dato alla luce cuccioli.La femmina di Lewis ha partorito due volte. Tutti i cuccioli della prima cucciolata sono sopravvissuti mentre solo due dei tre cuccioli della seconda cucciolata sono sopravvissuti. La femmina norvegese marrone ha anche partorito due volte e tutti i cuccioli sopravvissuti hanno mostrato uno sviluppo normale.L'adattamento del protocollo ha migliorato sia gli esiti chirurgici diretti che il tasso di nascite vive dopo il trapianto uterino. Ha aumentato il tasso di sopravvivenza del trapianto a due settimane dal 50% nel Gruppo 1 al 75% nel Gruppo 2. È importante mantenere il nodo di sutura allentato nell'angolo caudale per una migliore regolazione e per evitare effetti di corda increspata.Il trapianto di utero destro è particolarmente adatto per valutare approcci pre-trapianto che possono migliorare i risultati del trapianto di utero come la perfusione d'organo ipodermica ex vivo o altre tecniche per la mitigazione del danno d'organo. In generale, il trapianto di utero negli animali è stato ed è un must da introdurre per stabilire il trapianto di utero nella clinica.

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Vi presentiamo uno facile da stabilire revisione della classica due-bracciale tecnica di trapianto di fegato nel ratto.

Trapianto di fegato in ratti

Trapianto di fegato nei ratti è un modello sperimentale indispensabile per la ricerca biomedica. Qui vi presentiamo le nostre procedure chirurgiche per il trapianto ortotopico di fegato di ratto con la ricostruzione arteriosa epatica con un trapianto parziale del 50%.

Procedure chirurgiche per un modello di Rat parziale trapianto di fegato con la ricostruzione arteriosa epatica

La ricostruzione della vena cava suprahepatic (SHVC) rimane un passo difficile nel trapianto orthotopic del fegato del ratto. In questo articolo, vi mostriamo un protocollo passo-passo per la ricostruzione di SHVC in ratti facendo uso di una tecnica di anastomosi magnetico romanzo.

Un modello del ratto di orthotopic del trapianto del fegato usando una tecnica novella dell'anastomosi magnetico per la ricostruzione della Vena Cava Suprahepatic

Lo scopo di questo manoscritto e protocollo è quello di spiegare e dimostrare in dettaglio la procedura chirurgica del trapianto di rene ortotopico nei ratti. Questo metodo è semplificato per ottenere la corretta perfusione del rene donatore e abbreviare il tempo di riperfusione utilizzando la tecnica di anastomosi del polsino venoso e ureterale.

Trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato

Questo protocollo descrive un metodo semplice ed efficiente per il trapianto di foglietti valvolari aortici sotto la capsula renale per consentire lo studio dell'alloreattività delle valvole cardiache.

Un modello semplificato per il trapianto di valvole cardiache eterotopiche nei roditori

Il modello di trapianto renale ortotopico di ratto contribuisce a studiare il meccanismo di rigetto dell'allotrapianto renale. Il modello attuale aumenta la sopravvivenza dei riceventi senza interferenze con l'afflusso di sangue e il reflusso venoso della parte inferiore del corpo utilizzando un'anastomosi end-to-end dell'impianto renale e un metodo "tunnel" end-to-side di anastomosi uretere-vescica.

Un modello di trapianto renale ortotopico di ratto per il rigetto dell'allotrapianto renale

Il prolasso degli organi pelvici colpisce milioni di donne in tutto il mondo e tuttavia alcuni interventi chirurgici comuni hanno tassi di fallimento fino al 40%. La mancanza di modelli animali standard per studiare questa condizione impedisce il progresso. Proponiamo il seguente protocollo come modello per la sospensione del legamento uterosacrale e il test di trazione in vivo .

Sviluppo di un modello di ratto di sospensione del legamento uterosacrale

Questo lavoro presenta un modello animale di fibrosi indotta da transizione endoteliale a mesenchimale, come si vede nei difetti cardiaci congeniti come la stenosi aortica critica o la sindrome del cuore sinistro ipoplasico, che consente una valutazione istologica dettagliata del tessuto, l'identificazione delle vie di segnalazione regolatorie e la verifica delle opzioni di trattamento.

Un modello di trapianto di cuore di ratto eterotopico neonatale per lo studio della transizione da endoteliale a mesenchimale

Qui, presentiamo un protocollo per isolare e coltivare cellule staminali epiteliali endometriali di ratto (reESC), generando organoidi endometriali di ratto. Questo metodo facilita gli studi in vitro delle malattie dell'endometrio, consentendo l'editing genetico e altre manipolazioni cellulari.

Generazione e caratterizzazione di organoidi dell'utero di ratto da cellule staminali epiteliali dell'endometrio di ratto

Questo protocollo descrive una tecnica migliorata per il trapianto ortotopico di polmone sinistro nei ratti, concentrandosi sulla riduzione della difficoltà operativa e sul miglioramento dei tassi di sopravvivenza.

Trapianto ortotopico di polmone sinistro nei ratti

Impara il trapianto di utero destro nei ratti, una procedura microchirurgica complessa che migliora i tassi di nascite vive. Questo protocollo dettagliato facilita l'applicazione della ricerca alla clinica.

Approccio chirurgico, sfide e risoluzioni per il trapianto di utero nei ratti

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