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Isolamento simultaneo dei principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale da to...
Isolamento simultaneo dei principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale da to...
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Neuroscience
This content is Free Access.
JoVE Journal Neuroscience
Simultaneous Isolation of Principal Central Nervous System-Resident Cell Types from Adult Autoimmune Encephalomyelitis Mice

Isolamento simultaneo dei principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale da topi adulti con encefalomielite autoimmune

Full Text
2,419 Views
08:49 min
October 6, 2023

DOI: 10.3791/65735-v

Christina B. Schroeter*1, Antonia Henes*1, Anna Vogelsang1, Alexander M. Herrmann1, Stefanie Lichtenberg1, Derya Cengiz1, Vera Dobelmann1, Niklas Huntemann1, Christopher Nelke1, Susann Eichler2, Philipp Albrecht1, Sven G. Meuth*1, Tobias Ruck1

1Department of Neurology, Medical Faculty,Heinrich Heine University Duesseldorf, 2Department of Neurology, Institute of Translational Neurology,University Hospital Muenster

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a novel protocol for the simultaneous isolation of all principal central nervous system (CNS) resident cell types from a single mouse, applicable in both naïve and experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) models. This method aims to address the limitations of current cell isolation technologies, allowing researchers to investigate complex cellular interactions during neuroinflammation while minimizing the number of mice used.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Autoimmunity Research

Background

  • Existing protocols often focus on a single cell type or only postnatal mice.
  • The isolation of CNS-resident cells can significantly enhance our understanding of neuroinflammatory processes.
  • The need for a comprehensive and reproducible protocol for cell isolation is increasingly important in the context of autoimmune diseases.

Purpose of Study

  • To develop a reliable protocol for the isolation of all major CNS-resident cell types from one mouse.
  • To facilitate the analysis of cellular networks in health and disease.
  • To enable more accurate studies of inflammatory pathways in neuroinflammation.

Methods Used

  • The study utilizes a cell dissociation method applicable to both healthy and EAE mice.
  • Mice are positioned supine, with a detailed, stepwise dissection protocol to obtain brain and spinal cord tissue.
  • Cell precipitation, washing, and purification protocols are meticulously described, ensuring high yields of CNS cell types.

Main Results

  • The protocol facilitates the simultaneous isolation of microglia, oligodendrocytes, and other CNS-resident cell types for downstream analyses.
  • This method is expected to provide insights into cellular dynamics across different stages of EAE.
  • Critical improvements include reduced animal usage and enhanced data quality from single-mouse CNS preparations.

Conclusions

  • This study demonstrates a novel cell isolation technique that enhances research capabilities in neuroimmunology.
  • The method's ability to analyze complex biomolecular mechanisms from fewer samples presents significant implications for studying CNS disease models.
  • Overall, the protocol can aid in answering key questions regarding neuroinflammation and therapeutic interventions in autoimmune conditions.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of this new protocol?
This protocol allows for the simultaneous isolation of multiple CNS cell types from a single mouse, enhancing data quality while reducing the number of animals needed for research.
How is the cell isolation performed?
The cell isolation involves a detailed dissection of the brain and spinal cord, followed by enzymatic digestion and centrifugation to obtain a high-quality cell suspension.
What types of cells can be isolated using this method?
All four major CNS-resident cell types, including microglia and oligodendrocytes, can be simultaneously isolated and analyzed.
Can this protocol be applied to other models?
Yes, it is applicable to both naïve and EAE mice, allowing broader applications in autoimmune research.
What insights can this protocol provide?
It enables investigations into dynamic cellular interactions and inflammatory pathways during the disease process, offering a comprehensive view of CNS conditions.
Are there any limitations to this method?
While the protocol significantly reduces the number of animals required, it still relies on the handling and dissection of live animals, which may introduce variability.

Ad oggi, i protocolli per l'isolamento simultaneo di tutti i principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale dallo stesso topo sono una richiesta insoddisfatta. Il protocollo mostra una procedura applicabile nei topi con encefalomielite autoimmune naïve e sperimentale per studiare reti cellulari complesse durante la neuroinfiammazione e contemporaneamente ridurre il numero di topi richiesti.

Per studiare i meccanismi molecolari e cellulari nelle malattie autoimmuni come la sclerosi multipla, la generazione di protocolli di isolamento cellulare riproducibili e sofisticati è un'esigenza insoddisfatta. La maggior parte delle attuali tecnologie per isolare e analizzare le cellule residenti nel SNC mostrano gravi carenze, come concentrarsi su un solo tipo di cellula o solo sui topi postnatali. L'attuale protocollo per l'isolamento simultaneo di tutti i principali tipi di cellule residenti nel SNC da una replica del SNC offre la possibilità di analizzare reti neuronali complesse e nuove vie infiammatorie, ex vivo da una singola sospensione cellulare, applicabili a topi sani e a quelli con encefalomielite autoimmune sperimentale.

Inoltre, il numero di topi è diminuito Il nostro protocollo per l'isolamento simultaneo di tutti e quattro i principali tipi di cellule residenti nel SNC in topi sani e EAE potrebbe essere utilizzato come strumento utile per i gruppi di ricerca che studiano nuove vie infiammatorie, consentendo un'analisi molto più accurata di meccanismi biomolecolari complessi e reti cellulari ex vivo. Le nuove domande scientifiche a cui si potrebbe rispondere con l'aiuto del nostro protocollo sono le indagini dinamiche nell'EAE durante le diverse fasi del decorso della malattia, come la neuroinfiammazione, la neurodegenerazione e la remissione. Inoltre, le interazioni cellula-cellula e i percorsi biochimici potrebbero essere studiati a livello individuale.

Allo stesso modo, i saggi funzionali potrebbero essere eseguiti con cellule coltivate. Intendiamo concentrarci sugli studi dinamici del corso EAE per l'analisi multi-omica da un singolo omogenato del SNC per punto temporale EAE.

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