Name: Un modello murino immunocompetente per la terapia termica interstiziale laser del glioblastoma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Scopri la terapia termica interstiziale laser per il trattamento del glioblastoma inoperabile utilizzando modelli murini immunocompetenti. Questo metodo permette di valutare l'efficacia del trattamento termico sul tumore cerebrale.

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<ol><li>Canadian Cancer Society. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+2023%22">Cancer Statistics 2023</a>. , Canadian Cancer Statistics Advisory Committee in collaboration with the Canadian Cancer Society, Statistics Canada and the Public Health Agency of Canada. Toronto, ON. http://cancer.ca/Canadian-Cancer-Statistics-2023-EN (2023).</li>
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<li>Carpentier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+thermal+therapy%3A+Real-time+MRI-guided+and+computer-controlled+procedures+for+metastatic+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg+Med%22%5BJournal%5D)">Laser thermal therapy: Real-time MRI-guided and computer-controlled procedures for metastatic brain tumors.</a> Lasers Surg Med. 43 (10), 943-950 (2011).</li>
<li>Haddad, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+glioblastoma+for+the+evaluation+of+novel+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Mouse models of glioblastoma for the evaluation of novel therapeutic strategies.</a> Neurooncol Adv. 3 (1), vdab100(2021).</li>
<li>Chokshi, C. R., Savage, N., Venugopal, C., Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patient-derived+xenograft+model+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A patient-derived xenograft model of glioblastoma.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100179(2020).</li>
<li>Alcaniz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinically+relevant+glioblastoma+patient-derived+xenograft+models+to+guide+drug+development+and+identify+molecular+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinically relevant glioblastoma patient-derived xenograft models to guide drug development and identify molecular signatures.</a> Front Oncol. 13, 1129627(2023).</li>
<li>Muir, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy+for+newly+diagnosed+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy for newly diagnosed glioblastoma.</a> Lasers Med Sci. 37 (3), 1811-1820 (2022).</li>
<li>Muir, M., Traylor, J. I., Gadot, R., Patel, R., Prabhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeat+laser+interstitial+thermal+therapy+for+recurrent+primary+and+metastatic+intracranial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Neurol+Int%22%5BJournal%5D)">Repeat laser interstitial thermal therapy for recurrent primary and metastatic intracranial tumors.</a> Surg Neurol Int. 13, 311(2022).</li>
<li>De Groot, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+laser+interstitial+thermal+therapy+%28LITT%29+for+newly+diagnosed+and+recurrent+IDH+wild-type+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Efficacy of laser interstitial thermal therapy (LITT) for newly diagnosed and recurrent IDH wild-type glioblastoma.</a> Neurooncol Adv. 4 (1), vdac040(2022).</li>
<li>Holste, K. G., Orringer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy.</a> Neurooncol Adv. 2 (1), vdz035(2020).</li>
<li>Leuthardt, E. C., Voigt, J., Kim, A. H., Sylvester, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-center+cost+analysis+of+treating+primary+and+metastatic+brain+cancers+with+either+brain+laser+interstitial+thermal+therapy+%28LITT%29+or+craniotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacoecon+Open%22%5BJournal%5D)">A single-center cost analysis of treating primary and metastatic brain cancers with either brain laser interstitial thermal therapy (LITT) or craniotomy.</a> Pharmacoecon Open. 1 (1), 53-63 (2017).</li>
<li>Bastos, D. C. D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+local+control+of+brain+metastasis+treated+with+laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Predictors of local control of brain metastasis treated with laser interstitial thermal therapy.</a> Neurosurgery. 87 (1), 112-122 (2020).</li>
<li>Darbinyan, A., Leelatian, N., Fomchenko, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+changes+associated+with+laser+interstitial+thermal+therapy+for+radiation+necrosis%3A+illustrative+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Case+Lessons%22%5BJournal%5D)">Histological changes associated with laser interstitial thermal therapy for radiation necrosis: illustrative cases.</a> J Neurosurg Case Lessons. 4 (1), CASE21373(2022).</li>
<li>Grant, G. A., Porter, B. E., Li, D., Barros Guinle, M. I., Kaur, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach%2C+complications%2C+and+outcomes+for+37+consecutive+pediatric+patients+undergoing+laser+ablation+for+medically+refractory+epilepsy+at+Stanford+Children%27s+Health%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Approach, complications, and outcomes for 37 consecutive pediatric patients undergoing laser ablation for medically refractory epilepsy at Stanford Children's Health.</a> J Neurosurg Pediatr. 33 (1), 1-11 (2023).</li>
<li>Ogasawara, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy+for+cerebral+cavernous+malformations%3A+A+systematic+review+of+indications%2C+safety%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy for cerebral cavernous malformations: A systematic review of indications, safety, and outcomes.</a> World Neurosurg. 166, 279-287.e1 (2022).</li>
<li>Satzer, D., Mahavadi, A., Lacy, M., Grant, J. E., Warnke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+laser+anterior+capsulotomy+for+obsessive-compulsive+disorder%3A+lesion+size+and+tractography+correlate+with+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Interstitial laser anterior capsulotomy for obsessive-compulsive disorder: lesion size and tractography correlate with outcome.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 93 (3), 317-323 (2022).</li>
<li>Salehi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+enhancement+of+blood-brain+and+blood-tumor+barriers+permeability+by+laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Therapeutic enhancement of blood-brain and blood-tumor barriers permeability by laser interstitial thermal therapy.</a> Neurooncol Adv. 2 (1), vdaa071(2020).</li>
<li>Navarro, K. L., Huss, M., Smith, J. C., Sharp, P., Marx, J. O., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR J. 62 (1-2), 238-273 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Lance di assorbimento</td><td>FST</td><td>18105-01</td><td>Spugne emostatiche.</td></tr><tr><td>Pinze tissutali Adson</td><td>FST</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 topi</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Ceppo #000664</td><td>Applicatori con punta in cotone maschio e femmina da 6 a 12 settimane</td></tr><tr><td>(6")</td><td>Microscopia elettronica</td><td>Scienze 72308</td><td></td></tr><tr><td>CT2A linea</td><td></td><td></td> cellulare di glioma <td>Generosamente donato dal Dr. Peter Fecci, Duke University.</td></tr><tr><td>Estratto di membrana basale a fattore di crescita ridotto Cultrex, PathClear</td><td>Biotechne, R& D systems</td><td>3433-010-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini a doppia camera&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1450003</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 2.0 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22363352</td><td></td></tr><tr><td>Alcool etilico anidro</td><td>Greenfield Global</td><td>P016EAAN</td><td>Diluire al 70% con ddH2O</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino, qualificato, Canada</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12483020</td><td></td></tr><tr><td>Glad Press-n-Seal</td><td>Amazon.ca</td><td></td><td></td>12587704417</tr><tr><td>Trapano ad alta velocità</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modello 1474</td><td></td></tr><tr><td>K & J Termometro a termocoppia</td><td>Omega</td><td>HH509R</td><td></td></tr><tr><td>Metacam (meloxicam)</td><td>WDDC</td><td>114424</td><td></td></tr><tr><td>Pompa a siringa per microiniezione</td><td>WPI</td><td>UMP3T-1</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da microlitro (serie 700)</td><td>Hamilton</td><td>87908</td> Sono <td>disponibili aghi personalizzati. Una smussatura ripida dell'ago aiuta con un'erogazione precisa e una lunghezza dell'ago più corta aiuta con la stabilità.</td></tr><tr><td>Cacciavite/Porta ago</td><td>FST</td><td>12500-12</td><td>Una punta fine è la più adatta a causa dello spazio di lavoro ristretto, ma molti stili sono adatti in base alle preferenze dell'impugnatura.</td></tr><tr><td>Unguento oftalmico Opixcare Plus</td><td>WDDC</td><td>135941</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (10x)</td><td>Bioreagenti Fisher</td><td>BP399-4</td><td>Diluire a 1x con ddH2O</td></tr><tr><td>Povidone-iodio</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>3955-16</td><td>Aliquat in tubi più piccoli da utilizzare con applicatori con punta in cotone.</td></tr><tr><td>Soluzione salina (normale)</td><td>WDDC</td><td>126588</td><td></td></tr><tr><td>bisturi, monouso (lama #15)</td><td>Feather</td><td>Feather NO15</td><td></td></tr><tr><td>Forbici, chirurgiche fini</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td>Forbici per studenti fini, Iris o Bonn sono tutte adatte.</td></tr><tr><td>Cornice stereotassica</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modello 940</td><td>Con console di visualizzazione digitale e mouse a cono e barre auricolari.</td></tr><tr><td>Porta siringa stereotassico</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modello 1772-F</td><td>Se non si utilizza una pompa di iniezione.</td></tr><tr><td>Suture (monofilamento 5-0)</td><td>Ethicon</td><td>MCP463G</td><td>Monofilamento viola monocryl con punta a taglio inverso</td></tr><tr><td>Siringa, 28 G&nbsp; (0,5 ml)&nbsp;</td><td>BD</td><td>BD 329461</td><td>Siringhe da insulina BD Lo-Dose U-100</td></tr><tr><td>TC20 Contatore cellulare automatizzato</td><td>BIO-RAD</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>Sonda a termocoppia, diametro fine (Tipo K)</td><td>Omega</td><td>TJM-CA316-IM025G-150</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%), rosso fenolo</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific 25200072</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetbond di 3M, colla per tessuti veterinari.</td><td>WDDC</td><td>126125</td><td></td></tr><tr><td>Wahl Peanut Clippers</td><td>WDDC/Wahl</td><td>100963</td><td>Disponibile anche direttamente dal produttore.</td></tr><tr><td>Cuscinetto riscaldante</td><td>Bensen Medical</td><td>70308/121873</td><td>È possibile utilizzare qualsiasi articolo simile.</td></tr><tr><td>Webcol Alcohol preps</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>71005-20</td><td>Salvietta per la preparazione di alcol, 2 strati, misura media.</td></tr></tbody></table>

un modello murino immunocompetente per la terapia termica interstiziale laser del glioblastoma

An Immunocompetent Murine Model for Laser Interstitial Thermal Therapy of Glioblastoma

Il successo dell'impianto di tumore CT2A e dei trattamenti LITT può essere caratterizzato utilizzando la risonanza magnetica pesata in T2, come mostrato nella Figura 4, Figura 5 e Figura 6. Le immagini RM sono state ottenute utilizzando un magnete superconduttore privo di criogeni 7T con un foro di 17 cm e una bobina di testa di topo in quadratura utilizzando i parametri di sequenza delineati nel protocollo di cui sopra. Un'attenta aderenza a questo metodo dovrebbe portare a tassi di prelievo che si avvicinano al 100%, a una localizzazione costante del tumore e alla formazione di tumori approssimativamente sferici, come dimostrato nella Figura 4. Queste caratteristiche forniscono una base ottimale per i successivi trattamenti LITT e per eventuali ulteriori analisi. Allo stesso modo, come si vede nella Figura 5, anche le ablazioni LITT dovrebbero essere coerenti sia nelle dimensioni che nella posizione. Il nucleo centrale del tessuto ablato sarà composto da necrosi coagulativa e liquefattiva e facilmente visualizzabile come ipo-intensità (cioè nero) sulla risonanza magnetica pesata in T2. Nei giorni immediatamente successivi al trattamento con LITT, è anche tipico, a seconda del trattamento LITT eseguito, vedere un'area iper-intensa (cioè bianca) all'interno e intorno alla lesione corrispondente a edema perioperatorio. La Figura 6 mostra un risultato insufficiente ed evidenzia alcune delle potenziali insidie durante l'esecuzione di questo protocollo.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig04.jpg"> 
Figura 4: Immagini RM coronali pesate in T2 della formazione ideale del tumore CT2A. Immagini rappresentative della formazione del tumore in tre topi C57BL/6 (A, B, C) a 12 giorni dopo l'impianto. Le frecce bianche indicano il bordo del tumore. Si noti la posizione coerente del tumore e la formazione approssimativamente sferica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig05.jpg"> 
Figura 5: Immagini RM coronali pesate in T2 dell'ablazione LITT ideale (1 giorno dopo LITT). Immagini rappresentative dell'ablazione tumorale LITT in tre topi C57BL/6 (A, B, C) a 13 giorni dopo l'impianto. Si noti la dimensione e la posizione costanti del nucleo della lesione necrotica. L'esecuzione di risonanze magnetiche pre-LITT e ablazioni LITT leggermente prima fornirebbe un migliore equilibrio tra le dimensioni ottimali del tumore per il targeting laser e la capacità di ottenere endpoint post-trattamento successivi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig06.jpg"> 
Figura 6: Immagini RM coronali pesate in T2 di trattamenti LITT pre-ottimizzati. Immagini di tre topi C57BL/6 (A, B, C) trattati con parametri laser e bersagli stereotassici identici prima dell'ottimizzazione del protocollo, come esempio di un risultato non ideale. Le frecce bianche indicano il bordo del tumore. Le aree delimitate mostrano la regione dell'edema. Si osserva una variabilità significativa, tra cui una crescita tumorale meno uniforme e uno scarso targeting dell'ablazione laser con conseguente danno tissutale incoerente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig06large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Un modello murino immunocompetente per la terapia termica interstiziale laser del glioblastoma

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and ...

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Impianto intracranico di GL261 cellule in C57BL / 6 topi produce gliomi maligni che ricapitolano molte delle caratteristiche del glioblastoma multiforme umano. Abbiamo usato GL261 cellule che esprimono stabilmente luciferasi per permetterci di...

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Descriviamo un metodo integrato per la precisione, l'impianto stereotassico di cellule umane di glioblastoma multiforme nel cervello di topi nudi e seriali...

Stereotassica impianto intracranico e<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent di xenotrapianti di tumori in un sistema modello del mouse di Glioblastoma Multiforme

Inizia con un modello murino di glioblastoma, un tumore cerebrale invasivo.Alla periferia del tumore, la barriera emato-encefalica (BBB) rimane intatta, con le cellule endoteliali che formano giunzioni strette che regolano l'ingresso molecolare.Il mouse è dotato di una fibra ottica montata sulla testa per fornire luce laser.Somministrare un laser a infrarossi a bassa intensità, che penetra nella pelle e nel cranio per raggiungere il cervello.Il laser eccita l'ossigeno molecolare nelle cellule...

Interruzione della barriera emato-encefalica indotta dal laser per la somministrazione di liposomi in un modello murino di glioblastoma

Fonte: Clark, A.J., et al. Imaging a bioluminescenza di un modello animale immunocompetente per il glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra l'imaging a bioluminescenza per monitorare la progressione del glioblastoma in un modello murino immunocompetente, utilizzando cellule tumorali che esprimono luciferasi e luciferina per quantificare la crescita tumorale in modo non invasivo.

Imaging a bioluminescenza di un modello murino immunocompetente per il glioblastoma

Abbiamo stabilito un modello glioblastoma ortotopico corticale nei topi per intravital microscopia a due fotoni che ricapitola i vincoli biofisici normalmente in gioco durante la crescita del tumore. Una finestra di vetro cronica sostituzione del cranio sopra il tumore consente il seguito della progressione tumorale nel tempo mediante microscopia a due fotoni.

Un ortotopico Glioblastoma modello di mouse mantenimento di vincoli Cervello parenchimale fisiche e adatto per intravitale due fotoni Microscopia

GL261 le cellule di glioma forniscono un utile modello animale immunocompetente di glioblastoma. Gli obiettivi di questo protocollo sono dimostrare tecniche adeguate per il monitoraggio della crescita tumorale intracranica utilizzando l'imaging in bioluminescenza in vivo e verificare l'utilità delle cellule GL261 modificate con luciferasi per lo studio dell'immunologia tumorale e degli approcci immunoterapeutici per il trattamento del glioblastoma.

Bioluminescenza Imaging di un Modello immunocompetenti Animal Glioblastoma

La microdissezione laser (LMD) è una tecnica sensibile e altamente riproducibile che può essere utilizzata per scoprire percorsi che mediano l'eterogeneità e l'invasione del glioma. Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per isolare le aree discrete dal tessuto glioma utilizzando LMD laser seguito da analisi trascrittomica.

Microdissezione di cattura laser delle sottoregioni del Glioma per la caratterizzazione spaziale e molecolare dell'eterogeneità intratutuale, dell'Oncoflusso e dell'invasione

Qui, descriviamo un modello murino ortotopico preclinico per GBM, stabilito mediante iniezione intracranica di cellule derivate da tumori modello murino geneticamente modificati. Questo modello mostra le caratteristiche della malattia del GBM umano. Per gli studi traslazionali, il tumore cerebrale del topo viene monitorato mediante risonanza magnetica in vivo e istopatologia.

Modelli ortotopici traslazionali di glioblastoma multiforme

Questo protocollo presenta le tecniche e la metodologia necessarie per la terapia ipertermica mirata in modelli di tumori solidi. L'approccio sfrutta la conversione fototermica della luce nel vicino infrarosso mediante nanobarre d'oro iniettate per via intratumorale per indurre un riscaldamento localizzato all'interno del microambiente tumorale.

Induzione di una lieve ipertermia mirata in modelli di tumore murino attraverso la conversione fototermica della luce nel vicino infrarosso mediante nanobarre d'oro intratumorali

L'obiettivo di questo protocollo è fornire ai ricercatori una tecnica altamente riproducibile per le impianti intracraniche.

Impianto intracranico stereotassico di linee cellulari xenoinnestate derivate dal paziente con glioblastoma nei topi

Scopri la terapia termica interstiziale laser per il trattamento del glioblastoma inoperabile utilizzando modelli murini immunocompetenti. Questo metodo permette di valutare l'efficacia del trattamento termico sul tumore cerebrale.

Un modello murino immunocompetente per la terapia termica interstiziale laser del glioblastoma

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